薄层色谱法在牛黄消炎片中非法成分土大黄苷检测中的应用研究

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　　【摘  要】目的 通过实验探讨薄层色谱法（TLC）检测牛黄消炎片中非法成分土大黄苷的应用价值。方法 制备牛黄消炎片供试品溶液、大黄对照品溶液、土大黄苷对照品溶液，将三种溶液各5μL点样于同一硅胶G板，分别在①氯仿：甲醇：甲酸：水（10：3.5：0.2：0.3）、②甲苯：甲酸乙酯：丙酮：甲酸：甲醇（30：5：5：0.1：20）、③苯：甲酸乙酯：甲酸：甲醇（30：10：0.1：15）这三种不同的展开剂中展开，置紫外灯下检视。结果 ③号展开剂分离度好、斑点显示更清晰，为最佳展开剂;待测牛黄消炎片样品溶液为不合格样品。结论 TLC用于检测牛黄消炎片中非法成分土大黄苷具有操作简便、快捷的优点，选择合适的展开剂可获得可靠的色谱分析结果，薄层色谱法具有进一步推广应用的价值。
　　【关键词】土大黄苷;牛黄消炎片中成药;薄层色谱法
　　牛黄消炎片为经典的中成药，处方组成包括人工牛黄、大黄、珍珠母、天花粉、雄黄、蟾酥、青黛，一些不法分子用土大黄充当正品大黄，因此导致市面上出现了《中华人民共和国药典》收载品种以外的牛黄消炎片中成药，亟需通过有效监测来辨别真伪品并控制假劣药流向市场。药典中对土大黄苷检测项采用纸色谱法[1]，但实践中发现本法的分离效果欠佳。本文旨在通过实验建立快捷、方便、专属性强的薄层色谱法鉴别方法，现报道如下。
　　1 材料与方法
　　1.1 实验材料与仪器 牛黄消炎片为市面销售品;对照品采用中国药品生物制品检定所提供的大黄对照药材、土大黄苷对照品;毛细管、自制硅胶G薄层板;试剂均采用分析纯试剂。仪器包括高速多功能粉碎机、电子分析天平、超声波振荡器、紫外透射放射仪。
　　1.2 实验方法
　　1.2.1 供试品溶液的制备 取待检牛黄消炎片5片，去掉糖衣层、片芯粉碎，过4号筛，称取0.5g药物粉末置于锥形瓶中，加甲醇20ml，经超声处理20min，滤过并取滤液10ml蒸干溶剂，加水20ml溶解，加盐酸2ml置水浴上30min，之后取出立即冷却，用乙醚20ml分两次进行振摇提取，将两次的乙醚提取液合并，蒸干，在残渣中加氯仿1ml使之溶解，即得供试品溶液。
　　1.2.2 大黄对照品溶液的制备 称取大黄对照药材粉碎，过4号筛，称取0.5g粉末置于锥形瓶中，按1.2.1项供试品溶液制备的方法制备大黄对照品溶液。
　　1.2.3 土大黄苷对照片溶液的制备 取土大黄苷对照品，加甲醇制成含大黄苷2mg/ml的溶液。
　　1.2.4 薄层色谱法鉴别 硅胶板于105℃烘箱中活化30min，保存于干燥器中备用。分别吸取供试品溶液、大黄对照品溶液、土大黄苷对照片溶液各5μL，点样于同一块自制硅胶G板上，共点3个硅胶板，为了选择合适的溶剂，在3种不同的展开剂中上行展开。参考文献报道[2]，分别选用①氯仿：甲醇：甲酸：水（10：3.5：0.2：0.3）、②甲苯：甲酸乙酯：丙酮：甲酸：甲醇（30：5：5：0.1：20）、③苯：甲酸乙酯：甲酸：甲醇（30：10：0.1：15）3种展开剂。观察3种展开剂的荧光斑点显示情况，计算分离度，选择合适的展开剂。
　　1.2.5 定性 硅胶板在展开系统中充分展开之后，取出晾干，于紫外灯（365nm）下检视，若牛黄消炎片供试品溶液色谱中，与土大黄苷对照片色谱相应位置上无类似斑点，且与大黄对照片色谱中相同位置显出相同斑点，则认为此牛黄消炎片为合格产品。
　　2 结果
　　2.1 不同展开系统的系统适用性分析 三种展开剂系统均能分离出样品中的各成分，大黄对照品色谱共展开5个斑点，编号为㈠～㈤。结果显示①号展开剂的㈠㈡斑点之间、㈣㈤斑点之间的分离度<1.5，分离度不符合要求;②、③号展开剂均获得较好的分离度;③号展开剂的斑点显示较②号更明显、清晰。
　　表1 3  种不同展开系统的比移值、分离度分析对比
　　①氯仿：甲醇：甲酸：水
　　（10：3.5：0.2：0.3）
　　②甲苯：甲酸乙酯：丙酮：甲酸：甲醇
　　（30：5：5：0.1：20）
　　③苯：甲酸乙酯：甲酸：甲醇
　　（30：10：0.1：15）
　　比移值（Rf）
　　大黄对照品
　　㈠0.125、㈡0.144、㈢0.263、㈣0.469、㈤0.500
　　㈠0.230、㈡0.315、㈢0.389、㈣0.667、㈤0.745
　　㈠0.230、㈡0.315、㈢0.389、㈣0.667、㈤0.745
　　土大黄苷对照品
　　0.375
　　0.545
　　0.554
　　大黄对照品各斑点
　　的分离度（R）
　　1.2、2.0、15.7、1.4
　　4.7、4.8、15.3、3.25
　　5.67、5.00、13.71、3.71
　　2.2 鉴别结果 待测样品牛黄消炎片溶液色谱图中，在与土大黄苷对照品色谱相应的位置上，显示出相同橙红色至黄色斑点，判断此牛黄消炎片中含非法成分土大黄苷，为不合格产品。
　　3 讨论
　　大黄是广泛应用的一种传统中药，《中华人民共和国药典》中收载的正品大黄为蓼科大黄属掌叶组的掌叶大黄 Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim.Ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。伪品大黄主要是土大黄，土大黄苷为伪品特有的化学成分，因此可用来鉴别正伪品。
　　薄层色谱法是一种较为常用的药物鉴别方法，在实际工作中，薄层色谱法用于鉴别药物时受到的影响因素很多，薄层板的厚度、展开剂的组成、展开剂预饱和时间、点样量的多少、药物本身的性质等，均可不同程度影响到实验结果。
　　实验结果显示，在本次实验中，对3种不同展开剂进行对比，苯：甲酸乙酯：甲酸：甲醇（30：10：0.1：15）是一种较为理想的展开剂，色谱图中各斑点的分离度达到分离要求（R>1.5），而且斑点显示较另外两种更为清晰，初步认为是用于分离、鉴别牛黄消炎片中成分的一种比较理想的展开剂。
　　参考文献：
　　[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].2010年版一部.北京：中国医药科技出版社，2010：：2.
　　[2]尚磊.薄层色谱法鉴别大黄饮片真伪[J].食品与药品，2014，16（3）：201-203.
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