EDTA―2Na（乙二胺四乙酸二钠）检验方法的探讨
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摘要：下文主要结合笔者多年的工作实践经验，利用水提取食品中EDTA-2Na，加入还原剂使EDTA与铜形成络合物，利用液相色谱仪检测其络合物峰。加入三价铁，使EDTA-Cu络合物分解形成EDTA-Fe络合物，来确证EDTA的存在。该方法定性定量准确，测定过程快速。
关键词：材料与方法 EDTA-2Na 结果
引言
EDTA-2Na GB 2760-2011食品添加剂使用标准定义其功能类别为鳌合剂、防腐剂、抗氧化剂、加工助剂，易溶于水，不溶于乙醚。其主要原理是食品中金属离子的存在会促使某些食品变质，EDTA-2Na能螯合溶液中的金属离子，防止金属引起的变色、变质、变浊和VC的氧化损失，还能提高油脂的抗氧化性（油脂中的微量金属如铁铜等能促进油脂氧化的作用），用于罐头类食品可保持色、香、味，还可用于酱菜、罐头的稳定和凝固剂。
但是EDTA对人体有害，其ADI值为0.205mg/kg，国外对EDTA在食品中的残留量有严格的限量规定。日本规定罐头食品中EDTA的残留（以EDTA-2Na计）不得超过250mg/kg，饮料中不得超过35mg/kg。我国GB2760-2011在酱菜和罐头中规定不得超过0.25g/kg。测定不同介质中EDTA的方法有比色法、滴定法和高效液相色谱法、离子色谱法等。滴定法和比色法很难将EDTA络合物和其他络合物区分，测定结果不能令人满意。高效液相色谱法是通过检测EDTA的金属络合物EDTA-Fe或EDTA-Cu对EDTA进行测定，本文通过对EDTA-Cu进行测定，又利用EDTA-Fe络合物的稳定系数高于EDTA-Cu络合物而加入三价铁，使EDTA-Cu络合物分解形成EDTA-Fe络合物，来确证EDTA的存在。
1、材料与方法
1.1仪器：
Agilent1200高效液相色谱仪（配有二极管阵列检测器）；超声波清洗仪FS-1012FPM（常州市富怡达超声波设备有限公司）
1.2试剂：
四丁基溴化铵、抗坏血酸、甲醇（色谱级）；除另有规定外，试剂均为分析纯，水为去离子水。
CuSO4溶液：称1.6g（精确至0.0001g）硫酸铜放入100mL的容量瓶，加去离子水定容，充分摇匀；
FeCl3溶液：将1.62g（精确至0.0001g）三氯化铁用去离子水定容至100mL，充分摇匀。标准液的制备Na2EDTA标准储备液（1000μg/mLEDTA）：精确称取称0.1g（精确至0.0001g）Na2EDTA，放入100mL容量瓶，用去离子水定容。标准工作液：配制0.5、10、25、50、100μg/mL浓度的EDTA标准溶液混匀后于室温环境下放置20～24h使用。
1.3样品处理方法
精确称取5g（精确至0.0001g）试样于50mL具塞试管中，加入20mL水，超声提取10min，充分提取后加抗坏血酸20mg和3mLCuSO4溶液，用水定容。在室温下放置20～24h，用0.45μm滤膜过滤，滤液供液相色谱测定。
做确证试验时在上述滤液中加入5mLFeCl3溶液，放置20min，液相色谱测定观察特征峰的位置变化。
1.4仪器条件
色谱柱：AgilentTC-C18，5μm，150mm×4.6mm；流动相：A―0.03mol/L乙酸钠溶液和0.02mol/L四丁基溴化铵水混合液，用磷酸调节pH=4；B―甲醇；A：B=75：25。
流速：1.0mL/min；进样量：20μL；柱温：25℃，检测波长：254nm。
2、结果与分析
2.1线性关系
在本方法所确定的条件下，EDTA在0.5～100μg/mL范围内进行色谱测定，并绘制标准曲线，得色谱峰面积（y）与质量浓度（x，μg/mL）得线性方程为y=10.113x-0.0034，相关系数r=0.99964。试验结果表明，本方法所选添加均在方法的线性范围内。
2.2精密度及回收率实验
采用样品添加法测定回收率及精密度。在榨菜中分别添加7μg/mL、20μg/mL、40μg/mL三个水平的EDTA，平均回收率分别为：91.6%、95.5%、98.8%（n=6），RSD分别为：2.5%、2.4%、1.6%；在水果罐头中分别同样三个水平的EDTA，平均回收率分别为：93.3%、95.9%、98.7%（n=6）RSD分别为：2.2%、2.8%、2.2%；在饮料中分别添加同样三个水平的EDTA，平均回收率分别为：96.3%、97.1%、97.6%（n=6）RSD分别为：1.3%、1.9%、1.6%，在酱菜中分别添加同样三个水平的EDTA，平均回收率分别为：93.8%、95.5%、97.8%（n=6）RSD分别为：2.5%、2.2%、2.4%。
2.3样品处理方法的选择
处理条件的确定因为EDTA络合物系水溶性，因此可以用水来提取，这样即节约成本又能够减少有机溶剂的使用量从而保护环境，提取液中加入还原剂使EDTA与铜形成络合物，经过这样的处理后样品的测定能够达到非常满意的回收率。
另外在样品处理过程中我们选择了1、2、3、4、5mLCuSO4溶液，1、2mLCuSO4溶液与标准溶液反应测得的Cu-EDTA络合物峰面积远远小于3、4、5mLCuSO4溶液测得的Cu-EDTA络合物峰面积，3、4、5mLCuSO4溶液测得Cu-EDTA络合物峰面积差不多，故而选择加入3mLCuSO4溶液。
2.4仪器条件的选择
文献报道的色谱条件有的需要在较低的pH环境下测定，有的则要求较高的柱温，本实验摸索了流动相条件，利用TC-C18柱在室温条件分离后进行检测，试验表明，EDTA-Cu络合物在254nm时有较大的吸收，故确定254nm为检测波长。其色谱图和光谱图见图1和图2。
图1 乙二胺四乙酸标准品色谱图
图2 乙二胺四乙酸标准品光谱图
2.5确证实验
根据EDTA-Cu和EDTA-Fe稳定系数的差异，可以确证是否存在EDTA，若存在EDTA，按照测定方法可以检测到EDTA-Cu络合物的色谱峰（见图3），但是若在供HPLC分析的试液中加入Fe2（SO4）3溶液，EDTA-Cu络合物将分解，形成更加稳定的EDTA-Fe络合物（见图4）。用此方法可以确证EDTA的存在。
图3 样品中形成EDTA- Cu络合物的色谱图
图4 确证实验形成更稳定的EDTA- Fe络合物色谱图
2.6方法检测限
本方法对花生酱、罐头、饮料、榨菜样品进行了定量测定，测定低限均为5mg/kg.
3、结论
本实验采用高效液相色谱检测食品中添加剂EDTA的残留量，以保留时间定性与外标法定量。EDTA-2Na在0.5～100μg/mL的浓度范围内，线性相关系数R为0.9996，加标回收率在91.6%～98.8%之间，相对标准偏差为1.3～2.8%。该方法准确度、精密度均较高。
参考文献：
[1] 吕晓华，文红，许红琴等. 高效液相色谱法测定板栗罐头中乙二胺四乙酸二钠的含量[J].中国卫生检验杂志，2009（03）45～46.
[2] 郑睿行，张旭，方芳等. 高效液相色谱法测定酱腌菜制品中 EDTA 残留量[J].中国食品添加剂，2011（02）60～61.
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