探讨酶联免疫吸附试验在包虫病诊断中的应用价值

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　　[摘要] 目的 通过临床病例资料分析探讨酶联免疫吸附试验在包虫病诊断中的应用价值，为今后的临床工作提供思路。方法以该院2014年1月―2014年12月期间收集的150份人血清样本作为该组研究的检测对象，分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）与滴金免疫渗滤法（DIGFA）对该组150份血清进行包虫病检测，其中包括感染包虫病患者、疑似包虫病感染者以及健康人群血清各50份，对比两种检测方法在包虫病临床诊断中的敏感度与特异性。结果 DIGFA法在包虫病患者血清检测中的特异性抗体的敏感度为96%（48/50）、特异度为100%（50/50）；ELISA法在包虫病患者血清检测中的特异性抗体的敏感度为100%（50/50）、特异度为100%（50/50）；DIGFA与ELISA法检测结果符合率为91.67%，两组在特异性抗体的敏感度（χ2=0.141，P=0.24）与特异度（χ2=0.203，P=0.17）方面，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 DIGFA法与ELISA法在包虫病临床诊断中的敏感度与特异性均较高，其中ELISA法的敏感度更高，但是对检测时间、操作技能以及设备的要求较高，不适合作为现场流调使用。
　　[关键词] 酶联免疫吸附试验；包虫病；诊断
　　[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）09（b）-0010-03
　　[Abstract] Objective To investigate the value of enzyme linked immunosorbent assay （ELISA） applied to the diagnosis of hydatid disease via analysis of the clinical data so as to provide thoughts for the clinical work in the future. Methods 150 human serum samples（50 samples of patients with hydatid disease， 50 samples of patients suspected with hydatid disease， and 50 samples of healthy people ） collected from our hospital between January 2014 and December 2014 were selected as the subjects and measured by ELISA and dot immunogold filtration assay（DIGFA）， respectively. And the sensitivity and specificity of the two test methods for the clinical diagnosis of hydatid disease were compared. Results The sensitivity and specificity of DIGFA was 96% （48/50）， and 100% （50/50）， respectively， and that of ELISA was 100%（50/50）， 100% （50/50）， respectively， which showed that the coincidence of test results of the two methods was 91.67%. No statistically significant difference was found between the two groups in sensitivity（χ2=0.141， P=0.24） and specificity（χ2=0.203， P=0.17） （P>0.05）. Conclusion Both DIGFA and ELISA have high sensitivity and specificity in the diagnosis of hydatid disease. Compared with DIGFA， ELISA has higher specificity， but it is not suitable for field use because it needs higher requirement in test time， operating skills and equipment.
　　[Key words] Enzyme linked immunosorbent assay； Hydatid disease； Diagnosis
　　包虫病（hydatidosis），又称棘球蝴病（echinococcosis），呈全球性分布，属于人畜共患疾病。包虫病主要流行于畜牧地区，在我国此病多发于四川西部、青海、宁夏、新疆、西藏、甘肃、内蒙、陕西等地[1]，包虫可以在人体内存活数年，患者的临床表现与包虫的寄生部位、囊肿大小密切相关且不尽相同。机体免疫应答反应是包虫病感染早期的主要应激反应，免疫学诊断可以为该病的早期诊断提供重要诊断指标[2]。该文中将以该院2014年1月―2014年12月期间收集的150份人血清样本作为该组研究的检测对象，分别采用ELISA与DIGFA对血清进行包虫病检测，其中包括感染包虫病患者、疑似包虫病感染者以及健康人群血清各50份，对比两种检测方法在包虫病临床诊断中的敏感度与特异性，以探讨酶联免疫吸附试验在包虫病诊断中的应用价值，为今后的临床工作提供思路， 现报道如下。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　分别采用酶联免疫吸附试验（ELISA）与滴金免疫渗滤法（DIGFA）对该院采集的150份血清进行检测，其中包括感染包虫病患者（感染组）、疑似包虫病感染者（疑似组）以及健康人群（健康组）血清各50份。感染组中，男性29例，女性21例；年龄6～67岁，平均（43.64±4.49）岁。疑似组中，男性27例，女性23例；年龄8～62岁，平均（41.47±5.15）岁。健康组中，男性27例，女性23例；年龄8～66岁，平均（42.53±5.41）岁。3组人员均来自同一牧区，且在性别、年龄方面差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。 　　1.2 方法
　　1.2.1 试剂 ①DIGFA-检测：试剂盒采用包虫病金标快速诊断（DIGFA-kit）试剂盒（批号20011015）；小牛血清（批号 100419）；鼠抗人联辣根过氧化物酶抗体[IgG（H+L）]（批号：KL12737640）；②ELISA检测：包虫lgG抗体诊断试剂盒（批号20031109）。
　　1.2.2 检测方法 ①DIGFA-检测：将血液样本经A液稀释后（1：5），加100 μL于反应板的小孔中，渗入后加B液3滴，渗入后加C液3滴，渗入后加B液3滴，3 min后即可对结果进行评定；检测结果评定标准由中国新疆包虫病临床研究所[3]提供：肉眼观察以C点（+）为单房包虫病（细粒棘球蝴病）；D点（+）为多房包虫病（泡球蝴病）。
　　②ELISA检测：将待检血液样本经稀释液稀释后（1：100）按常规ELISA法操作[4]；计算样本与阴性对照的A值之比（S/N）≥3.0为阳性，S/N <3.0，为阴性。
　　1.3 统计方法
　　应用 SPSS 15.0软件分析数据，计数资料采用百分比（%）表示，数据对比采取χ2检验，P>0.05表示差异有统计学意义，
　　2 结果
　　DIGFA法在包虫病患者血清检测中的特异性抗体的敏感度为96%（48/50）、特异度为100%（50/50）；ELISA法在包虫病患者血清检测中的特异性抗体的敏感度为100%（50/50）、特异度为100%（50/50）；DIGFA与ELISA法检测结果符合率为91.67%，两组在特异性抗体的敏感度（χ2=0.141，P=0.24）与特异度（χ2=0.203，P=0.17）方面差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
　　3 讨论
　　包中病是指由细粒棘球绦虫（单房棘球绦虫）的幼虫，即细粒棘球蝴（cystic echinococcosis，CE）和多房棘球绦虫（泡性棘球绦虫）幼虫，即泡球蝴（alveococcosis，AE）所导致的寄生虫病的统称[5]。临床中根据寄生虫虫种的不同将包虫病分为囊型包虫病（cysticechinococcosis，CE，单房型包虫病）、泡型包虫病（alveolar echinococcosis，AE，多房型包虫病）以及混合型包虫病3种，混合型包虫病是由伏氏棘球绦虫或少节棘球绦虫的幼虫共同致病，在我国尚未见此类病例。CE和AE都属于食源性疾病，终宿主以犬、狼、狐等食肉动物为主，虫卵会随宿主粪便排出体外，被人类误食后即会感染包虫病。牧区一般均为山区，而且全年气候干旱少雨，生活区域内犬、狼、狐等动物的粪便密度高，污染源众多，因此是包虫病的主要流行区，个别村落人群包虫病的感染率可高达28.83%[6]，严重影响当地居民的身体健康。
　　现阶段临床中针对包虫病的检测与诊断以腹部超声检测与血清学检测为主，腹部超声检测可以直观地显示包虫的存在，而且对于被机体的免疫系统消灭包虫病后出现的吸收瘫痕或钙化灶等具有良好的鉴定价值[7]，但是由于包虫病的潜伏期较长，且以慢性损伤为主，早期感染并无明显的症状与体征，因此超声检查对包虫病的早期筛查效果非常有限。
　　近年来，血清学检测方法以其操作简便、敏感性高、特异性强、成本低廉等优势在临床中的应用程度越来越高，其经常与超声检测、B超检测等联合应用，已经成为包虫病临床筛查与诊断的重要手段之一。
　　DIGFA法最早主要用于HIV抗体的检测，其工作原理主要是利用微孔滤膜的垂直渗透浓缩，使标本中的抗包虫病特异性抗体与N・C膜包被的抗原快速形成抗原抗体复合物[8]，然后加入胶体金标记的抗体，由于胶体金肉眼可见，因此阳性反应会在膜上呈现红色斑点，阴性反应则不形成红色斑点。DIGFA法操作简便、速度快，对环境与设备的要求较低，因此近年来在其他传染病的免疫检测中的应用程度越来越高。
　　ELISA法在包虫病早期诊断中的应用主要是由于机体在包虫抗原的刺激下会产生IgM抗体， IgG替代IgM并成为抗包虫特异性免疫球蛋白的主要组成部分，导致IgM抗体水平下降， IgG浓度在体内持续升高。ELISA与DIGFA法相比，对环境、操作人员技术以及设备等要求较高，因此对其推广有所局限。
　　该研究中，DIGFA法在包虫病患者血清检测中的特异性抗体的敏感度为96%、特异度为100%；ELISA法的敏感度为100%、特异度为100%；DIGFA与ELISA法检测结果符合率为91.67%，两组在特异性抗体的敏感度（χ2=0.141，P=0.24）与特异度（χ2=0.203，P=0.17）方面，差异无统计学意义，与欧仕颖等[9]研究相符。
　　综上所述，DIGFA法与ELISA法在包虫病临床诊断中的敏感度与特异性均较高，其中ELISA法的敏感度更高，但是对检测时间、操作技能以及设备的要求较高，不适合作为现场流调使用。
　　[参考文献]
　　[1] 黄菱，李正直，李燕兵，等.两种特异抗体检测与B超诊断在包虫病流行病学调查中的应用[J].宁夏医科犬学学报，2012，34（6）：557-560.
　　[2] Feng X，H.wen，z zhang，et al.Dot immunogold filtration assay （DIGFA）w ith multiple native antigens for rapid serodignosis of human cystic and alveolar echinococcosis[J].Acta Tropica，2010，113（2）：114-120.
　　[3] 李宗吉，赵巍，王娅娜，等.细粒棘球蚴重组抗原mMDH用于囊型包虫病血清学诊断的初步研究[J].宁夏医科大学学报，2012，33（3）：216-218.
　　[4] 郑云太.采用B型超声波、酶联免疫吸附试验诊断包虫病探讨[J].中华流行病学杂志，2014，11（25）：1005.
　　[5] Yang YR，Craig PS，Vuitton DA，et al.Serological prevalence of echinococcosis and risk factors for infection among children in rural communities of southern Ningxia，China[J].Trop Med Int Health，2008，13（8）：1086-1094.
　　[6] 刘海青，赵延梅，吴献洪，等.青海省治多县人群包虫病血清流行病学调查[J].现代预防医学杂志，2009，36（2）：366.
　　[7] Yang YR，Craig PS，Ito A，et al.A correlative study of ultrasound with serology in an area in China coendemic for human alveolar and vystic echinococcosis[J].Trop Med Int Health，2007，12（5）：637-646.
　　[8] Rausch RL，Wilson JF，Schantz PM，et al.Spontaneous death of Echinococcus multilocularis：cases diagnosed serologically （by Em2 Elisa） and clinical signifocance[J].The American Journal of Tropical Medicine and Hyginene，1987（36）：576-585.
　　[9] 欧仕颖，余长芳.用DIGFA，ELISA两种免疫诊断方法检测包虫病的综合评价[J].现代检验医学杂志，2011，26（5）：121-123.
　　（收稿日期：2015-06-11）
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