细菌β内酰胺酶表型纸片检查法的进展

来源:用户上传      作者: 王 建张爱莲

　　关键词 β内酰胺酶 表型 纸片法
　　doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.15.170
　　细菌β内酰胺酶,尤其是革兰阴性菌产生的广谱酶(ESBLs)AmpC(C类酶)。金属酶(B类酶)和D类酶(主要有OXA酶)引起的耐药性,尤其是B和D类酶均可使碳青酶烯类抗生素失效,使细菌耐药问题更加严重。
　　ESBLs表型纸片检查的最佳方案
　　ESBLs筛查试验:同时用头孢他啶(抑菌环≤22mm)和头孢泊肟(抑菌环≤17mm),或同时用头孢他啶和头孢三嗪(抑菌环≤25mm)。
　　据研究如单用头孢他啶,会遗漏TEM-20、25,SHV-3、5、7,CTX-M-5、14、15;单用头孢噻肟会遗漏TEM-7、10、11、12、26,SHV-5、6、7;单用氨曲南(≤27mm),会遗漏TEM-7、20、25,SHV-3、6;单用头孢泊肟会遗漏TEM-11、12,SHV-6;单用头孢三嗪,会遗漏TEM-7、10、11、SHV-6、18;同时用头孢他啶和头孢噻肟会遗漏TEM-5、7,同时用头孢他啶和氨曲南,会遗漏TEM-20、25,SHV-3。
　　(ESBLs)确证试验:应用CLSI/NCCLS推荐法,同时用头孢他啶加棒酸和头孢噻肟加棒酸。如单用头孢噻肟加棒酸,会遗漏TEM-5、7、10、11、12、26、61,SHV-5、6;单用氨曲南加棒酸,头孢三嗪TEM-10、12、25,SHV-6,CTX-M-15;单用头孢泊肟或头孢三嗪,会遗漏多种,同时用头孢他啶和氨曲南,会遗漏CTX-M-15;同时用头孢他啶和头孢噻肟无遗漏。
　　AmpC酶
　　AmpC酶分为染色体酶和质粒介导酶。检测AmpC酶现用方法有头孢西丁筛查法,可同时筛查ESBLs和AmpC酶。国内已有些报道,新的纸片方法有以下几种。
　　质粒介导的AmpC酶的简易检查法。在M-H平板上均匀涂大肠埃希菌ATCC 25922贴头孢西丁纸片于涂菌平板上37℃温育过夜,观察头孢西丁的抑菌环有无缺损。
　　质粒介导的AmpC酶的纸片法。(DDST)特异性抑制物用3-氨基苯硼酸或3-硝基苯硼酸或3-硫苯硼酸。将待测菌株均匀涂于M-H平板,加头孢他啶和头孢噻肟各1片,37℃温育过夜,两纸片间有抑菌环增大(>5mm)者为阳性。
　　资料表明,用头孢噻肟的抑制试验,ACT-1、MOX-2酶可为阴性。用头孢西丁的效果最佳。它几乎不受ESBLs和碳青酶烯酶的干扰,只有ACT-1酶可为阴性,因此酶对头孢西丁几乎无活性。
　　诱导型AmpC酶检测法:强诱导剂用亚胺培南纸片,将待检菌涂在M-H平板,将IMP纸片贴在中央,四周贴四个底物纸片,头孢西丁、头孢他啶、头孢噻肟和哌拉西林/他唑巴坦,弱诱导剂用头孢西丁纸片,底物用哌拉西林纸片温育18～24小时,观察,任意临近诱导物的抑菌环减小2mm及2mm以上者为阳性。经检测,铜绿假单胞菌、肠杆菌、枸橼酸杆菌、沙雷菌等总阳性率为85.5%。
　　碳青酶烯酶的筛查法
　　可水解碳青酶烯的酶有A.D类的(OXA酶)和B类金属酶。金属酶发现有染色体酶多种。分为B1、B2、B3三组。非染色体酶有IMP酶、VIM酶、SPM、GIM酶等,此类酶可水解碳青酶烯类抗生素,故应用金属离子偶螯合剂祛除锌离子以灭活酶的活性,即抑制法。
　　EDTA与亚胺培南和头孢他啶的双纸片抑制法,此法的EDTA浓度和药物底物应优选。巯基丙醇与头孢他啶和亚胺培南双纸片抑制法。但此抑制剂有毒性,应用适当的浓度。MBL商品纸片,加有EDTA胺培南纸片,与不加EDTA者对照。
　　酶类的筛查法
　　D类酶以OXA酶为主,与一般A类酶最具临床意义的区别是对碳青酶烯类耐药。
　　用表型纸片法提示细菌孔蛋白的缺失(耐药膜)在纸片法筛查上述酶类时,应认真观察是否同时存在细菌的孔蛋白缺,此类资料目前只适用于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。
　　参考文献
　　1 王金良,沈定霞,罗艳萍,周光,曹敬荣,等.β内酰胺酶和肺炎克雷伯菌的纸片及表型检测.江苏临床检验杂志,2007:32-1204.

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