乙肝病毒血清学标志物定量检测的临床应用价值
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作者: 施保华
【Abstract】 Objective 探讨乙肝病毒血清学标志物定量检测的临床应用价值。方法 2010年1月至2010年6月申请做乙肝两对半的血清样本204例，进行定量TRFIA法和定性的ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物。结果 两种检测方法乙肝病毒血清学标志物各项阳性率比较，P＜0.05，差异有统计学意义。结论 乙肝定量检测的临床应用价值明显，可以检出低水平复制的标本，避免漏检，可以解决隐源性肝炎HBV标志物的诊断难题；量化的乙肝病毒血清学标志物指标对临床诊治起到良好的指导作用。
【关键词】 乙肝病毒； 血清学标志物定量检测； 应用价值
我国是乙型病毒性肝炎(下称乙肝)感染率较高的国家10％以上为乙肝携带者，感染率非常高，而低浓度在人群中的分布率为0．53％。目前采用标记免疫学方法检测乙肝病毒(HBV)五项血清学指标是诊断HBV感染的主要手段。传统的酶联免疫吸附试验(ELISA)法只能定性测定，时间分辨荧光免疫分析（time resolved fluoroimmuno assay，TRFIA）技术是一种新型免疫标记技术［1］，是一种能定量检测HBV标志物新的检测方法，为了能够全面了解乙肝定量检测的临床应用价值，作者进行了研究，现汇报如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 采取2010年1月至2010年6月申请做乙肝两对半的血清样本204例。其中男124例，女80例；年龄14~68岁。
1.2 标本采集 对204例采集晨起空腹肘静脉血3 ml，于当日分离血清，-70度保存，并于24 h内检测。
1.3 仪器 TRFIA法采用罗氏电化学发光仪，上海新波生物技术有限公司生产的Anytest 2000时间分辨荧光测定仪，试剂由上海新波生物技术有限公司提供。ELISA法采用An-thos2010/HT酶标分析仪以及美国Abbouu公司生产的Axsym全自动免疫分析仪。TRFIA法试剂由上海新波生物技术有限公司提供。
1.4 检测内容及方法 检测乙肝病毒血清学标志物：乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（抗-HBs）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（抗-HBe）、乙肝核心抗体（抗-HBc）。定量TRFIA法和定性的ELISA法检测，均严格按照试剂盒各自说明书和《全国临床检验操作规程》中的要求，两种方法同时分别对不同浓度的标准品和临床标本进行检测。TRFIA法HBsAg≥0.5 ng/ml，抗-HBs≥10 mlU/ml，HBeAg≥0.5 PEIU/ml，抗-HBe≥0.2 PEIU/ml，抗-HBc≥0.9 PEIU/ml为阳性。
1.5 观察内容 观察两种检测方法阳性率并进行比较。
2 结果
对204份血清标本采取两种方法检测进行统计乙肝病毒血清学标志物各项的阳性结果及阳性率，并进行比较，具体见表1。
3 讨论
乙肝病毒血清学标志物的变化是评估乙型肝炎病毒感染后病情转归的重要依据, 也是抗病毒治疗的疗效考核指标之一［2］。目前常用的ELISA法，主要有以下缺点：无法定量；灵敏度低；由检测原理带来的前带现象不易解决；易传染，无法达到HBV感染的动态观察以及低水平HBV感染指标检测，只能满足临床对单纯阴、阳性结果的判断。
TRFIA是三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物［3］，如铕、铽 及钐、镝等代替传统的荧光物质、放射性同位素、酶和化学发光物质，来标记抗体、抗原、多肽、激素、核酸探针或生物活性细胞，待反应体系（如抗原抗体免疫反应、生物素（链）亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等）发生后，用时间分辨荧光仪测定最后产物中的荧光强度，根据荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。
ELISA由于多种因素影响(如孵育时间、温度和污染等)会产生显色较弱的假阳性，对低水平阳性值有必要进行双孔复查实验或中和确认实验。时间分辨荧光免疫分析技术属全自动检测仪，能提供稳定均一可靠的试验条件，避免由人为因素所引起的加样误差［4］。
在急性乙肝早期能及早检出HBsAg，确证HBV感染，缩短窗口期；其次，可发现低浓度HBsAg携带者；在部分慢性乙肝患者中，由于机体缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，酶标检测可出现HBsAg和抗一HBs均阴性的情况，定量检测则可避免这些情况的发生，为正确判断病情提供依据［5］。ELISA定性相比，用TRFIA定量测定乙肝五项指标给了临床一个量化指标，使结果更直观，尤其在检测乙肝疫苗的免疫效果、药物疗效观察方面，更显出其重要性。
通过本组病例采用两种检测方法进行乙肝病毒血清学标志物检测，乙肝定量检测（TRFIA）各项阳性率均高于ELISA法，P＜0.05，差异有统计学意义。总之，乙肝定量检测的临床应用价值明显，可以检出低水平复制的标本，避免漏检，可以解决隐源性肝炎HBV标志物的诊断难题；量化的乙肝病毒血清学标志物指标对临床诊治起到良好的指导作用。
参 考 文 献
［1］ 张运洪．ELISA结合MEIA能有效检测低水平HBsAg．临床检验杂志，2002，20(2):103.
［2］ 卫国，王福生，陈菊梅．病毒载体动态检测在乙型肝炎治疗和研究的意义．中华肝脏病杂志，2003，11(1):54-56.
［3］ 黄妩姣．不同检测系统甲胎蛋白测定结果的可比性研究．检验医学，2006，21(4):360-363.
［4］ 王岚，沈立松．不同方法检测乙型肝炎血清学标志物的结果比较．检验医学，2004，19(6):535-537.
［5］ 胡志刚．时间分辨免疫荧光定量检测乙型肝炎病毒的研究．中华检验医学杂志，2006，29(5):407.
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