EGFR、P16、Ki67和P53在宫颈鳞状上皮内瘤变和宫颈鳞状细胞癌中表达的临床意义

来源:用户上传      作者: 丛玲华　戴珍珍　方来福　王静　李萍　钟国平

　　[摘要] 目的 探讨EGFR、P16、Ki67和P53在宫颈病变组织中的表达及临床意义。 方法 应用免疫组化SP法检测84例宫颈鳞状上皮内瘤变（CIN）和30例宫颈鳞癌中EGFR、P16、Ki67和P53的表达，另选取20例正常宫颈组织作为对照。 结果 EGFR、P16、Ki67和P53在正常宫颈组织中阳性率分别为10.00%、0、5.00%及5.00%；在CIN中阳性率分别为33.33%、82.14%、54.76%及47.62%；在宫颈鳞癌中阳性率分别为56.67%、100.00%、86.67%及76.67%，差异均有统计学意义（P < 0.05）。EGFR、P16、Ki67和P53表达强度均随宫颈病变的进展而增加，表达均有统计学意义（P < 0.05）。EGFR、P16、Ki67和 P53表达在CIN和鳞癌中两两比较均呈显著性正相关（P < 0.05）。结论 EGFR、P16、Ki67和P53可能参与了宫颈癌病变的发生及发展，联合检测四者可作为CIN分级与鳞癌诊断的重要参考指标。
　　[关键词] 宫颈上皮内瘤变；宫颈鳞癌；EGFR；P16；Ki67；P53；免疫组织化学
　　[中图分类号] R737.33 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）02-0087-04
　　宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，最常见的组织学类型是鳞状细胞癌，其发病是从宫颈鳞状上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）到浸润性癌的一个连续发展的过程。由于宫颈癌具有发展慢、发病隐匿的特点，早期可无明显症状，因此在宫颈癌前病变阶段找到预示病变进展的标志物对宫颈癌防治意义重大，是宫颈癌得以早期诊断进而提高治愈率和生存率的关键。
　　近年来，国内外研究表明，宫颈上皮肿瘤的发生、发展及预后与多种基因蛋白的变化密切相关。表皮生长因子受体（EGFR）是蛋白酪氨酸激酶生长因子受体家族的一员，是一种相对分子质量为170 000的跨膜糖蛋白，其过表达与肿瘤的发生发展密切相关。P16是一种新型抑癌基因，参与了肿瘤发生发展的周期调控。Ki67是一种与增殖细胞相关的核抗原，是细胞增殖标记物，反映肿瘤的增殖活性。P53基因突变是人类恶性肿瘤最常见的一种分子改变。
　　本研究联合检测EGFR、P16、Ki67和 P53在宫颈病变中的表达和意义，旨在探讨四者在宫颈病变发生发展中的作用以及可能的诊断价值和治疗意义。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　所有标本均取自于我院2008年6月～2011年3月宫颈活检/锥切及手术切除标本，共114例，其中CIN 84例（CINⅠ24例，CINⅡ32例，CINⅢ28例），宫颈鳞癌30例，参照2003版WHO肿瘤病理学及遗传学分类：女性生殖器官肿瘤的宫颈肿瘤组织学分类标准。所有患者术前均未进行放、化疗和免疫治疗；另选取同院同期相应的20例正常宫颈组织作为对照。所有标本均经10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，4 μm切片。
　　1.2 方法
　　1.2.1 方法 鼠抗人EGFR单克隆抗体、鼠抗人P16单克隆抗体、鼠抗人Ki67单克隆抗体、鼠抗人P53单克隆抗体及SP试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组化SP法，以PBS代替一抗为阴性对照，以已知阳性片作为阳性对照。
　　1.2.2 结果判断 EGFR阳性定位于细胞膜或细胞浆，P16阳性定位在细胞核和（或）胞浆，Ki67和P53阳性定位在细胞核，凡出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞，以无阳性瘤细胞或阳性细胞数<10%为阴性；阳性瘤细胞>10%为阳性。其中按阳性细胞占肿瘤细胞百分比分为3个等级：阳性瘤细胞数占10%～25%为（+），占25%～50%为（++），>50%为（+++）。
　　1.3 统计学处理
　　应用SPSS 17.0统计软件进行χ2检验，以P﹤0.05为有显著性差异。
　　2结果
　　2.1 EGFR、P16、Ki67和 P53的表达
　　EGFR、P16、Ki67和P53在正常宫颈组织中阳性率分别为10.00%、0、5.00%及5.00%；在CIN中阳性率分别为33.33%、82.14%、54.76%及47.62%；在宫颈鳞癌中阳性率分别为56.67%、100.00%、86.67%及76.67%。四种蛋白在正常组、CIN组与鳞癌组相比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见图1～4及表1。
　　2.2 EGFR、P16、Ki67和 P53在不同宫颈鳞状上皮内瘤变分级中的表达
　　EGFR在CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ中阳性率分别为12.5%、37.5%和46.43%，在CINⅠ与CINⅡ，CINⅠ和CINⅢ中表达差异有统计学意义（P < 0.05）。P16在CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ中阳性率分别为62.5%、81.25%和100%，在CINⅡ和CINⅢ，CINⅠ和CINⅢ中表达差异有统计学意义（P < 0.05）。Ki67在CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ中阳性率分别为41.67%、50%和71.43%，在CINⅠ和CINⅢ中表达差异有统计学意义（P < 0.05）。P53在CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ中阳性率分别为29.17%、46.88%和64.29%，在CINⅠ和CINⅢ中表达差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。
　　2.3 EGFR、P16、Ki67和 P53在宫颈病变中表达的相关性
　　Spearman相关检验显示，在CIN和鳞癌中EGFR、P16、Ki67和 P53表达两两比较均呈显著性正相关（r1 = 0.208，r2 = 0.245，r3 = 0.221，r4 = 0.241，r5 = 0.224，r6 = 0.227，P <0.05）。 　　3 讨论
　　宫颈癌现已占女性恶性肿瘤的第2位，近年来发病率明显增高，且呈明显的年轻化现象。宫颈癌是由癌前病变，即CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ逐步发展到浸润性癌，但并非所有的CIN均进展为癌，从CIN发展为宫颈癌需经历较长时间，约10年左右。由于主观因素或病变不典型，常造成诊断上的漏诊或误诊，因此临床上多数CIN的女性患者经受了不必要的过度治疗，如能预测早期CIN病变进展，得到及时正确的诊断和恰当的治疗可避免CIN患者的过度治疗。
　　表皮生长因子受体（EGFR）广泛分布于人体器官中，是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，是原癌基因c-erbB-1的表达产物，是参与信号传导、细胞周期调控的关键分子，在许多恶性肿瘤中过表达[1，2]。本研究结果显示，EGFR表达随着宫颈病变的进展而增加，且随着CIN分级增加其阳性强度增加，与王珏[3]等、冯淑瑜[4]等报道一致，提示EGFR对宫颈癌的发生发展过程可能起促进作用，EGFR受体的激活可导致细胞无自主性增殖，从而导致恶性肿瘤的发生[5]，故EGFR对宫颈癌的早期诊治有一定指导意义，其高表达对宫颈癌的增殖及浸润有促进作用，可作为判定宫颈癌肿瘤细胞增殖活跃及预后的一个参考指标。
　　近年越来越多的研究表明，细胞生长周期的失调在人类肿瘤的发生中起重要作用。P16蛋白是1994年6月由Kamb报道的一种新型抑癌基因，在许多肿瘤中发生突变、缺失，引起细胞周期调节紊乱，使细胞无限制增生，甚至癌变。目前已有报道在多种恶性肿瘤中均有P16的失活[6]。本研究结果显示，P16蛋白的阳性表达率在正常宫颈组织与宫颈CIN以及宫颈癌组织相比较，差异显著，且随着CIN分级增加其阳性强度增加，与程淑霞等[7]、董磊等[8]报道一致，提示P16蛋白与宫颈癌的发生发展及其癌前病变有密切关系，P16蛋白的高表达是子宫颈正常组织-CIN-癌发生过程中的早期事件，Salit等[9]也曾报道，P16蛋白表达异常是肿瘤发生的早期事件。P16蛋白表达异常在恶性肿瘤发生发展中的重要作用可作为辅助临床评价肿瘤生物学行为及判断预后的辅助指标。因此，检测P16蛋白可帮助我们诊断宫颈癌前病变及宫颈癌，提高早期诊断率，从而进行早期及时的治疗。
　　Ki67是一个细胞增殖的相关蛋白，被广泛用以评估肿瘤细胞的增殖能力[10]，其表达与肿瘤的恶性程度及预后有关，在恶性肿瘤侵袭转移过程中起重要作用[11]。已有研究发现，Ki67有可能作为确定癌变人群高危个体的生物学标志物，其表达与多种肿瘤的发生发展、浸润转移有关。近年来文献报道[12，13]，多种肿瘤及癌前病变中均存在Ki67的过度表达，因此推测Ki67可能是一种原癌基因，其表达过度导致肿瘤的发生。本研究结果发现，随着宫颈病变的进展，Ki67指数逐渐增高，且随CIN级别的升高而升高，与谭伟坚等[14]报道相同，提示在宫颈癌发生发展过程中细胞增殖活性也逐渐增强，进一步证实了宫颈癌的发生是一个逐步发展的过程。Carreras等[15]研究也认为，Ki67与宫颈病变的严重程度相关，可作为鉴别诊断的指标。所以Ki67是一个在预测宫颈CIN和宫颈癌的发生发展中有重要参考价值的标记物，对肿瘤的治疗和预后有指导意义。
　　P53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因，其基因产物定位于细胞核，是一种细胞周期相关蛋白。P53蛋白分为野生型及突变型两种，野生型蛋白在正常细胞中呈低水平表达，突变型P53蛋白在肿瘤细胞中常常高表达，并失去抑癌功能，可引起细胞恶性增殖而导致肿瘤的发生及癌变。本研究结果显示，在正常宫颈组织、CIN 和宫颈鳞癌中P53阳性表达呈递增趋势且随宫颈CIN 分级增加而增加，与黄海萍等报道[16]一致，提示P53过表达在CIN及宫颈鳞癌的发生发展中起重要作用，其检测可为宫颈癌早期诊断和子宫颈上皮内瘤变指导治疗及判断预后。
　　当机体发生肿瘤时常常发现EGFR的过度表达。EGFR可促进肿瘤细胞的增殖，并抑制肿瘤细胞的凋亡[17]。Mathur等[5]研究发现，宫颈癌中HPV-E6/E7表达水平与EGFR表达存在相关性，推测HPV-E6/E7蛋白导致EGFR表达增高可能是通过肿瘤抑制基因P53介导的。P16抑制肿瘤细胞的生长，其缺失可导致肿瘤的发生。Ki67反映宫颈癌细胞增殖指数。本研究联合检测EGFR、P16、Ki67和P53在CIN和宫颈鳞癌中的表达，显示四者具有明显相关性，呈正相关，在宫颈病变肿瘤的发生发展中起协同作用，与宫颈癌前病变发生机制及病变进展相关，可作为早期诊断宫颈癌前病变及宫颈癌的标记物，对早期准确诊断有着积极的意义，其检测可作为宫颈CIN 分级与鳞癌诊断的重要辅助指标。EGFR、P16、Ki67和P53共同阳性表达率随着病变程度加重而增高，提示宫颈癌的发生是多基因调控、多因素协同作用所导致的，四者均参与子宫颈癌前病变及癌变的发生发展。
　　准确客观的肿瘤诊断和分级对临床进一步治疗以及预后评价是至关重要的，临床上多种基因的同时检测，能协助诊断子宫颈癌前病变及癌变，有效减少实际工作中的误诊和漏诊，从而为提高诊断子宫颈癌前病变及子宫颈鳞癌的准确率提供依据，有利于监控子宫颈癌的发生和发展以及预后的评估。因此，联合检测EGFR、P16、Ki67和P53的表达，了解四者可能在宫颈癌的发生发展中所起的重要作用，有可能对早期诊断子宫颈癌前病变及子宫颈癌、有选择地进行早期治疗、提高宫颈癌的治愈率和生存率、对估计患者的预后有重要的意义。
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　　（收稿日期：2012-11-22）
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