葡萄籽提取物原花青素一般药理学研究

来源:用户上传      作者: 陈会丛　翟建英　张广平　朱晓光　杨海润　张思玉　蒋威　李晋生

　　摘要：目的 观察葡萄籽提取物原花青素对实验动物心血管系统、中枢神经系统和呼吸系统的影响，为其进一步开发和使用提供一般药理学研究安全性评价实验数据。方法 采用十二指肠给药方式观察原花青素对麻醉犬呼吸频率和潮气量、收缩压、舒张压、平均动脉压、心率、心电图的影响；采用灌胃给药方式观察原花青素对小鼠自主活动行为和协调运动的影响，并观察原花青素对小鼠戊巴比妥钠阈剂量和阈下剂量睡眠的影响。结果 原花青素（857.00、214.29、42.86 mg/kg）对麻醉犬的潮气量和频率、血压、心率、心电图均无明显影响（P>0.05）；原花青素（428.57、214.29、42.86 mg/kg）对小鼠的自主活动行为和协调运动无明显影响（P>0.05），对戊巴比妥钠阈下剂量睡眠动物数和阈剂量睡眠潜伏期和睡眠时间无明显影响（P>0.05）。结论 原花青素对心血管系统、中枢神经系统和呼吸系统无明显不良影响。
　　关键词：原花青素；中药药理学；心血管系统；呼吸系统；中枢神经系统；犬；小鼠
　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.03.011
　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）03-0036-04
　　原花青素是天然植物多酚，在葡萄籽中含量最丰富，是葡萄籽提取物的主要成分。国外报道，葡多酚在 原花青素是天然植物多酚，在葡萄籽中含量最丰富，是葡萄籽提取物的主要成分。国外报道，葡多酚在
　　基金项目：国家高技术研究发展计划（2010AA023006）
　　通讯作者：李晋生，E-mail：yarily@126.com
　　体外具有清除自由基及抗脂质过氧化等活性，对氧化损伤有良好的防护作用[1-3]。近10多年来，国内外对多种植物中的原花青素进行了广泛深入研究，发现其具有抗氧化活性、酶抑制活性、血管保护活性、抗炎活性、抗肿瘤活性等，对自由基及机体抗氧化防御系统有明显影响[4-6]。原花青素的安全性评价研究目前大多集中在急性毒性和长期毒性研究，而一般药理学研究鲜有报道，为了进一步明确其安全性，本实验参考国家《中药、天然药物一般药理学研究技术指导原则》的相关技术要求观察了该成分对实验动物中枢神经系统、呼吸系统及心血管系统的影响，为其进一步的开发和使用提供更为翔实的一般药理学研究安全性评价实验数据。
　　1 实验材料
　　1.1 药物
　　原花青素，批号1104009-18，纯度为99.83%，天津市尖峰天然产物研究开发有限公司。
　　1.2 动物
　　Beagle犬，雌雄各半，体质量（10±2）kg，购自北京市海淀区兴隆实验动物养殖厂，合格证号：SCXK（京）2011-0006。ICR小鼠，SPF级，雌雄各半，体质量（20±2）g，购自北京大学医学部实验动物科学部，合格证号：SCXK（京）2011-0012。
　　1.3 主要试剂与仪器
　　戊巴比妥钠（Sigma公司），批号WS20090920。多导生理记录仪（美国BIOPAC公司），Millar导管（美国MILLAR INSTRUMENTS.INC公司），小鼠自主活动仪（SLY-REC行为事件记录仪，北京硕林苑科技有限公司）。
　　2 统计学方法
　　采用SPSS11.0统计软件进行分析。计量资料以―x±s表示，先行正态性检验和方差齐性检验，符合正态分布采用单因素方差分析，不符合正态分布采用非参数检验。计数资料采用卡方检验，等级资料采用秩和检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
　　3 实验方法与结果
　　3.1 原花青素对Beagle犬心血管及呼吸系统的影响
　　健康Bealge犬，24只，雌雄各半，随机分为空白对照组及原花青素高（857 mg/kg）、中（214.29 mg/kg）、低（42.86 mg/kg）剂量组。实验时，戊巴比妥钠（30 mg/kg）犬隐静脉麻醉，仰卧位固定，套呼吸罩，用胶布密封后接呼吸换能器，记录呼吸深度和呼吸频率。接心电电极，标准Ⅱ导联记录心电图。分离一侧股动脉，插入动脉插管，接三通，一头接压力导管，另一端连接1 mL注射器，注射1%肝素0.5 mL，然后留置用以补充戊巴比妥钠。多导生理记录仪记录股动脉收缩压、舒张压、计算平均压和心率，待动物各项观察指标稳定后，描记一段给药前正常曲线，十二指肠插管各剂量组给予相应剂量的受试样品5 mL/kg，空白对照组给予等体积蒸馏水。记录给予样品后30、60、120、150 min的呼吸、心电图及血压值。见表1～表3。
　　3.2 原花青素对小鼠自主活动的影响
　　ICR小鼠，雌雄各半。适应性喂养3 d后，按体质量随机分为空白对照组及原花青素高（428.57 mg/kg）、中（214.29 mg/kg）、低（42.86 mg/kg）剂量组，每组10只，雌雄各半。各剂量组灌胃给予受试样品，1次/d，剂量为0.2 mL/10 g，空白对照组给予等体积蒸馏水，连续3 d。然后将小鼠放入自主活动记录箱内后，检测小鼠自主活动情况。记录小鼠给药后30、60、90 min 3个时点2 min内的活动距离。见表4。
　　3.3 原花青素对小鼠协调运动的影响
　　取直径和长度固定的光滑玻璃棒1根，与地面成90°垂直放置，并固定底部，保持直立。使ICR小鼠沿玻璃棒顶端爬到底部，10 s内不能通过或掉棒者淘汰。取合格小鼠40只。分组与给药同前，在第3次给予受试样品后30、60、120 min进行爬杆试验，观察小鼠协调运动能力并进行评分。评分标准：0分，一步一步向下爬；1分，向下滑行；2分，不能爬住棒；3分，翻正反射消失[7]。结果表明，各组动物在给药期间的步态、姿势、肌颤、流涎、眼球震颤和分泌物等方面均未见异常。见表5。 　　3.4 原花青素对小鼠戊巴比妥钠阈下剂量催眠的影响
　　取ICR小鼠40只，雌雄各半。适应性饲养3 d后，分组及给药同前。口服给药30 min后腹腔注射30 mg/kg戊巴比妥钠，观察15 min内各组小鼠入睡只数（以小鼠翻正反射消失达1 min以上者作为入睡指标）[11]。见表6。
　　3.5 原花青素对小鼠戊巴比妥钠阈剂量催眠的影响
　　取ICR小鼠40只，雌雄各半。适应性饲养3 d后，分组与给药同前。口服给药30 min后腹腔注射45 mg/kg戊巴比妥钠，以翻正反射消失为入睡时间，从翻正反射消失至翻正反射恢复时间为睡眠持续时间[8]。见表7。
　　4 讨论
　　一般药理学研究也称为安全性药理学研究，主要观察受试物在治疗范围或治疗范围以上剂量时，潜在的不期望出现的对生理功能的不良影响，包括对中枢神经系统、呼吸系统、心血管系统等方面的影响，为新药用于临床提供安全性依据，是新药研究的重要内容。
　　原花青素是直接从植物中提取的，其研究已有40多年的历史，特别是近10多年以来，对原花青素的研究和开发利用速度大大加快，原花青素作为主要活性成分的药剂或食品营养补充剂已深入人们的日常生活，但对其生物安全性研究报道不多，谢氏等[9]对原花青素的急性毒性研究表明其LD50为2175 g/kg。Ray S等[10]研究表明，原花青素的LD50超过5000 mg/kg，6个月长毒研究结果显示灌胃给予原花青素每日100、250、500 mg/kg对大鼠无任何毒性作用。但原花青素对中枢神经系统、呼吸系统、心血管系统等方面的影响未见报道，因此，本研究针对葡萄籽原花青素开展了一般药理学研究，以进一步补充和完善其安全性实验数据。
　　本实验结果表明，葡萄籽原花青素十二指肠给药对麻醉犬动脉收缩压、舒张压和平均动脉压、潮气量和呼吸频率无显著影响，提示原花青素对麻醉犬的呼吸系统和循环系统无明显不良影响。原花青素对小鼠戊巴比妥钠阈下及阈剂量睡眠情况无明显影响，提示原花青素对戊巴比妥钠无协同作用；对给药后30、60、90 min的小鼠自主活动无显著影响，对给药后30、60、120 min后的协调运动无显著影响，提示原花青素对小鼠中枢神经系统无明显不良作用。综上，原花青素对中枢神经系统、呼吸系统和循环系统无明显不良影响。本实验结果为原花青素在食品、保健品中的应用及新药开发提供了一定的安全性动物实验依据。
　　参考文献：
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　　（收稿日期：2013-06-19，编辑：华强）
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