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p16和Ki―67在鉴别宫颈上皮内瘤变和宫颈炎中的应用

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  【摘要】 目的:检测p16与Ki-67在宫颈上皮内瘤变(CIN)和慢性宫颈炎中的表达,探讨其在CIN诊断中的意义。方法:采用免疫组化EnVision法检测15例慢性宫颈炎、65例低级别CIN和47例高级别CIN患者的p16和Ki-67的表达。结果:慢性宫颈炎组的p16及Ki-67染色为阴性或仅散在表达,明显低于低、高级别CIN组(P<0.001),二者表达层次从低级别CIN到高级别CIN逐渐由基底层至表层。p16在低、高级别CIN组间比较差异有统计学意义(P<0.001),Ki-67在低、高级别CIN组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:联合检测宫颈活检标本中p16、Ki-67可以提高宫颈上皮内瘤变的检出率及分级的准确性,有利于慢性宫颈炎症与宫颈上皮内瘤变之间的鉴别。
  【关键词】 宫颈上皮内瘤变; 免疫组化; p16; Ki-67
  宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)是宫颈癌的癌前病变。尽管CIN有明确的诊断标准,但是在具体工作中还会遇到很多难以鉴别的情况,如反应性鳞状上皮增生、基底细胞增生、不成熟鳞状上皮化生及老年性萎缩等。本研究应用免疫组化的方法检测宫颈组织中p16和Ki-67的表达,探讨其在宫颈炎和CIN诊断中联合检测的价值。
  1 资料与方法
  1.1 一般资料 收集本院病理科2013年1月-2015年3月间慢性宫颈炎及CIN患者的资料及蜡块,由2位高年资病理医师复查HE切片并证实。患者年龄18~65岁,平均42.5岁。其中低级别组(CINI组)65例,高级别组(CINⅡ、CINⅢ组)47例,慢性宫颈炎组(阴性对照组)15例,两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。
  1.2 方法及试剂 采用免疫组化EnVision法。切片常规脱蜡、脱水,剩余步骤在自动免疫组化仪上进行。染色具体步骤按照仪器操作说明书进行。所用抗体p16及Ki-67均购自上海罗氏公司。
  1.3 结果判定 p16以宫颈鳞状上皮基底和副基底层细胞的连续性染色,有或没有表面细胞染色,判断为(+);孤立细胞或小的细胞簇染色,即非连续的着色,特别是基底和副基底层的鳞状细胞没有着色,判断为(-)。Ki-67阳性为胞核着色,阳性细胞仅位于基底层及副基底层或阳性细胞数≤5%者为(-);Ki-67阳性患者中,阳性细胞数为6%~25%者为(+);26%~50%者为(++);>50%者为(+++)[1]。本文将阳性强度在(+)以上者列为阳性细胞。
  1.4 统计学处理 运用SPSS 16.0统计软件对所得数据进行统计学处理,计数资料以率(%)表示,比较采用 字2检验,以P<0.05表示差异有统计学意义。
  2 结果
  2.1 三组p16及Ki-67阳性率比较 慢性宫颈炎中p16为阴性,在CIN中p16大部分呈阳性(88/112),低、高级别CIN组与宫颈炎组比较差异有统计学意义(P<0.001)。高级别CIN组p16阳性率显著高于低级别CIN组,两组比较差异有统计学意义(P<0.001)。Ki-67在慢性宫颈炎组仅见少量表达,在CIN组表达增加(106/112),低、高级别CIN组与宫颈炎组比较差异有统计学意义(P<0.001)。低级别CIN组与高级别CIN组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
  2.2 病理结果比较 在慢性宫颈炎中p16为阴性,鳞状上皮Ki-67基底细胞(+);低级别CIN中p16阳性细胞局限于宫颈鳞状上皮的下1/3,在高级别CIN中阳性细胞累及甚至超过上皮下2/3层或全层弥漫阳性。随着病变程度的加重,Ki-67表达范围及阳性强度都有所提高,低级别CIN主要为鳞状上皮层下1/3的细胞核着色,呈黄褐色;高级别CIN主要为鳞状上皮层下2/3至全层细胞核着黄褐色,呈强阳性(图1~3)。
  3 讨论
  宫颈上皮内瘤变(CIN)根据鳞状上皮异型增生的程度分为三级:CINⅠ级相当于轻度非典型增生,CINⅡ级相当于中度非典型增生,CINⅢ级相当于重度非典型增生和原位癌[2]。发生CIN主要的危险因素是HPV感染。宫颈病变中HPV16、18感染与p16的过度表达呈正相关[3]。
  p16基因又称多肿瘤抑制基因,为细胞周期依赖性激酶(CDK)抑制蛋白,直接参与细胞周期的调控,负调节细胞增殖及分裂,当p16基因突变致结构和功能缺失时,可刺激细胞分裂,引起细胞的非典型增生,甚至癌变[4]。本研究发现p16在慢性宫颈炎不表达或呈不连续的点灶状的表达,在CIN病变中表达增加。p16表达在低级别到高级别CIN中呈逐渐增高的趋势,比较差异有统计学意义(P<0.001)。p16的阳性部位位于细胞浆和细胞核,呈现弥漫阳性的表达方式,棕黄色,在低级别CIN中弥漫表达于鳞状上皮的下1/3层,高级别CIN中表达于鳞状上皮的下2/3层甚至全层,弥漫性强阳性。对于炎症背景较重而CIN病变范围较小的宫颈活检标本,p16阳性标记可以检出部分漏诊的病例,p16阳性的范围可以帮助判断CIN的级别。
  Ki-67是一种反映细胞增殖程度的核抗原,在细胞增殖周期的G1、S、G2及M期表达,细胞有丝分裂后该蛋白含量迅速减少,在G0期不表达[5]。本研究结果显示Ki-67在慢性宫颈炎、低级别上皮内瘤变及高级别上皮内瘤变中的阳性率分别为13%、90%和100%,慢性宫颈炎阴性表达或仅表达于基底层细胞,在鳞状上皮乳头状增生区域其表达有所增加,此时联合应用p16对于鉴别低级别CIN有一定的帮助。低、高级别CIN组Ki-67阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),故联合应用p16对于CIN的分级尤为重要。
  综上所述,联合检测p16和Ki-67可以帮助病理医师鉴别慢性宫颈炎及CIN,提高CIN诊断准确性,降低误诊率。
  参考文献
  [1]史健,郑军生,尹方,等.宫颈上皮内瘤变p16、p53、Ki-67的表达与高危型HPV感染及其临床意义[J].南方医科大学学报,2007,27(4):515-517.
  [2]陈乐真.妇产科诊断病理学[M].北京:人民军医出版社,2010:117.
  [3]邹先进,蔡兰,刘颖,等.子宫颈癌前病变与子宫颈癌组织中p16INK4A蛋白检测及其与人乳头状瘤病毒感染的关系[J].中华妇产科杂志,2004,39(9):625-626.
  [4]旦慧文,戴淑真.p53、p16、PTEN基因在宫颈癌中的作用[J].中国误诊学杂志,2005,5(7):1226-1228.
  [5]王岩,刘晓霞.上皮内瘤样病变及宫颈癌组织中Ki67、p16的异常表达[J].宁夏医学杂志,2002,24(11):649-651.
  (收稿日期:2015-04-07) (本文编辑:王宇)
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