p16和Ki―67蛋白，TLR3在宫颈病变分流诊断中的应用

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　　[摘要] 目的 评估p16和Ki-67蛋白，TLR3检查在宫颈病变分流诊断中的临床价值。方法 整群选取该院2014年10月一2016年8月妇产科门诊阴道镜下活检病理诊断各类宫颈病变153例分别进行p16和Ki-67，TLR3检测。采用免疫组化技术（S-P法）检测p16及Ki-67 ，TLR3的表达。结果 在慢性宫颈炎、CINI级、CINⅡ级、CINⅢ级中，p16阳性率为13.21%、58.24%，96.25%、97.51%，Ki-67阳性率为10.05%、61.22%、94.12%、96.05%，TLR3阳性率为11.04%、62.32%、95.02%、97.05%，p16与Ki67，TLR3阳性率呈递增趋势，差异有统计学意义。结论 P16和Ki-67， TLR3对宫颈病变分流诊断有重要辅助诊断价值，精确指导宫颈病变的诊断与治疗，预防宫颈癌的发生。
　　[关键词] P16；Ki-67；TRL3；宫颈病变；筛查
　　[中图分类号] R711 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）10（a）-0026-03
　　Application of p16，Ki-67 Protein and TLR3 in Shunt Diagnosis of Cervical Lesions
　　LI Yan-xia
　　Gynecology of the Second People’s Hospital of Liaocheng， Affilicated to Taishan Medical Sciences Univercity，Liaocheng，Shandong Province，252601 China
　　[Abstract] Objective To evaluate the application of p16， Ki-67 protein and TLR3 in shunt diagnosis of cervical lesions. Methods Group selection from October 2014 to August 2016 153 specimens onfirmed by pathological diagnosis of cervical lesions and can not determine the level of cervical lesions after Biopsying under colposcope. p16，Ki-67，TLR3 were detected with Envision methode. Results In chronic cervicitis， CINⅠ， CINⅡ， CINⅢ， the positive expression rate of p16 for 58.24% and 13.21% and 96.25% and 97.51%， the positive rate of Ki-67 was 10.05% and 61.22% and 94.12% and 96.05%， TLR3 positive rate was 11.04%， 62.32%， 95.02%， 97.05%， p16 and Ki-67，TLR3 positive rate was increased， the difference is significant. Conclusion P16 and Ki-67， TLR3 is important auxiliary diagnostic value for shunt in the diagnosis of cervical lesions， accurate guide the diagnosis and treatment of cervical lesions， prevent the happening of the cervical cancer.
　　[Key words] P16；Ki-67；TRL3；Cervical lesions；Screening
　　宫颈癌是妇科肿瘤中仅次于乳腺癌的第二大恶性肿瘤[1]。目前，中国常用TCT结合HPV病毒检测-阴道镜检查-宫颈组织病理活检，对宫颈癌前病变有效地进行宫颈LEEP刀手术，宫颈锥形切除术，仍存在过度治疗问题[2]。随着生物标志物的日趋被关注，细胞周期抑制因子p16 蛋白，核增殖抗原Ki-67，Toll 样受体3（TLR3）对宫颈高低级别病变鉴别有一定的指导意义。该文分析研究2014 年10月―2016 年8月该院收治的153例子宫颈炎、宫颈癌前病变中p16蛋白，Ki-67及TLR3的表达及其相关性，现报道如下。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　整群收集该院妇产科门诊就诊宫颈活检诊断为慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变I-III级标本共153例。由病理科医师阅片。
　　1.2 主要试剂及仪器
　　宫颈活检组织均经10%甲醛固定、24 h后石蜡包埋，连续切片，制成4 μm 厚的切片。待免疫组化保存。应用PV6000试剂盒免疫组化染色。
　　1.3 评判标准
　　p16，Ki-67，TLR3阳性表达为细胞核和胞浆出现棕黄色颗粒。Ki-67着色细胞所占百分比≤5%者为（-），6%～25%为（+）、26%～50%为（++）、>50%为（+++）。TLR3评分依据为着色度及阳性比： 0分无着色， 1分淡黄色， 2分棕黄色， 3分棕褐色；1分阳性细胞<5%， 2分5% ～25%，3分26%～50%，4分≥50%。两者相加：1分阴性（-），2分弱阳性（+），3分中等阳性（++），4分以上强阳性（+++）。
　　1.4 统计方法 　　采用SPSS 19.0 统计学软件对所有数据进行分析，采用秩和检验， Spearman 相关性分析等统计学方法，检验水准为0.05。P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 p16在宫颈炎及宫颈上皮内瘤变中的表达与分布
　　p16蛋白CIN中主要定位于细胞核和细胞质表达。p16在慢性宫颈炎对照组中几乎不表达，CINⅠ组，CINⅡ组，CINⅢ组中阳性率58.24%，96.25%，97.51%，差异有统计学意义（P <0.01）
　　2.2 Ki-67在宫颈炎及宫颈上皮内瘤变中的表达与分布
　　Ki-67蛋白在CIN中主要定位于细胞核和细胞质表达。Ki-67在慢性宫颈炎对照组中几乎不表达，CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ组中阳性率61.22%，94.12%，96.05%，差异有统计学意义（P<0.01）
　　2.3 TLR3 在宫颈炎及宫颈上皮内瘤变中的表达与分布
　　TLR3主要于胞质和（或）胞核内表达。TLR3 在慢性宫颈炎阳性率为11.04% ，CINⅠ组，CINⅡ组中，CINⅢ组阳性率62.32%，95.02%、97.05%，差异有统计学意义（P<0.01）
　　2.4 宫颈各类型病变中p16 与 Ki-67，TLR3的相关性
　　Spearman 相关性分析显示：153例宫颈病变组织中p16及Ki-67，TLR3的表达均呈显著正相关（rs =0.528，P <0.01）。
　　3 讨论
　　宫颈癌是常见的妇科肿瘤。随着目前检测水平的提高及人们防癌意识的提高，宫颈癌的发病率有所降低，早期癌及宫颈上皮内瘤检出率升高。随着对生物标记物的关注，p16，Ki-67及TLR3 越来越引起人们的重视，有望明确诊断宫颈高低级别病变，辅助治疗，避免过度治疗[3-4]。
　　p16是细胞周期素依赖激酶的抑制因子，是一种抑癌基因。通过抑制细胞周期蛋白D催化反应，干扰抑制cDI<4或cDI<6活性组织细胞进入G/s期，无限制扩增向肿瘤发展和转化，发挥抑癌的作用。有研究发现[5]，99%高危型HPV阳性的宫颈病变及宫颈癌中有p16表达。Dong等[6]研究159例恶性妇科肿瘤p16表达情况，p16在FIGO分期越高、分化越差的肿瘤中表达明显。Ki-67是一种核抗原，与增殖细胞密切相关 。随着肿瘤的恶性程度增高，Ki-67的表达增强，预后越差。TLRⅢ是一种Ⅰ型跨膜蛋白。具有保持组织稳态平衡、调节细胞凋亡等功能。可通过炎症反应、细胞凋亡，逃避机体的免疫识别，导致病毒持续生长，HR-HPV下调TLR3表达，自然杀伤细胞活性降低，朗罕细胞减少，逃逸免疫，导致病毒感染及宫颈病变。该研究中，在慢性宫颈炎、CINI级、CINlI级、CINⅢ级中，p16阳性率为13.21%、58.24%，96.25%、97.51%，Ki-67阳性率为10.05%、61.22%、94.12%、96.05%，TLR3阳性率为11.04%、62.32%、95.02%、97.05%，p16与Ki-67，TLR3阳性率呈递增趋势，差异有统计学意义，Spearman 相关性分析，TLR3与p16蛋白及Ki-67的表达均具有相关性（rs = 0.538，P<0.01；rs = 0.526，P<0.01）。提示TLR3在宫颈各级病变转化的过程中有重要作用。
　　该研究显示，p16，ki-67在病变子宫颈中均有表达，随着CIN 级别的升高以及发生癌变，阳性率逐渐升高。CINI级病变p16染色可见各级表达。p16阴性表达的CINI级病变可能持续或者退化，而p16弥漫强阳性表达的CINI级病变进展为CINII～III级的风险较高。51例p16和Ki-67阴性病例无高级别CIN，提示p16和Ki-67均阴性可除外高级别CIN。3例高级别CIN病变p16显示阴性，但Ki-67显示阳性；11例高级别CIN病变，Ki-67为阴性，但p16均为阳性，说明单独p16或Ki67用于诊断宫颈病变，有一定的漏诊，联合p16和Ki-67可以减少CIN的漏诊。CINII级、CINIII级中p16与Ki-67多数为强阳性表达，提示p16和Ki-67均呈强阳性表达支持高级别宫颈病变的诊断[7-8]。
　　有研究，不同病理学家在正常组织及CINI级诊断间只有30%及64%一致性，而CINⅡ级更是低于50%的一致性，随着细胞分子学的发展及对标志物的日趋关注，p16和Ki-67均呈强阳性表达支持高级别宫颈病变的诊断，提高了诊断的准确性。
　　[参考文献]
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　　（收稿日期：2016-09-10）
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