关于对中药复方头风愈滴丸血清药物化学的分析

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　　【摘要】头风痛丸是治疗偏头痛的有效药方，具有祛风止痛的特效，它主要组成有绿茶、白芷和川芎。三种药的共同作用，使头风痛丸达到解表散风、止痛、通窍，活血止痛、祛风燥湿，清上降下、抑制温燥和升散的神奇功效。在头风痛丸的基础上，开发得到了头风愈滴丸这种新制剂。
　　【关键词】头风愈滴丸；血清药物；中药复方；化学分析
　　中医药作为人类文化遗产中的珍宝，在人类与疾病斗争中起到了很重要的作用，是世界医药发展史上标志的里程碑。中药的主要应用形式通过中药复方制剂来体现，中药复方制剂的研究近年虽取得了一定的成绩，但中药复方的研究是艰巨的系统性工程，只有选对研究方向，并对研究手段不断改进创新，才会使中药复方制剂不断发展进步。目前我国对中药复方药效物质基础开展的研究，只停留在药物追踪和分布提取的体外研究，这样的研究目的性不强，工作起来较为繁琐。
　　1 复方头风愈滴丸血清药物化学分析现状
　　1.1头风痛方的研究现状
　　目前对于头风痛的化学成分研究发现，其基本上是将各单位药材进行研究，例如白芷基本上分为香豆素类及其挥发油类，川芎的成分主要以有机酸、挥发油为主，绿茶的主要成分为茶多酚、咖啡因等。从当前情况来看，头风痛质量的探索还处于一个比较低的水平，对于头风丸进行的鉴别也只是单纯的局限于理论上的探究，对质量控制和评价采用的指标也只局限于较少成分，这样类型的检测并不能够彻底的反映出中药的质量，因此，需要建立健全可以真正反映药物成分的指纹图谱，这样才能够将头风愈滴丸多的复杂成分更加清晰全面的展现出来，进而对药物的质量进行标准准确地评价。头风愈滴丸在体内怎样发挥作用以及作用机理怎样，至今还没有明确的研究。所以，必须先对头风愈滴丸的疗效进行明确定位，通过一些方法，诸如药动学、药理学及其相关的药效学办法，对于其机理进行深入的探究，从而确定药效的物质基础。
　　1.2中药复方研究现状
　　目前中药复方成分的研究基本上是应用“分步提取，药效追踪”的方法，此种方式是应用不同的溶媒将中药复方进行分段的提取，并且将提取的各有效成分加以确定，再继续进行分离，按照这个顺序最终获得单体化合物。这种方法虽然很有效果但是耗费较大、试验周期较长，不能很好的满足实验的需求。“中药血清药物化学”则不同，它基本上是将药物化学的研究方式作为基本，并有效的应用多种现代技术，可以将服用药物之后的血清当中移行的成分确定出来，并对其相关的性质进行分析探讨，从而得到中药药效的物质基础和在作用体内的作用过程。
　　2 对头风愈滴丸的指纹图谱进行研究
　　目前应用的头风痛的质量控制方法是对几个重要指标进行检测，但很明显，这样很难对头风痛的主要成分的质量和分布进行全面的了解，所以本文就通过指纹图谱的方法对头风愈滴丸实施全面性的质量控制。血清药物化学研究的关键部分在于怎样将体外指纹图谱进行高效灵敏稳定的运用，主要可以分为三个基本的步骤，第一，对于中药的成分的进行明确研究，使其原成分在体内被检测出来，并且依照相关的情况来对于药量给予控制；第二，分析出给药之后体内血清当中的基本成分，对于体内及其体外的相关成分进行比对；第三，对于中药的血中移行成分及其相应的来源给予确定。
　　3 对复方头风愈滴丸血清药物进行化学研究
　　3.1建立血清色谱指纹图谱
　　主要应用SPD IOA紫外检测器、AS20500A超声波清洗器、岛津LC IOAT高效液相色谱仪和旋转蒸发器等仪器，三氟乙酸、甲醇、乙腈、纯净水和羧甲基纤维素钠等试剂，对SPF级，体重200g左右的雌性sD大鼠，运用复方头风愈滴丸小样进行试验。进行试验时将复方头风愈滴丸研碎，加聚乙醇进行研磨，制备成生药量1.8g/mL的混悬液。同时取25只SD大鼠，随机分成相同数量的组，对制剂组禁食12h后称其体重，对大鼠按照1mL/100g进行灌胃，给药后3h进行股动脉取血，分离出血清；空白组用相同剂量的聚乙二醇灌胃，后采取血清。取得的血清经过一些列操作而确定样本的色谱。对大鼠进行头风愈滴丸灌胃后的半小时至四十小时内，在不同时间点对大鼠实施股动脉采血，并将相应的用药后血清样品进行制备，绘制出各时间点血清指纹图谱。通过图谱可以发现在色谱条件固定的情况下，灌胃头风愈滴丸后的三小时时点所制各的试验样品分离度较好，显现出的色谱峰数量也较多，同时能够很好的反映出药剂在实验体体内的化学特征，因此应选择用药后的三小时时点作为实验研究时采血的时间窗口。
　　取血清样品，应用高效液相色谱仪进样10μL来进行实验分析，对70分钟时点内的色谱进行研究，将稳定性和重复性都较好，并且有明显特征的色谱峰作为共有峰，标定共有指纹峰，然后选定参照峰，将参照峰的保留时间及其峰面积积定位标准值，设分值为1，以便计算其它峰的相对参数，后利用“相关系数”法将指纹图谱的相似程度计算出。实验结果表示出各共有峰的相对参数RSD都在百分之二以内，并且经计算得出的相似度的结果均在0.96以上。结果表明看出，在给药后的样品中共出现13个共有峰，这些共有峰的指纹图谱的相似度良好，并且在实验中确定的药剂血中移形成分的方法较为稳定，重现性较好，因此使得头风愈滴丸的入血成分可以被准确检测出。但同时由于试验动物个体差异而不可避免的产生误差，导致了各共有峰的相对峰面积的RSD普遍较大。
　　3.2血中移形成分分析
　　实验采用HPLC、GC/MS进行定性分析，并对血中移形成分的来源进行认定。实验过程与上面实验大致相同，得出如下实验结果：在头风愈滴丸给药后，大鼠血清中出现了13个移形成分，其中11个为直接吸收入血，是头风愈滴丸中含有的原型成分，其它有大鼠新产生的代谢产物。咖啡因、水合氧化前胡素和欧前胡素在血中的转移量较大。
　　此外进行GC/MS分析血中移形成分分析，得出实验结论如下：分离出头风愈滴丸体外成分10个，鉴定得出给药血清成分4个，并且将所得质谱图与标准图谱和文献进行对照，咖啡因为绿茶的主要成分，3丁基苯肽、藁本内酯3丁烯基苯肽、洋川芎内酯、为川芎的主要成分；8甲氧基补骨脂素为白芷中的成分。对给药血清成分进行分析，8甲氧基补骨脂素和咖啡因为体外原型成分，另两个可能为代谢产物可是并没有在体内找到与其结构相似的成分，因此并不能够很好的得出代谢产物来源，也不能够明确其代谢途径。根据对于给药血清成分的一系列研究，能够分析出奇没有过多的化学成分，最终发现可能是入血成分没有足够的挥发性、进样量比较小，等等。在HPLC的指纹图谱的共有峰中共出现9个血中移形成分，但他们是否都和头风愈滴丸药物治疗偏头痛的功效有关，还需要进一步的实验判定，具体操作时应结合血清药理学和其它传统祛风止痛药效学进行研究，才能更对头风愈滴丸的药效物质基础进行进一步探索。
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