氨基酸分析仪检测氨基酸水溶肥中游离氨基酸可行性分析

来源:用户上传      作者: 古华龙　陈海雪　梁家铭　余良莹

　　【摘 要】通过酸水解法测定含氨基酸水溶肥料中17种氨基酸含量，采用sykam全自动氨基酸分析仪，水合茚三酮柱后衍生，结果表明：同一个样品测得的氨基酸峰面积相对标准偏差小，峰面积的回收率在97.8%～101.3%，用此方法测氨基酸具有良好的重复性、准确性。
　　【关键词】含氨基酸水溶肥；酸水解；氨基酸；柱后衍生
　　0.前言
　　我国是一个缺水的农业大国，化肥的使用在农业生产中占重要地位，而传统肥料存在利用率低、养分损失率高而且耗水量大的缺点，水溶肥料由于其迅速溶于水中、养分更易被吸收而且吸收利用率高并可应用于滴灌、喷施、喷灌的节水特点，在我国农业中有广阔的发展前景[1]。氨基酸水溶肥作为水溶肥中的一员，其原理：氨基酸存在肥料中，易于被作物吸收的特点；亦有提高施肥对象抗病性，改善施肥作物品质的功能；补充植物必须的氨基酸，刺激和调节植物快速生长，促使植物生长健壮，促进对营养物质的吸收；增强植物的代谢功能，提高光合作用，促进植物根系发达，加快植物生长繁殖[2]。目前，对于氨基酸的检测大多采用液相色谱、气相色谱-质谱联用、毛细管电泳、凯氏定氮法和光谱法等方法。这些方法或试剂费用昂贵，或分离效率低，或不能同时测多种氨基酸。运用氨基酸分析仪能解决以上问题，并且操作简单方便，重复性好。
　　1.方法原理
　　含氨基酸水溶肥用磺基水杨酸沉淀蛋白质后，用EDTA络合金属元素释放氨基酸，氨基酸经离子交换色谱分离、测定。脯氨酸在440 nm波长处有最大吸收峰，除脯氨酸外，其他各氨基酸均在570nm波长有最大吸收峰。因此，在440nm检测计算脯氨酸含量，而在570nm检测计算其它各氨基酸含量。
　　2.试剂与仪器
　　2.1试剂
　　6.0mol/l盐酸溶液、茚三酮溶液、50g/L磺基水杨酸溶液、10g/L EDTA溶液、流动相：柠檬酸钠缓冲液A=0.2N，pH=3.45；柠檬酸钠缓冲液B=0.2N，pH=10.85；C=超纯水；D=20g/L氢氧化钠溶液。
　　2.2氨基酸混合标准储备液
　　含天门冬氨酸、苏氨酸等17种常规蛋白水解液分析用层析纯氨基酸，各组分浓度C（氨基酸）=100nmol/ml。
　　2.3仪器与设备
　　sykam全自动氨基酸分析仪、0.45μm水洗滤膜、真空干燥箱、真空泵等。
　　3.实验方法
　　3.1样品前处理
　　称取试样2g-10g（精确到0.01g），置于250mI容量瓶中。充分溶解后，加水至刻度，混匀，放置过夜后吸取上清液（或过滤后吸取滤液）2ml，于10mL离心管，准确加人2mL磺基水杨酸溶液混匀，放置lh。准确加人1mLEDTA-Na溶液和1mL盐酸溶液，混匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤。吸取上清液（或滤液）1ml蒸干。准确加人1～5mL的样品稀释液溶解，使氨基酸浓度处于仪器最佳检测范围内，供仪器测定用[3]。
　　3.2仪器条件
　　色谱条件： LCAK06/Na （水解氨基酸分析柱）
　　柱温：：58℃～74℃梯度控温
　　洗脱泵：0.45mL/min；衍生泵：0.25mL/min
　　检测器：440nm/570nm双波长检测器；反应器温度：130℃；进样体积：50μL
　　4.结果与分析
　　4.1氨基酸的色谱分析
　　图1
　　试验测定17种氨基酸标样色谱图见图1，除PRO（脯氨酸）在440nm检出，其余氨基酸都在570nm检测出。连续进6针浓度为100nmol/L的氨基酸混合标样，其平均分离度R=3.65，最小分离度R=1.41（Ile～Leu），18种浓度均为100nmol/L的氨基酸标液的峰面积的相对标准偏差见下表1。
　　峰面积相对标准偏差在0.150%～0.748%，说明此方法进样重复性良好。
　　4.2回收率实验
　　把已经稀释3倍的氨基酸的混合标样、氨基酸水溶肥进行测定，再把标液加入到样品中检测氨基酸含量，所得数据见下表2。
　　实验的回收率在97.8%～101.3%之间，说明该方法具有较高的准确性。
　　5.结论
　　本文中使用氨基酸自动分析仪测定水溶肥中氨基酸的方法具有良好的重复性，较高的回收率，而且样品分离度好，说明检测氨基酸水溶肥料是可行的。
　　【参考文献】
　　[1]李代红，傅送保，操斌.水溶性肥料的应用与发展[J].现代化工，2012，32（7）：12-15.
　　[2]张番.水溶性肥料：养分丰富促生长节水节肥显成效[N].中国农资，2012-7-13（25）.
　　[3]NY1429-2010含氨基酸水溶肥料[S].
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