原花青素降低脂质过氧化作用的研究
来源:用户上传
作者: 张爱军 臧家业
【摘 要】鉴于原花青素的独特生物活性和特殊功能，原花青素及其制剂成为国内外研究开发热点[2]。本文就原花青素降低脂质过氧化作用进行了初步的研究，为今后将原花青素用于人类保健品或一些疑难病症防治药物的开发研究，提供了科学依据。以高、中、低三种剂量的原花青素喂食小鼠45d，对照组给予等体积的蒸馏水，测定各项指标。实验结果是高剂量组与老龄对照组比较， MDA含量明显降低，血清SOD活力明显升高（P<0.05），表明原花青素具有降低脂质过氧化作用。
【关键词】原花青素 脂质 过氧化作用
原花青素（Oligomeric Proanthocyanidins）是自然界中广泛存在的聚多酚类混合物，主要由儿茶素的单体、二聚体、三聚体┅十聚体组合而成[1]。原花青素的研究有相当长的历史，作为抗氧化剂在食品工业有广泛的应用，随着研究的深入，还发现原花青素能防止延缓和抑制过量自由基引起的老化损害，在保护心脏，提高血液载氧量，保护血管，保护眼睛，抗炎，抗癌，抗基因突变，抗氧化，抗辐射损伤，清除自由基，修复胶原蛋白，抗紫外线辐射，防止黑色素形成，增白等方面具有良好的功效。鉴于原花青素的独特生物活性和特殊功能，原花青素及其制剂成为国内外研究开发热点[2]。本文就原花青素降低脂质过氧化作用进行了初步的研究，为今后将原花青素用于人类保健品或一些疑难病症防治药物的开发研究，提供了科学依据。
1材料与方法
1.1材料
（1）样品，红棕色粉剂（水分4.4%，灰分1.3%，原花青素93.62%），青岛海隆达生化科技有限公司。原花青素标准品，sigma公司提供。（2）试验动物 健康二级昆明种雄性15月龄老龄鼠和8周少龄小鼠，山东大学实验动物中心。（3）剂量选择 原花青素成人推荐量为120mg/kg・b.w（成年人体重按60kg计算）。分别扩大3、10和30倍作为低（360 mg/kg・b.w）、中（1200 mg/kg・b.w）和高剂量（3600 mg/kg・b.w）老龄鼠实验组，另设老龄对照组和少龄对照组，每组动物10只。用蒸馏水将样品配制所需浓度，连续经口灌胃45d，对照组给予等体积的蒸馏水，测定各项指标。（4）主要仪器和试剂 960-荧光分光光度计、722分光光度计、离心机、混旋器、微量加样器、恒温水浴锅；6.7g/L硫代巴比妥酸TBA-冰醋酸（1：1）混合液、10nmol/ml四乙氧基丙烷、100g/L磷钨酸、10mmol/L盐酸羟胺、7.5mmol/L黄嘌呤、0.023u/ml黄嘌呤氧化酶、10g/L甲萘胺、3.3g/L对氨基苯磺酸、3g/L磺基水杨酸、SOD标准品等。
1.2实验方法
1.2.1全血中过氧化脂质降解物丙二醛（MDA）含量测定
（1）样品制备：取全血50ul加入1ml生理盐水，2000r/min离心10min，取上清液待测。
（2）标准曲线制作：将10nmol/ml四乙氧基丙烷，用蒸馏水稀释成0.25、0.5、1、1.5、2和5nmol/ml，分别取1ml加入TBA-冰醋酸（1：1）混合液1ml，混匀，沸水浴75min，流水冷却至室温，加5ml正丁醇振荡提取2min，3000r/min离心10min，取上清液（正丁醇层）用荧光光度计测荧光强度（狭缝10nm，激发光波厂515nm，发射光波长553nm）。
（3）全血样品测定：全血样品上清液0.5ml，加入1/6mol/L硫酸4ml、100g/L磷钨酸0.5ml摇匀，室温放置5min，3000r/min离心10min，弃上清液，沉淀加1/6mol/L硫酸2ml、100g/L磷钨酸0.3ml摇匀，室温放置5min， 3000r/min离心10min，弃上清液，沉淀加1ml蒸馏水振摇2min，以下操作步骤同标准曲线，同时以浓度0.5 nmol/ml的四乙氧基丙烷为标准对照。
（4）全血MDA含量计算：MDA含量（nmol/ml）=0.5×f/F×1/0.05×1.05/0.5
式中F：0. 5nmol/ml四乙氧基丙烷荧光强度；f：样品荧光强度。
1.2.2血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力测定（羟胺法）
血清样品制备：取全血50ul，制备血清待测。
血清中SOD活力测定：依次取1/15mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.8）1.0ml，血清样品20ul，10mmol/L盐酸羟胺0.1ml，7.5mmol/L黄嘌呤0.1ml，0.023u/ml黄嘌呤氧化酶0.1ml，双蒸水0.5ml加入到试管内混匀，37℃恒温水浴30min，再加入3.3g/L对氨基磺酸2.0ml，10g/L甲萘胺2.0ml，混匀，常温放置15min，倒入1cm光径比色杯，以蒸馏水调零，530nm处比色测定OD值，同时进行空白对照测定。
SOD活力的计算：按以下公式计算SOD百分抑制率：
SOD百分抑制率=（对照管OD-测定管OD）/对照管OD×100%
按每ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个单位，按以下公式计算SOD的活力：SOD活力（u/ml）=SOD百分抑制率/50%×样品稀释倍数
1.2.3统计处理：采用方差分析进行数据处理
2结果
2.1原花青素对小鼠全血中过氧化脂质降解物丙二醛（MDA）含量的影响
表1显示，经口给予老龄小鼠原花青素45d，高剂量组与老龄对照组比较，全血MDA含量明显降低（P<0.05），低剂量组和中剂量与老龄对照组比较，全血MDA含量差异无显著性。
2.2原花青素对老龄小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力的影响
表2显示实验结果表明，经口给予老龄小鼠原花青素45d，高剂量组与老龄对照组比较，血清中超氧化物歧化酶（SOD）活力明显增高（P<0.05），低剂量组和中剂量与老龄对照组比较，血清中SOD活力差异无显著性。
3结语
经口给予小鼠原花青素45天，高剂量组与老龄对照组比较，MDA含量明显降低，血清SOD活力明显升高，实验结果表明，原花青素有降低脂质过氧化作用。
原花青素之所以能够延长寿命，可能与其拥有强有力的抗氧化能力有关[3]。研究表明，原花青素在体内其抗氧化、清除自由基能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍[4]。原花青素制品在欧美等西方国家市场非常走俏，一瓶60粒胶囊（每粒含原花青素50毫克）售价为23.95美元，而每粒含100毫克的原花青素一瓶售价为39.95美元，原花青素在保健品中市场零售价高达4.48万元/千克。我国目前未有以原花青素为主要有效成份的药品、保健品的开发才刚刚开始，目前的用量很少。但由于其明显的生物活性效应和使用效果，必将在食品添加剂，保健品，化妆品，药品等方面得到广泛的应用，需求逐渐增加，具有相当强劲的市场前景和经济效益。
参考文献：
[1]专利：WO[9739632].
[2]Toshiaki Ariga Agric Biol chem.，1990，54（10）：2499-2540.
[3]王传现，钟进义.葡多酚对活性氧自由基的清除作用研究.营养学报，2001，23（2）：170-173.
[4]中国制药信息.1998，4.
转载注明来源:https://www.xzbu.com/8/view-7899079.htm
