薄层色谱法检测林可霉素B组分的方法探索
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作者: 刘琴月
摘要:目的 通过实验寻找适合林可霉素中间供试品中B组分检测方法。方法 采用硅胶板,以醋酸-正丁醇-水(2:1:1)为展开剂,用碘显色,观察不同的供试品浓度与展开时间。结果 供试品浓度控制在800-900u/ml,展开60min,可检测林可霉素中间供试品中的B组分。结论 该法快速简便,可用于生产中林可霉素中间供试品中B组分的检测。
Abstract:The purpose of finding suitable experimental lincomycin B in the middle of the test component detection method. Methods silica gel plates, acetate - butanol - water (2:1:1) as the agent, with the iodine color, observing different concentrations of the test start time. The results of the test concentrations at 800-900u/ml, started 60min, could be detected between lincomycin B in the test component. Conclusion The method is simple, rapid and can be used for the production of lincomycin B in the middle of the test component testing.
关键词:薄层色谱 林可霉素B组分 展层剂 显色剂
Key words:TLC lincomycin B component Show surfactants reagent
作者简介:刘琴月(1970-)女,河北石家庄人,助理工程师,主要从事抗生素药品检验及技术攻关工作。
林可霉素以A组分为主要活性物质,但还含有少量的B,C,D等类似物,其中B组分抗菌活性较小,它是林可霉素生产严格控制的一项指标[1]。对B组分的检测目前有多种方法,如纸色谱生物自显影法、柱色谱法、高效液相色法等,但都不适应于生产环节的中间控制检测。为此,我们对薄层色谱法进行了研究。
一、仪器与材料
1.1仪器
薄层板:我们所采用的是自制薄层板,所用玻璃板要求光滑、平整,洗净后不附水珠,晾干,备用。
点样器:规格5μl。
展开容器:使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸,并有严密的盖子,底部应平整光滑,或有双槽。
显色装置:蒸气熏蒸显色用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。本法采用的是双槽玻璃缸。
1.2材料
二、方法
2.1薄板制备
以硅胶,羧甲基纤维素钠为材料,每块薄板用硅胶2g,0.5%羧甲基纤维素钠4ml。根据所铺板数,用天平称取适量的硅胶,用量筒量取适量的0.5%羧甲基纤维素钠,在研钵中按同一方向研磨混合,去除表面的气泡后倒入涂布器中,在玻璃板上平稳的移动涂布器,进行涂布,厚度在0.2-0.3mm之间,取下涂好薄层的玻璃板,置水平台与室温下晾干后,于110℃活化30min,存放于有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度,(可通过透射光和反射光检视) [2]。
2.2林可霉素A和林可霉素B标准溶液的制备
精密称取林可霉素A标准品(854u/mg)0.0937g,至100ml容量瓶中,用纯化水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得800u/ml林可霉素A标准溶液;精密称取林可霉素B标准品(862u/mg)0.0929g克至100ml容量瓶中,用纯化水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得800u/ml林可霉素B标准溶液。
2.3待检供试品的制备
取待检林可霉素中间体供试品适量,根据化学效价,用pH1-3盐酸溶液提液,分别在容量瓶中稀释成600,700,800,900,1000,1100u/ml的溶液。
2.4展开剂制备
用量筒量取醋酸15ml,正丁醇7.5ml,水7.5ml,(即按醋酸-正丁醇-水2:1:1的比例)配制成30ml,混均即可。
2.5显影剂制备
将适量碘倒入显影缸中盖严备用。
2.6点样
用点样器点样于薄层板上,一般为圆点,点样基线距底边2.0cm,样点直径为2-4mm,点间距离为1.5cm,依照上述操作,依次吸取溶液5μl分别点在备用的硅胶板上,共3块,每个薄板上共8个点,其中6个是供试品点,另2个为林可霉素A与B标准品。点样时必须注意勿损伤薄层板的表面。
2.7展开
将上述3块已点好的薄层板依次放入展层缸中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5-1.0cm(切勿将样点浸入展开剂中)。密封顶盖。待分别展开40,60,80min后取出薄层板,在通风橱中晾干。
展开可以单向展开,即向一个方向进行;也可以进行双向展开,即先向一个方向展开,取出,待展开剂完全挥发后,将薄层板转动90°,再用原展开剂或另一种展开剂进行展开;亦可多次展开。
2.8显色
将晾干的薄板置于放有碘的密闭玻璃缸中显色,显色10min左右能明显看出斑点。
三、结果
不同浓度的待测供试品液及不同展开时间的薄层色谱示意图见图1。由图1可见,1,2点小不明显,3,4清晰分明,5,6产生拖尾现象。
检测结果表明:上述薄层色谱条件能有效分离林可霉素A组分与B组分;供试品浓度控制在800-900u/ml,点样5μL展开60min分离效果最好,分出的杂质与林可霉素B位置相同。但林可霉素B的最低含量必须大于4%,用此薄层色谱法才能检出。
因此,该法可适用于林可霉素生产中间环节B组分的控制。
参考文献:
[1]武斌,朱家文,陈葵,等,混合醇萃取用以降低林可霉素产品中 B组分含量的工艺研究[J].中国抗生素杂志,2002,27[6]:332-336
[2]国家药曲委员会.中华人民共和国药典:二部[S].2005版。北京:化学工业出版社,2005:附录VB
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