高效液相色谱-串联质谱法检测泮托拉唑钠原料药中的水合肼

来源:用户上传      作者:赵会明 张振洋 樊华军

　　摘 要 建立了泮托拉唑钠原料药中的基因毒性杂质水合肼的高效液相色谱-串联质谱（LC-MSMS）检测方法。采用反相色谱，以水-乙腈（含0.1%甲酸）为流动相，梯度洗脱，流速0.5 mL/min，以ESI正离子多反应监测（MRM）模式进行质谱检测。结果显示，水合肼的检测限和定量限可达到0.23、0.47 ng/mL，其在0.47～9.37 ng/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.999 9），准确度试验中低、中、高浓度回收率均在81.6%～90.9%之间。在3批次泮托拉唑钠原料药中均未检出水合肼。
　　关键词 高效液相色谱-串联质谱法 基因毒性杂质 泮托拉唑钠 水合肼 痕量检测
　　中图分类号：R917； O657 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2022）11-0072-04
　　引用本文 赵会明， 张振洋， 樊华军. 高效液相色谱-串联质谱法检测泮托拉唑c原料药中的水合肼[J]. 上海医药， 2022， 43（11）： 72-75.
　　Determination of hydrazine hydrate in pantoprazole sodium by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
　　ZHAO Huiming， ZHANG Zhenyang， FAN Huajun
　　[ICAS Testing Technology Service （Shanghai） CO.， LTD.， Shanghai 201100， China]
　　ABSTRACT To establish a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （LC-MSMS） method for the determination of hydrazine hydrate in active pharmaceutical ingredient （ API） pantoprazole sodium. HPLC was carried out by reverse chromatography using water-acetonitrile containing 0.1% formic acid as flow phase and gradient elution at a flow rate of 0.5 mL/min. Mass spectrometry was performed with multi-reaction monitoring （MRM） in positive ESI mode. The detection and quantitative limits of hydrazine hydrate reached 0.23， 0.47 ng/mL and hydrazine hydrate showed good linear relationship in the range of 0.47-9.37 ng/mL （r=0.999 9）. The recoveries of samples at low， medium and high-level concentrations reached 81.6% to 90.9% in the accuracy experiment. No hydrazine hydrate was detected in 3 batches of pantoprazole sodium.
　　KEY WORDS HPLC-tandem mass spectrometry； genotoxic impurities； pantoprazole sodium； hydrazine hydrate； trace determination
　　上消化道出血是近年的临床疾病中常见且多发的一种疾病，其临床表现为呕血、黑便等，如得不到及时有效治疗，可能引发失血性休克。泮托拉唑钠对于十二指肠溃疡、急性胃黏膜病变、复合性胃溃疡等急性上消化道出血的疗效较好[1]。泮托拉唑钠的合成工艺路线较长，其重要起始物料5-二氟甲氧基-2-巯基-1H-苯并咪唑的合成中使用的水合肼属于1类基因毒性杂质[2-5]。因为其对药物安全性的威胁，近年来监管机构对于药物中的基因毒性杂质的研究越来越重视。EMA（欧洲药品管理局）、ICH（人用药品技术要求国际协调理事会）先后发布了相关的指导原则，推荐使用毒理学关注阈值TTC 1.5 mg/d作为基因毒性杂质的可接受限度[6-7]。
　　水合肼的还原性极强，是药物合成中经常被当作还原剂使用，是已知的致癌物。对于水合肼的检测方法的报道，国内外都有过相关研究，包括GC、HPLC以及离子色谱等方法[8-11]，然而这些方法的灵敏度和抗干扰能力在原料药和制剂的检测中受到了挑战。本研究报道了一个简单的衍生化的方法，使用LC-MSMS对泮托拉唑钠原料药中的水合肼进行检测。
　　1 材料和方法
　　1.1 仪器
　　5500三重四极杆质谱仪和1.7 LC-MSMS软件工作站（AB Sciex公司）；Nexera UHPLC LC-30A（岛津公司）；SQP万分之一分析天平（Sartorius公司）；Poroshell 120 PFP液相色谱柱（3.0 mm×150 mm，2.7 mm；Agilent公司）。
　　1.2 试药
　　水合肼对照品（含量97.9 %，批号SHBK4829，Sigma-Aldrich公司）；苯甲醛（分析纯，批号LG70U41，百灵威公司）；乙腈（色谱纯，批号JA104330，默克公司）；甲酸（色谱纯，批号C12122682，麦克林公司）；苯甲酸（分析纯，批号20190430，国药化学试剂有限公司）；泮托拉唑钠原料药供试品（市售，批号AK20-255798-1，AK20-255798-2，AK20-255798-3）。

nlc202207071711

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