高效液相色谱-串联质谱法测定黄瓜中的4种甜味剂
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作者:周慧敏
摘 要：本方法以超纯水作为萃取试剂，通过高效液相色谱-串联质谱仪，同时测定黄瓜中阿斯巴甜、安赛蜜、糖精钠和甜蜜素4种甜味剂。该方法可准确测定黄瓜中4种甜味剂且有较好的线性关系，在线性范围1～100 ng/mL，相关系数大于0.99，检出限均为0.01 mg/kg，加标回收率在82.1%～98.2%，相对标准偏差为1.8%～5.8%。
关键词：黄瓜;甜味剂;高效液相色谱-串联质谱
Determination of Four Sweeteners in Cucumber by High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry
ZHOU Huimin
（Dalian Center for Certification and Food and Drug Control， Dalian 116630， China）
Abstract： This method uses water as extraction reagent， and simultaneously determines aspartame， acesulfame， saccharin sodium and cyclamate in Cucumber by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. It can accurately determine four sweeteners in cucumber and has a good linear relationship. In the linear range
1 ng/mL to 100 ng/mL， the correlation coefficient is greater than 0.99， the detection limit is 0.01 mg/kg， the recovery is 82.1%～98.2%， and the relative standard deviation is 1.8%～5.8%.
Keywords： cucumber; sweeteners; HPLC-MS/MS
甜味剂是赋予食品甜味的一种食品添加剂[1]。目前甜味剂种类很多，按其来源可分为天然甜味剂和人工合成甜味剂。常见的人工合成甜味剂有阿斯巴甜、安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、纽甜和三氯蔗糖等。其中阿斯巴甜、安赛蜜、糖精钠、甜蜜素也属于功能性高倍甜味剂，也叫非营养性甜味剂，其甜度均为蔗糖甜度的10倍以上。这几种甜味剂因甜度高、用量少，常使用于糕点、酱腌菜、饮料、调味品和配制酒等食品中。《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760-2014）明确规定了各种人工合成甜味剂在各类食品中的使用限量，但人工合成甜味剂在新鲜蔬菜上是不得使用的。人工合成甜味剂在限量范围内使用是安全的，但若长期过量使用会对人体产生一定危害[2]。
目前，甜味剂的检测方法有液相色谱法[3]、液相色谱-质谱[4]、离子色谱法[5]、气相色谱法[6]和气相色谱―质谱法，但没有蔬菜中多种甜味剂的检测方法。本文选择了阿斯巴甜、安赛蜜、糖精钠和甜蜜素4种典型的功能性高倍甜味剂，建立检测方法。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
甲醇（色谱纯），甲酸（色谱纯），实验用水为超纯水。阿斯巴甜、安赛蜜、糖精钠和甜蜜素均为1 000 μg/mL。
1.2 仪器与设备
Agilent 6495 液相质谱联用仪（美国Agilent公司）;Centrifuge 5804 R 高速冷冻离心机（德国Eppendorf公司）;Milli-Q 超纯水处理系统（德国Merck公司）;T18 均质机（德国IKA公司）。
1.3 实验方法
1.3.1 样品处理
称取样品约2 g置于50 mL离心管中，加入20 mL超纯水后用均质机匀浆，10 000 r/min 离心5 min，上清液过0.2 μm微孔水相滤膜后收集于进样瓶中，待上液质联用仪检测，进样量2 ?L。
1.3.2 标准溶液的配制
分别移取1 000 μg/mL的阿斯巴甜、安蜜、糖精钠和甜蜜素100 μL于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，得到1 μg/mL的混合标准储备液。用水将混合标准储备液逐级稀释得到1 ng/mL、5 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL、80 ng/mL和100 ng/mL的混合标准溶液。混合标准溶液直接进样，进样量2 ?L。
1.3.3 样品测定
（1）色谱条件。色谱柱：Poroshell 120EC-C18;柱温：室温;流动相：A为超纯水（含0.1%甲酸），B为甲醇;液相色谱梯度洗脱程序见表1。
（2）质谱条件。电离方式ESI-，监测模式MRM，离子源温度200 ℃，离子喷雾电压3 000 V，各组分定性定量离子对等参数，见表2。
2 结果与分析
2.1 仪器条件优化
将1 μg/mL的混合标液，利用针泵进样，找到各组分母离子和子离子以确定MRM离子对，优化碰撞能，结果见表2。确定最优质谱检测条件后进一步优化液相色谱条件，色谱柱：Poroshell 120EC-C18;柱温：室温;流动相：A为超纯水（含0.1%甲酸），B为甲醇;流速：0.3 mL/min;液相色谱梯度洗脱程序见表1。仪器条件优化后目标化合物离子色谱图见图1，各组分达到完全分离，满足实验条件。
2.2 标准曲线及定量限
nlc202208161639
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