冠心病患者血小板活性与高敏C反应蛋白的关系

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　　【摘要】 目的 探讨冠心病患者血小板活化膜糖蛋白GpⅡb/Ⅲa、P-selectin(P-选择素)的变化及其与高敏C反应蛋白(hs-CRP)的关系。方法 用三色全血流式细胞术测定40例冠心病患者外周血中血小板GPⅡb/Ⅲa、P-selectin的表达水平,并检测患者hs-CRP水平,与30例健康对照者比较。结果 冠心病组GpⅡb/Ⅲa、P-selectin、hs-CRP均高于健康对照组(均 P<0.001)。冠心病组GPⅡb/Ⅲa与hs-CRP呈正相关(r=0.45,P<0.005),P-selectin与hs-CRP呈正相关(r=0.59,P<0.001)。结论 冠心病患者血清hs-CRP增加、血小板明显活化,其血小板活化程度与hs-CRP关系密切。
　　【关键词】 冠状动脉疾病; 血小板活化; 高敏C反应蛋白
　　
　　Therelation between platelet activation and hs-CRP in patients with coronary artery disease
　　
　　TAN Jie,ZHANG Hong-yu,TANG Yu-xing.Departmen of Cardiology,the Fifth Affiliated Hospital of sun yat-sen University,Zhuhai 519000,China
　　【Abstract】 Objective To investigate the relationship among platelet membrane glucoproteins (GPⅡb/Ⅲa and P-selectin) and hs-CRP in patients with coronary artery disease.Methods Subjects were divided into 2 groups (40 patients with coronary artery disease,30cases of healthy subjects).Positive rates of PAC-1 and P-selectin were measured with tricolor flow cytometry.Hemorrheology was determined,and positive rates ofGPⅡb/Ⅲa and P-selectin were measured with tricolor flow cytometry.Hs-CRP levels were measured by nephelometry and turbidimetry in patients and normal controls.Results Compared with healthy group,hs-CRP levels and the expressions of both GPⅡb/Ⅲa、P-selectin were increased significantly in patients with coronary artery disease (all P<0.05).There is apositive correlation between the GPⅡb/Ⅲa、P-selectin and hs-CRP in patients with coronary artery disease.Conclusion The platelet in patients with coronary artery disease is at the overactivated state.Hs-CRP is involved in coronary artery disease.There is a relation between platelet activation and systemic inflammation in patients with coronary artery disease.
　　【Key words】Coronary artery disease; Platelet activation; Hs-CRP.
　　
　　血小板活化与血管内皮细胞的损伤是血栓形成和进展的始发因素。GPⅡb/Ⅲa、P-selectin是活化血小板的特异性分子标志物,在血栓形成和放大过程中,在冠心病的发生、发展中起着非常重要的作用。冠心病与炎症的关系日益受到人们重视,越来越多的证据支持局部炎症或全身的炎症反应在动脉粥样硬化及其并发症的发生和发展中起到重要的作用。C反应蛋白(CRP)作为炎症反应的急性期蛋白之一于临床上被广泛应用,本试验用三色全血流式细胞术测定外周血中血小板GPⅡb/Ⅲa、P-selectin,用免疫比浊法测定高敏C反应蛋白(hs-CRP),探讨上述参数之间的相关性,以观察其在冠心病患者中的变化和临床价值。
　　1 资料与方法
　　1.1 资料 40例患者,男20例,女20例,平均年龄(57.49±6.32)岁,为2008年10月至2010年3月我院患者,其中不稳定心绞痛(UA)18例,稳定性心绞痛(SA)14例,心肌梗死(MI)8例,均符合 WHO诊断标准。2周内均无服用影响血小板功能药物史。健康对照30名,男15例,女15例,平均年龄(56.78±5.74)岁,为同期我院健康体检者,与冠心病组的年龄及性别差异无统计学意义。
　　1.2 试剂 异硫氰酸荧光素标记抗人GPⅡb/IIIa抗体、多甲藻素-叶绿素蛋白标记抗人CD61抗体、藻红蛋白标记抗人P-selectin抗体,异硫氰酸荧光素标记、多甲藻素-叶绿素蛋白标记的同型对照大鼠IgG(均为美国B.D.公司产品)。
　　1.3 主要仪器美国BD公司 FACSCalibur流式细胞仪。
　　1.4 方法
　　1.4.1 检测活化血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa、P-selectin 所有受试者(肺心组与健康对照组)均于晨起采静脉血前2 ml,迅速送检。用流式细胞仪检测,Cell Quest软件采集和分析数据,血小板GPⅡb/Ⅲa、P-selectin含量以其阳性血小板百分率表示。
　　1.4.2 血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)测定 冠心病患者与健康对照者均于清晨空腹抽取肘正中静脉血,用EDTA抗凝后,送实验室离心分取血清,采用免疫比浊法测定,试剂盒由北京利德曼生物技术有限公司提供,操作过程严格按照说明书进行。
　　1.4.3 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件处理数据,所有计量资料用均数±标准差(x±s)表示,均数间比较采用t检验,两个变量间的关系采用相关分析,P<0.05表示有显著差异。
　　2 结果
　　2.1 肺心组血小板GPⅡb/Ⅲa、P-selectin的表达率均明显高于健康对照组(均P<0.001)(见表1)。
　　2.2 肺心组hs-CRP高于健康对照组(均P<0.001)(见表1)。
　　2.3 相关分析表明肺心组血小板GPⅡb/Ⅲa与hs-CRP有显著的正相关(r=0.45,P<0.005);P-selectin与hs-CRP有显著的正相关(r=0.59,P<0.001)。

　　3 讨论
　　冠心病的主要病理基础是动脉粥样硬化(AS),而炎症是动脉粥样硬化的特征之一。由于AS的发生,血管内皮细胞损伤、胶原暴露促使血小板粘附,同时冠脉内的脂质斑块造成局部血流动力学改变,产生高切变可激活血小板,而且脂质斑块易发生溃破,脂质暴露于血液也可引起血小板活化[1]。血小板活化后,颗粒膜蛋白在质膜上高水平表达,引起GpⅡb/Ⅲa、P-selectin的显著性改变。
　　血小板活化、聚集是凝血的基础。近年来研究发现血小板在冠心病的发生、发展及其转归中可能起着重要作用,GPⅡb/Ⅲa在血小板聚集过程中起重要作用。血小板活化时,GPⅡb/Ⅲa分子上的纤维蛋白原受体暴露,使血小板能与血浆中的纤维蛋白原结合、聚集[2]。P-selectin亦称CD62P存在于血小板α-颗粒内,同时存在于内皮细胞的Weibel-Palada小体膜上。P-selectin在未活化的内皮细胞膜上有一定数量的基础表达,在血小板活化时与血小板表面的质膜融合,并在血小板膜上表达或出现在血浆中。在静息血小板P-selectin极少,因此,P-selectin可作为血小板活化的分子标志物之一,是后期血小板活化的标志物[3]。三色流式分析法是在常规流式分析法检测基础上发展起来的一种多参数分析,同时在全血标本中加入三色荧光标记的单克隆抗体,直接观察全血中血小板膜上血小板GPⅡb/Ⅲa、P-selectin,更客观可靠。本试验通过三色流式分析方法检测冠心病患者全血,发现GPⅡb/Ⅲa、P-selectin表达明显高于健康组,与文献报道相符[4]。
　　本研究结果显示冠心病组hs-CRP明显高于健康组并与GPⅡb/Ⅲa、P-selectin之间呈正相关。近年来已经证实炎症机制在冠心病的发生和并发症中起重要作用,CRP是急性时相反应蛋白中重要的蛋白之一,是一种敏感的炎症、组织损伤、感染的标志物。CRP在心血管事件发生的预示及治疗后预后判断等方面有重要价值[5,6]。有炎症存在时,CRP明显升高。前瞻性“内科医师健康研究”揭示,高水平 CRP可使 AMI的危 险性增加3倍,CRP是较敏感的心血管事件预测因子[6],本研究结果与其相符。正常血浆中CRP含量极低,随着分子生物学和免疫学的发展,临床上可用新的方法检出低浓度的CRP称为hs-CRP,尚未有文献报道冠心病患者GPⅡb/Ⅲa、P-selectin与hs-CRP之间的相关性研究报道,CRP可诱导单核细胞表达组织因子,启动凝血过程,增高血栓形成危险,它与冠心病严重程度呈正相关。
　　综上所述,冠心病患者血清显著hs-CRP、血小板明显活化,血小板活化程度与hs-CRP变化关系密切,提示血小板活化与和炎症可能共同参与冠心病的进程,测定血小板活化标志物 GPⅡb/Ⅲa、P-selectin与hs-CRP,对冠心病的诊断、预防、疗效监测及预后判断都有重要意义。
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