成都双流地区慢性萎缩性胃炎相关幽门螺杆菌的耐药分析研究

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　　【摘 要】 目的： 探讨成都市双流地区慢性萎缩性胃炎患者幽门螺杆菌（Hp）的耐药情况及Hp细胞毒素相关基因A（cagA）与萎缩性胃炎关系。方法：对200株临床分离菌株，进行培养及纸片扩散法药敏试验，采用PCR法检测Hp的cagA基因。结果：成都双流地区Hp对阿莫西林、呋喃唑酮、甲硝唑、替硝唑、克拉霉素的耐药率分别为12.5%、1%、65%、10%和14%，HP菌株cagA基因的阳性率为74.5%。结论：本地区阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、替硝唑可作为根除Hp的一线药物。本地区Hp感染菌株以cagA基因型为主，该基因型Hp感染与萎缩性胃炎发生密切相关。
　　【关键词】 幽门螺杆菌;慢性萎缩性胃炎;耐药性;cagA基因
　　【中图分类号】R573.3+ 2【文献标志码】A【文章编号】1005-0019（2019）09-018-01
　　Abstract Objective： TO investigate the resistance profile of Helicobacter pylori associated chronic atrophic gastritis and the relationship between cagA gene.Methods： A total of 200 H.pylori isolates were cultured and tested for cagA gene by PCR.The susceptibility testing was done by disk diffusion technique.Results ：The percentage of H.pylori isolates resistant to amoxicillin， furazolidone， metronidazole， tindazole， clarithromycin was 12.5%、1%、65%、10%、14%，respectively，In Shuangliu ，Chengdu. The prevalence of cagA gene in H. pylori was 74.5%.Conclusions ：Amoxicillin， furazolidone， clarithromycin ，tindazole are the first-choice therapy for H. pylori.The H. pylori infection in Shuangliu mostly due to cagA gene which is related to chronic atrophic gastritis.
　　Key words：
　　Helicobacter pylori; chronic atrophic gastritis; Resitance; cagA gene
　　慢性胃炎主要由幽门螺杆菌（Helicobacter .pylori，Hp）感染所引起，感染后几乎均存在慢性活动性胃炎（ chronic active gastritis），亦即Hp胃炎[1-2]，感染Hp后少有自发清除，因此慢性胃炎长期持续存在，部分发展为慢性萎缩性胃炎，发生胃癌的危险明显高于普通人群[3]。近年报道，我国Hp对多种抗生素耐药呈上升趋势[4]，耐药率存在地区差异。Hp基因的多态性有地域差异，不同的Hp基因型可能导致不同的临床结果[5]，而其中细胞毒素相关基因A（cytotoxin associated gene A， cagA）是Hp重要的毒力因子，有文献报道cagA参与了萎缩性胃炎的发生发展[6]，加重胃部粘膜萎缩[7]。本次研究通过对本地区萎缩性胃炎患者Hp耐药检测和测定Hp菌株的cagA基因，来指导临床用药。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　200株Hp来自2016年06月-2017年12月成都市双流区中医医院和成都市双流区第二人民医院胃镜室，从慢性萎缩性胃炎患者胃窦粘膜分离得到。幽门螺杆菌培养基、布氏肉汤、微需氧袋（青岛海博生物），酪蛋白绵羊血平皿 （成都精博瑞生物科技有限公司），彎曲杆菌鉴定板条（法国生物梅里埃公司）。 阿莫西林、呋喃唑酮、甲硝唑药敏纸片（英国OXOID公司），替硝唑、克拉霉素药敏纸片（北京九州天瑞科技有限公司）。细菌基因组DNA提取试剂盒（杭州昊鑫生物科技股份有限公司），PCR试剂盒（天根生化科技有限公司）。
　　1.2 方法
　　1.2.1 Hp的培养及检测
　　将活检取得胃窦部黏膜行快速尿素酶试验，强阳性标本做Hp培养。将标本接种于Hp培养基，置于微需氧袋37℃，培养72小时，按照《厌氧菌和微需氧菌感染与实验诊断》[8]中Hp鉴定方法。经染色镜检以及尿素酶阳性的菌株通过弯曲杆菌鉴定板条鉴定，于布氏肉汤-80℃保存备用。
　　1.2.2 药敏试验
　　采用纸片扩散法，将细菌调制成6×107CFU/mL的菌悬液，涂布于酪蛋白绵羊血平皿，贴上药敏纸片并放入微需氧袋，37℃，培养3d后，测量抑菌圈直径。结果判定按照中国食品药品检定研究院制定的抗菌药物药敏试验判定标准确定5种抗菌药药敏试验判断标准。
　　1.2.3 Hp DN A提取和PCR扩增
　　细菌基因组DNA提取试剂盒提取HpDNA。PCR扩增200株cagA基因，PCR引物序列： p1 5′-AAA GGA GTC GGC GGT TTC A-3′，p2 5′-CCT GCT TGA TTT GCC TCA TCA-3′，扩增片段长度为298bp。引物由成都博奥独立医学实验室合成。PCR反应体系50μL。反应条件： 95℃5min，60℃1min， 72℃1min，共32个循环， 最后72℃延伸5min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳观察片段大小。HpN CTC11637（第三军医大学药剂学教研室提供）作为阳性对照。若在298bp处出现橙黄色条带则为cagA阳性。 　　2 结果
　　2.1 药敏结果
　　2.2 PCR扩增结果
　　200株Hp PCR法共检测出149株含cagA基因，检出率为74.5%。具有298bp特异条带者为cagA阳性。
　　3 讨论
　　近年研究表明，我国目前慢性萎缩性胃炎的发病率较高，有上消化道症状患者，经胃镜检查慢性萎缩性胃炎比例高达23.2% ，胃窦病理检查提示萎缩者占35.1%，高于内镜提示萎缩的比例，同时胃窦的Hp 阳性率为33.5%[9]。成都双流地区经济和医疗较发达，慢性萎缩性胃炎患病率高，Hp耐药现象常见。反复上腹痛，饱胀，反酸，纳差等症状影响患者的生活质量，增加患者心理负担。通过对本地区萎缩性胃炎Hp进行药敏试验、基因检测，可为患者提供精准治疗，进一步提高Hp根治率，减少滥用抗生素，降低胃癌的发生。
　　本次研究对Hp进行5种抗菌药物药敏检测，结果显示Hp对阿莫西林、呋喃唑酮、甲硝唑、替硝唑、克拉霉素的耐药率分别为12.5%、1%、65%、10%和14%。甲硝唑具有较高的耐药率，与重庆地区的91. 67%[10]、国内其他地区40%-70%基本一致，不建议本地区使用，而替硝唑作为甲硝唑同类的替代药物耐药率低。阿莫西林耐药率低，抗Hp作用强，可作为根除Hp的一线治疗。目前我国Hp对克拉霉素的耐药呈上升趋势，对于在高耐药率地区（ 如克拉霉素耐药率> 15%[11]），国内共识建议使用克拉霉素方案前行药敏试验。本地区克拉霉素方案可使用。呋喃唑酮耐药率低，尚无需考虑是否耐药。使用PCR方法检测200株Hp cagA基因，结果cagA基因的阳性率为74.5%，我们认为本地区Hp感染以cagA基因阳性菌株为主，该基因型Hp感染与萎缩性胃炎发生密切相关。因此对于本地区Hp相关萎缩性胃炎，予以积极的抗Hp治疗，可能使患者获益更大。
　　参考文献
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