白细胞残留量检测方法的改进

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　　【摘要】 目的 对白细胞残留量检测方法进行改进， 令结果更准确， 操作更快速。方法 利用血细胞计数仪使用的溶血素替代结晶紫染色液， 然后利用大容量 Nageotte血细胞计数盘在显微镜下计数。
　　结果 无需提前配置试剂， 试验操作时间短， 溶血素对白细胞影响小， 对红细胞和血小板溶解充分， 无背景的干扰， 令检测结果更准确。结论 利用血细胞计数仪使用的溶血素替代结晶紫染色液， 能够提高白细胞残留量的检测准确度和检测速度。
　　【关键词】 白细胞残留量;溶血素;结晶紫染色液
　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.33.103
　　随着医学科学的发展， 临床成分输血治疗日益扩大， 人们对血液质量、输血治疗和输血安全提出了更高层次的要
　　求[1]。目前的科学技术手段并不能制造出人造血液， 因此临床用血只能选择采集健康人体的血液， 输血治疗被广泛的应用于外伤性失血、严重烧伤、产后大出血以及各种大型手术等。输血技术在不断的发展， 临床常采用滤除白细胞后的血液制品作为主要的输血产品。白细胞是血液中的主要成分之一， 其主要功能是防御作用， 根据种类可分为中性粒细胞、嗜碱粒细胞、嗜酸粒细胞以及单核细胞等， 根据种类的不同以不同的方式参与机体的防御反应， 例如中性粒细胞具有很强的吞噬性， 能够对侵入机体的微生物病原体进行吞噬， 然后再进行自身降解， 并释放出多种溶酶体酶类以溶解其周围组织形成脓液， 最后达到清除微生物病原体的作用。而在输血中， 白细胞是导致多种非溶血性发热性发热反应的主要因素， 因此在临床的输血过程中， 所选取的多为滤去大部分白细胞之后的血液制品， 使用去白细胞血液产品能够有效的降低非溶血性发热性发热反应、急性肺损伤、输血相关性移植物抗宿主病以及人白细胞抗原系统（HLA）同种免疫等不良反应的发生率， 去除白细胞可有效避免白细胞代谢产物引起的各种输血反应已得到证实[2]， 《全血及成分血质量要求》GB 18469-2012已于2012年7月1日实施， 其中明确规定了各种成分血的白细胞残留量的标准。《血站技术操作规程》2012版中附录F9.1， 已提供推荐的白细胞残留量的检测方法， 即自行配制结晶紫染色液与待测样本一定比例混合， 然后用大容量 Nageotte血细胞计数盘在显微镜下计數。该方法经过实际工作验证， 发现存在一些不足， 比如每次试验需要配制试剂， 操作繁琐， 而且冰醋酸对红细胞及血小板的溶解不充分， 过多的残渣影响白细胞的计数， 结晶紫的染色效果也不佳等情况， 也直接影响白细胞的计数。为此， 作者设计了试验， 对白细胞残留量的检测方法进行了改进， 取得了良好的效果， 检测结果更加准确， 现报告如下。
　　1 材料与方法
　　1. 1 材料 上海光电医用电子仪器有限公司生产的溶血素， 批号：18080672。
　　1. 2 仪器 德国进口大容量 Nageotte血细胞计数盘;奥林巴斯显微镜。
　　1. 3 方法
　　1. 3. 1 操作 50 μl血液标本加入450 μl溶血素中， 充分混匀。在Nageotte计数池中加入上述混合液， 将计数池置于带盖潮湿容器中， 于室温放置5 min。在200倍显微镜下对计数池中两个计数区（每区有20个长方形格）的白细胞计数， 40行相当于50 μl。
　　1. 3. 2 计算 白细胞数/μl=2个区域白细胞计数和×10/50 μl，
　　公式中：10为稀释倍数， 50 μl为计数池2个区的容积。每袋中残留白细胞数按下列公式计算：残留白细胞数/袋=白细胞数/μl×去白细胞血液容量（ml）×1000。
　　2 结果
　　推荐方法中的结晶紫储存液配置的保存期为6个月， 使用液每次现用现配且需要利用0.22 μm过滤器过滤， 改进的方法无需提前配置试剂， 溶血素的保存期一般为1年， 且血细胞计数仪为血站非常普及的仪器设备， 容易直接获得溶血素， 试验操作时间短， 溶血素对白细胞影响小， 对红细胞和血小板溶解充分， 无背景的干扰， 方便显微镜下的人工计数， 令检测结果更准确。
　　3 讨论
　　目前， 临床的用血量仍在不断的增加， 输血医学也在不断的发展中， 人们对于输血引发的不良反应以及并发症危害的关注程度也越来越高， 如何在合理应用血液资源的同时尽量减少因输血引发的一系列不良反应是目前输血界与临床医疗部门所共同关注的热点话题。当前已经确认血液中的白细胞是引发输血严重不良反应的主要原因。白细胞是人体免疫机制的重要细胞种类， 主要为粒细胞、单核细胞以及淋巴细胞三个种类， 在病菌侵袭人体时， 白细胞能够通过变形以穿过毛细血管壁并在病菌入侵部位聚集， 对病菌进行包围后吞噬， 从而达到清除病菌的目的， 因此， 血清白细胞数量增高提示可能有炎症发生。白细胞一般在组织中发挥作用， 其可以伸出伪足进行变形运动从毛细血管内皮细胞的间隙挤出并进入血管周围组织内， 之后通过变形运动在组织内进行游走， 找到病原体或组织碎片并吞噬， 从而参与对炎症和免疫反应的调控。
　　白细胞计数升高一般分为病理性和生理性， 病理性升高的最常见病因为感染， 但老年患者由于反应性较低， 因此在发生感染时白细胞计数升高不明显;生理性升高常见剧烈运动、饱餐、情绪紧张以及妊娠末期等。白细胞计数降低的常见原因为病毒感染， 如水痘、流行性感冒以及病毒性肝炎等。因此， 临床在对患者进行血常规检查时， 常需要对血清中的白细胞含量进行计数以为临床诊断提供一定的依据， 而在血站则需要检测白细胞的残留量以避免白细胞代谢产物引起的各种输血反应， 同时临床输血也已将滤除白细胞的血液或少白细胞悬浮红细胞作为主要的血液制品选择。
　　去白细胞血液产品的白细胞残留量的控制质量具有非常重要的意义， 若不滤去悬浮红细胞液中的白细胞， 那么大量的白细胞在被输入到患者的体内后会对其造成较大的代谢负担， 从而可能导致患者发生非溶血性发热性输血反应， 不利于患者的机体健康与疾病的治疗[4， 5]。常用的检测白细胞残留量的方法为流式细胞仪与Nageotte血细胞计数盘计数两种。流式细胞仪是一种具有稳定、有效、准确等优点的检测方法， 但所需的设备以及检测费用均较为昂贵， 不利于在临床广泛应用。而若是按照我国目前规定的使用Nageotte血细胞计数盘进行计数， 则所需的计数时间较长且检测样品的过程较为复杂， 在较短时间内只能检测有限量的样品， 因此反应产品的情况就受到了一定的局限。目前所公认的标准为滤除后血液的白细胞数量降低至5×108个/L时即可避免因白细胞抗体所导致的非溶血性发热性输血反应（FNHTRs）， 当残留的白细胞数<5×107个/L时可有效降低输血后移植物抗宿主病的危险， 当残留的白细胞数<5×106个/L时可有效预防HLA抗体所导致的同种免疫以及与白细胞携带病毒相关疾病的传播[6， 7]。影响滤除后血液中白细胞数量的因素有白细胞滤器的选择、过滤前全血的保存时间、过滤前血液是否混匀以及白细胞滤除过程时间的长短等。
　　对白细胞残留量检测方法的改进， 一定程度上提高了准确度和检测速度， 但在实际工作中， 手工操作很难实现标准化操作， 重复性差， 给检测结果带来误差， 并且操作繁琐， 费时长。目前来说， 如果用血细胞计数仪来检测去白细胞悬浮红细胞中的白细胞残留量， 显然灵敏度不够， 因为血细胞计数仪检测的对象都是正常人群及患病人群的血液， 稀释比例也是按照这个浓度来设计的， 试想一下， 如果血细胞计数仪厂家， 能够根据血站的需要， 对程序稍加改动， 针对成分血液的特点设计不同的稀释模式， 从而来完成各种成分血的血细胞计数， 就能够实现标准化操作， 重复性和准确度会大大提高， 且人为因素干扰小。届时， 率先实现这一功能的厂家一定会在血站占有一定的市场。
　　参考文献
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　　[收稿日期：2019-03-25]
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