维生素的检测现状及国际标准检测方法

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　　维生素是各种生物生长和代谢所必需的无处不在的营养卫士，维生素帮助身体中的酶起催化作用，是我们每个人的健康要素。人体旦缺乏维生素，机体代谢会失去平衡，免疫力会下降各种疾病就会趁虚而入，产生维生素缺发怔。
　　
　　维生素检测背景
　　
　　市场上，食品添加剂像药品样被标注上“剂量”。一般的添加食品有婴儿配方食品、谷类产品和果汁，可以为日常饮食添加更多营养成分。食品中添加的维生素必须进行严格控制，维生素在添加进食品之前就应通过检测，如果储存后再使用，则应重新检测。Eu ropean Di rective 2002／46 EC制定了系列关于食品添加剂标识及检测添加过维生素的食品中标注的维生素含量的法规。我国国家标准GB5413－2010对婴幼儿配方食品与乳品中维生素含量也有明确的规定，标准中涉及的方法有微生物法及高效液相色谱法。
　　维生素传统测定方法大多步骤繁琐，检测周期长，操作费时，其中些方法受干扰因素影响大，灵敏度较低，而在实际工作中往往要求测定结果准确、测定周期短、经济合算，这就导致对维生素快速分析方法的需求越来越迫切。为此，德国拜发公司将继续秉承其研发宗旨，致力于追求简便、快速、准确的维生素分析检测方法。
　　
　　维生素检测方法
　　
　　国际及国内维生素检测方法要为维生素法及HPLC，德国拜发R-Biopharm公司根据国际现行方法研发的配套检测产品能够使检测方法更简单省时，检测结果更准确可靠。微生物法根据维生素为细菌生长所必需的原理，以细菌繁殖程度或代谢产物定量该维生素含量，适用于检测多种衍生物的总和。国家标准GB5413中检测维生素％、烟酸和烟酰胺、叶酸、泛酸、生物素及肌醇测定第法(仲裁法)均为等同采用AOAC的方法――微生物法。微生物方法检测叶酸是国际官方机构唯认可的方法。尽管微生物法灵敏度高，结果准确，但传统微生物法有许多局限性：整个实验周期长，批次检测结果重复性差，检测结果误差大。
　　德国拜发公司的VitaFast维生素检测试剂盒(见图1)检测方法为AOACRl认证方法及AOAC、EN、§64 LFGB(德国食品及日用品法)推荐方法，其对传统方法做了改良,将96孔酶标板和实验室般常规配备的酶标仪引进方法中，采用与国际标准完全相同的微生物法原理，以llSA微孔板方法为形式和载体，进行维生素测定。德国拜发公司出品的VltaFast。维生素检测试剂盒，利用包被有对应各种维生素的特异性微生物的微孔板，大大减少了试剂的消耗，缩短了加样及人工读取检测结果的时间。
　　VitaFast。维生素检测试剂盒的检测试验过程(见图2)只需将培养基、维生素标准液和稀释过的样品提取液加入微孔板中，在37℃于黑暗条件下培养24～44小时，随后用酶标仪在610～630nm或540～550nm条件下读取结果，简单易用，只需24～48小时即可出结果，比传统的微生物方法直接节约了4-5天的时问，更直接简化了检测步骤和流程(见表1)。该试剂盒是根据参考方法(AOAC、EU、§64 LFBG)研发的，准确率高(cV<10％)，标样的回收率可达到95％～105％，非常适合作为检测强化营养食品中的添加维生素的常规方法。
　　
　　2.仪器方法――HPLC液相色谱法及LC-MS-MS液质联用法
　　HPLC高效液相色谱法是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离，分离过程是个分配平衡过程。其样品前处理简单，待测物般不需要衍生化；灵敏度高(检出限达ng水平)，特异性强，常用的检测器有荧光检测器(FD)、紫外吸收检测器(UV)、电化学检测器(ECD)等；分离速度快(10-30分钟)、效果好，适合多组份及同分异构叶酸及生物素检测的免疫亲和柱，用于样品中维生素的纯化，广泛适用于多种样品，且样品前处理及操作简单，相比于MBA方法，具有更高的精确性和特异性，更加省时高效。其开发的新型高效维生素B12亲和柱EASI-EXTRACIVitamin B12(LGE)已通过美国AOAC审核和比对验证。研究人员LGE免疫亲和柱对提取后的样品进行纯化，并通过HPLC液相色谱或LC-MS-MS测定，测定结果准确度高：标准偏差为2.1％，重现性为4.3％，检测限和定量检测限为0.10和0.30ug／kg。该法适用范围广与传统的微生物方法相比，具有快速、方便、灵敏度和准确性高的特点。亲和柱法关键是通过除去样品中的其他非维生素B12物质的方法，从而起到浓缩样品中的维生素B12的目的，使得样品中维生素B12含量达到液相色谱法检测限，提高其检测灵敏度。
　　
　　3.其他推广方法
　　除了微生物法及HPLC法和LCMS MS法外，德国拜发公司还开发了灵敏度和特异性都很高的ELlSA酶联免疫试剂盒及酶法检测试剂盒。酶法试剂盒可用于维生素c的检测，该方法为MEBAK Commision中检测果汁等食体的分离；可次性分析多种水溶性维生素。逐渐成为检测维生素的常用分析方法。
　　LC-MS-MS液质联用法基于质谱分析，先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度，从而实现分析目的。不纯的样品要用色谱和质谱联用仪，是通过色谱分离，质谱充当色谱的检测器。
　　德国拜发公司配合HPLC高效液相色谱方法和LC-MS-MS法，按照ISO质量体系研发和推出了针对维生素B12品中维生素c的标准方法；而德国拜发生产的刚SA酶联免疫试剂盒能快速、方便、准确地定量检测食品中的维生素B12生物素及叶酸等成分，不需要配备昂贵的仪器设备，大大节省了检测时问和测试成本。

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