怡力康片剂提取工艺研究
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【摘要】目的 考察怡力康片剂提取工艺。方法 利用薄层扫描法和紫外分光光度法,以黄芪甲苷和多糖含量为指标成分,采用正交试验考察提取次数、提取时间及料液比例以优化提取工艺。结果 优化的提取工艺条件为A2B3C3,即加10倍量水加热回流提取3次,每次2小时。结论 该工艺稳定可行,可以作为该制剂工业化提取条件。
【关键词】怡力康片 黄芪甲苷 多糖 正交试验
【中图分类号】R246.5 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484(2010)09-00-02
Study on the extraction procedures of Yi Li Kang tablets
【Abstract】Objective: To optimize the extraction procedure of Yi-Li-Kang tablets. Methods: The optimal conditions of extraction process for Yi-Li-Kang tablets were selected by evaluating the extractive yield of astragaloside IV and polysaccharides as marks with the methods of TLC and Ultraviolet spectrophotometry. The extract conditions, such as extraction times, extraction time and ratio of solvent to material were investigated by the orthonogal design. Results: The optimum extraction condition was established as follows: extracting 2 hours for three times and the ratio of solvent to material 1:10.Conclusion: The present extraction procedure was stable and feasible, which can be used as pharmaceutical industrial extraction condition.
【Key words】YiLiKang tablets; astragaloside IV; polysaccharide; orthogonal test
运动性疲劳一直是运动训练学、运动生理学界研究的热点和难点问题,随着现代竞技运动水平的提高,运动强度越来越大,因此如何增强运动能力、快速消除疲劳并最终提高运动员的竞技水平始终是困扰广大教练员和运动员的难题。目前,人们对于运动性疲劳的恢复越来越重视,近年来国内外对运动性疲劳进行了大量的基础研究和临床研究,各种新理论、新技术和新方法不断出现,其中传统医学中有很多促进运动免疫功能恢复的宝藏有待研究、开发。中医药在消除疲劳、改善运动能力的理论和实践中有其独特的优势和潜力, 怡力康片剂是由黄芪、淫羊藿、刺五加、绞股蓝、枸杞等药物组成,具有补肾壮阳、益气健脾、理气活血的作用。用于快速消除疲劳,提高机体运动能力等,使失衡的机体迅速恢复平衡,从而恢复正常功能。本文以处方中君药黄芪主要成分黄芪甲苷和多糖为指标成分,采用正交试验法考察提取时间、提取次数、溶剂用量等因素对提取工艺的影响,以探讨最佳提取工艺,为怡力康片的新药开发提供基础研究资料。
1 实验材料及仪器
1.1 材料与试药
黄芪、淫羊藿、刺五加、绞股蓝、枸杞等药材(购自泰安永春堂药店),按照2005年版中国药典一部各品种项下检查, 符合规定。黄芪甲苷(批号: 07812-200109)化学对照品,中国药品生物制品检定所提供。实验中所用试剂甲醇、氯仿、正丁醇等均为分析纯。
1.2 仪器
CD60薄层扫描仪(德国Desaga);S-60紫外分光光度计(上海棱光仪器厂);FA1004型分析天平(上海精科天平)
2 实验设计
在预实验的基础上,选择料液比例(A)、提取时间(B)、提取次数(C)三个因素进行考察,各因素均确定为三个水平,见表1;然后根据所制定的因素水平选用L9(34)正交表来安排试验,见表2。
3 方法与结果
3.1 黄芪甲苷的含量测定
3.1.1 标准曲线的制备
精密称取黄芪甲苷0.0022g,置10ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成0.22mg/ml对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液2μl、5μl、7μl、10μl,点在同一硅胶G高效板上,以氯仿∶甲醇∶水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点清晰。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录ⅥB)实验,λS=527nm,λR=650nm,测量峰面积积分值,得回归方程为Y=326.7546X-4.9208,r=0.99991,表明黄芪甲苷在0.44-2.2μg/mL范围内线性关系良好。结果见图1、图2。
3.1.2 供试品溶液的制备
按处方比例称取黄芪等处方药材,以水煎煮提取,先加规定量的水将药材浸透后提取,提取液滤过,合并各滤液,浓缩,真空干燥后备用。取正交试验样品适量(相当黄芪药材3g),精密称定,置索氏提取器中,加甲醇40ml,冷浸过夜,再加甲醇适量,回流4小时,提取液回收甲醇并浓缩至干,残渣加水10ml,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次20ml,合并正丁醇提取液,用氨试液提取2次,每次20ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,用甲醇溶解并转移至2ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
3.1.3 含量测定方法
精密吸取供试品溶液5μl按标准曲线制备项下操作。将所测结果代入回归方程计算样品中黄芪甲苷的含量。
3.2 多糖的含量测定
3.2.1 对照品溶液的制备
精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1111g,用蒸馏水溶解并定容至100ml,摇匀。
3.2.2 反应试剂的制备
称取苯酚36.14g,铝片0.36g,NaHCO30.18g置于烧瓶中,收集182℃的馏分。称取所收集的馏分5.0g加适量水溶解,定容至100ml,摇匀,即得5%苯酚溶液,置棕色瓶中,放入冰箱,备用。
3.2.3 标准曲线的绘制
分别从3.2.1项下制备的对照品溶液中精密移取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml至10ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。精密移取以上溶液各2ml至具塞试管中,加入5%苯酚1ml,摇匀,缓缓倒入浓硫酸5ml,盖上塞子,振摇5min。然后放入40℃水浴反应30min,取出置冰水浴中30min使反应停止。以蒸馏水为空白,用相同方法制备供试品溶液。于490nm波长处测定其吸光度值,以吸光度值为纵坐标,对照品浓度(mg/ml)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程:Y=0.2343X+0.102(相关系数r=0.9996),结果表明黄芪多糖在11.1～88.8μg/mL范围内呈良好线性关系。
3.2.4 供试品溶液的制备
称取干浸膏各0.02g,精密称定,蒸馏水溶解定容至100ml。精密移取以上溶液各2ml至具塞试管中,按3.2.3标准曲线制备操作,在490nm波长处测定其吸光度值,按标准曲线方程计算干浸膏中总多糖含量。
3.3 实验结果评价
以提取结果满分为100分,其中黄芪甲苷含量占70分,多糖含量占30分,以各指标得分之和为综合评分,实验结果见表2
综合评分=
3.4 方差分析
用SPSS11. 5对实验结果进行方差分析,结果见表3所示。
由表2和表3知,影响因素大小顺序为B(提取时间) > A(料液比例)>C(提取次数),其中B (提取时间)和A(料液比例)有显著性影响,C(提取次数)没有显著性影响。故选择提取的工艺条件为A2B3C3,即10倍量水提取3次,每次2小时。
3.4 提取工艺验证实验
平行称取3份复方药材,按优化工艺A2B3C进行提取,测定黄芪甲苷和多糖含量,验证优化提取工艺的可行性,结果见表4。
由表4验证结果可知,怡力康片优化提取工艺稳定可行。
4 结论
试验筛选的怡力康片的提取优化工艺为A2B3C3,即10倍量水加热回流提取3次,每次提取2小时。该工艺稳定可行,可作为怡力康片剂生产的提取工艺。处方黄芪为方中君药,含有皂苷、多糖等有效成分,均为水溶性成分,特别是结合该复方有提高免疫力抗疲劳的功效,故采取水煎煮提取工艺。可以体现中药复方“多组分协同作用”的整体优势,因此选择黄芪甲苷和多糖的综合评分作为最终评价指标,以提高正交工艺筛选结果的合理性与准确性,从而保证临床疗效。
参考文献
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作者单位:
1.泰山医学院临床学院 271000
2.泰山医学院药学院 271016
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