云芝、灵芝和柱状田头菇胞外多糖对果蝇寿命的影响

来源:用户上传      作者: 张峰源等

　　张峰源　张　松　曾剑锋　罗炜杰
　　摘要：研究了云芝、灵芝、柱状田头菇等3种食药用真菌胞外多糖及复合多糖对黑腹果蝇寿命的影响，分别将3种食药用真菌胞外多糖及复合多糖以1.5g/L的剂量加入果蝇培养基中，观察对黑腹果蝇寿命的影响，结果表明，3种食药用真菌的胞外多糖及复合多糖对果蝇寿命均有不同程度的延长，云芝5g/L、柱状田头菇5g/L、云芝2.5g/L+柱状田头菇2.5g/L、灵芝2.5g/I+柱状田头菇2.5g/L对果蝇平均寿命延长率分别达到了36.38％、46.60％、36.69％、47.08％。
　　关键词：云芝：灵芝；柱状田头菇；胞外多糖；复合多糖；果蝇寿命
　　中图分类号：R285
　　文献标识码：A
　　文章编号：1007-7847(2007)02-0130-04
　　
　　我国老年人口平均每年增加3.28％，超过了总人口年均增长速度，已经步入老龄化国家行列，延长老年人的寿命，使老年人保持良好的健康状况就显得非常重要，一些食药用真菌多糖具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的活性，起到保护生物膜和延缓衰老的作用，采用果蝇生存测验来研究大型真菌多糖抗衰老作用的报道并不多，复合多糖对果蝇寿命影响的试验研究更少，本试验通过云芝、灵芝、柱状田头菇3种食药用真菌胞外多糖及复合多糖对果蝇寿命的影响来研究其抗衰老作用，为开发新的抗衰老功能食品和药品提供实验依据。
　　
　　1材料与方法
　　
　　1.1材料
　　1)云芝(Coriolus versicolor)、灵芝(Ganodermalucidum)、柱状田头菇(Agrocybe cylindracea)菌种和野生型纯种黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)，由华南师范大学生命科学学院提供；2)菌种培养基配方：马铃薯(去皮)200g，K2HPO21g，MgSO41g，蛋白胨1g，葡萄糖20g，硫酸铵1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH为6.5；3)果蝇基础培养基的配方：超细玉米粉100g，红糖135g，琼脂15g，苯甲酸1.5g(溶解于30mL 95％的乙醇)，干酵母10g，蒸馏水740mL。
　　
　　1.2方法
　　1.2.1胞外多糖提取
　　BIOF-2000型发酵罐液体发酵3种食药用真菌，分离菌丝体及发酵液，将发酵液经RE-52B旋转蒸发仪浓缩、Seveg法去蛋白、乙醇沉淀多糖后，L-550低速大容量离心机分离沉淀，美国Vir-tis Genesis真空冷冻干燥器干燥，即得胞外多糖。
　　1.2.2果蝇寿命实验
　　参照钟耀广的方法配制果蝇基础培养基，收取10内羽化的果蝇，用乙醚将其麻醉后，分雌雄，挑取体型大小相近的果蝇随机分组引入含基础培养基的指管中培养，剂量试验组在基础培养基中培养到第21d挑取健壮果蝇，引入含待测多糖的培养基中培养，每管20只果蝇，每个处理6只管，雌雄各3只管，单多糖浓度分别为1.5g/L复合多糖浓度为1.5g/L，其中单味多糖比例为1：1，空白对照组培养基为基础培养基，试验在25℃，相对湿度50％～70％的培养箱内进行，每4d更换培养基，给药日起每日定时统计果蝇死亡数目直至最后一只死亡，实验结束后计算每组的平均寿命、半数死亡时间和最高寿命(每组最后死亡的10只果蝇的平均存活天数为该组的最高寿命)，试验数据用DPS软件进行统计，采用LSD法进行方差分析。
　　
　　2结果与分析
　　
　　2.1云芝、灵芝和柱状田头菇胞外多糖及复合多糖对雄性果蝇寿命的影响
　　从表1可以看出，剂量试验组除云芝2.5g/L+灵芝2.5g/L剂量的复合多糖组外，其他食药用真菌胞外多糖剂量组的雄性果蝇平均寿命均比空白对照组有不同程度的提高，其中，5g／L的云芝胞外多糖、1g/L的柱状田头菇胞外多糖1.5g/L的柱状田头菇胞外多糖、2.5g/L的云芝与2.5g/L的柱状田头菇复合胞外多糖、2.5g/L的灵芝与2.5g/L柱状田头菇复合胞外多糖5个剂量组，能极显著提高雄性果蝇的平均寿命(P<0.01)，平均寿命延长率分别达到36.38％、33.41％、46.60％、36.69％、47.08％、1g/L的云芝胞外多糖、1g/L的灵芝胞外多糖、0.5g/L灵芝与0.5g/L柱状田头菇复合胞外多糖3个剂量组，能显著提高雄性果蝇的平均寿命(P<0.05)，其平均寿命延长率分别达到19.20％、13.15％、16.18％，但云芝2.5g/L与灵芝2.5g/L复合多糖组反而降低了雄性果蝇的平均寿命，具有负作用，平均寿命比空白对照下降10.06％。
　　5g/L的云芝胞外多糖，1g/L的柱状田头菇胞外多糖、5g/L的柱状田头菇胞外多糖、2.5g/L的云芝与2.5g/L的柱状田头菇复合胞外多糖、2.5g/L的灵芝与2.5g/L柱状田头菇复合胞外多糖5个剂量组，能极显著提高雄性果蝇的半数死亡时间(P<0.01)，1g/L及5g／L的灵芝胞外多糖也能显著提高雄性果蝇的半数死亡时间(P<0.05)。
　　1g/L及5g／L云芝胞外多糖、1g/L及5g/L柱状田头菇胞外多糖、2.5g/L的云芝与2.5g/L的柱状田头菇复合胞外多糖、2.5g/L的灵芝与2.5g/L柱状田头菇复合胞外多糖6个剂量组，可以极显著提高雄性果蝇的最高寿命(P<0.01)。
　　
　　2.2云芝、灵芝和柱状田头菇胞外多糖及复合多糖对雌性果蝇寿命的影响
　　从表2可以看出，3种食药用真菌胞外多糖及复合多糖各试验组均能延长雌性果蝇的平均寿命，5g/L的云芝胞外多糖、5g/L的柱状田头菇胞外多糖能极显著提高雌性果蝇平均寿命(P<0.01)，平均寿命延长率达到了22.07％，16.66％，1g/L的灵芝胞外多糖、1g/L的柱状田头菇胞外多糖、2.5g/L的云芝与2.5g/L的柱状田头菇复合胞外多糖、0.5g/L的灵芝与0.5g/L柱状田头菇复合胞外多糖、2.5g/L的灵芝与2.5g/L柱状田头菇复合胞外多糖对雌性果蝇平均寿命延长率分别达到了12.08％、11.91％、15.43％、17.24％、15.72％，与空白对照组差异达到了显著水平(P<0.05)。
　　5g/L的云芝胞外多糖、1g/L的柱状田头菇胞外多糖、2.5g／L的云芝与2.5g/L的柱状田头菇复合胞外多糖、0.5g/L的灵芝与0.5g/L柱状田头菇复合胞外多糖、2.5g/L的灵芝与2.5g/L柱状田头菇复合胞外多糖能极显著提高雌性果蝇的半数死亡时间(P<0.01).1g/L的灵芝胞外多糖、2.5g/L的云芝与2.5g/L的灵芝的复合胞外多糖也可以显著提高雌性果蝇的半

数死亡时间(P<0.05)，5g/L的云芝、灵芝、柱状田头菇胞外多糖，2.5g/L的云芝与2.5g/L的柱状田头菇复合胞外多糖、0.5g/L的灵芝与0.5g/L柱状田头菇复合胞外多糖能极显著提高雌性果蝇的最高寿命(P<0.01)，1g/L的灵芝胞外多糖也可以显著提高雌性果蝇的最高寿命(P<0.05)。
　　
　　3讨论
　　
　　衰老是任何多细胞生物随着时间的推移而产生的一种自发性的必然过程，一般地说，是指随着年龄的增长，而产生的一系列生理学和解剖学方面的变化，表现为组织改变，器官衰老及其功能适应性和抵抗力的减退，果蝇许多代谢途径、生理学功能和发育阶段类似哺乳动物，也具有与人类相似的生长发育、繁殖和衰老阶段，因而可用果蝇的生存试验来检验样品的延缓衰老作用，在果蝇生存测验的几个指标中，平均寿命是最重要的指标，是综合药效的反映；而半数死亡时间则偏向于反映药物对体弱果蝇的抗衰老作用；寿命越长的果蝇摄取的药物越多，蓄积的毒素就可能越多，最高寿命偏向于反映药物对健康强壮的果蝇的抗衰老作用和果蝇对某药物过多摄取的耐受力，本研究结果表明，云芝、灵芝和柱状田头菇胞外多糖及部分复合多糖具有良好的抗衰老作用，云芝、柱状田头菇胞外多糖可以延长果蝇的平均寿命，提高果蝇的半数死亡时间及最高寿命，而灵芝胞外多糖对果蝇平均寿命、半数死亡时间也具有一定延长作用，而在最高寿命指标上，对雄性果蝇具有负效应，且浓度增大，负效应也增大，但对雌性果蝇则具有显著的提高作用，浓度增大，延寿效果也增强，这表明，灵芝多糖可以较好地增强雌性果蝇体质，但如果雄性果蝇长期大量服用摄取，则会出现中毒现象，这提示剂量效应可能与受试果蝇性别差异造成的体质差异有关，另外，云芝、柱状田头菇胞外多糖对雄性果蝇寿命各指标的提高作用优于对雌性果蝇的作用，以5g/L的柱状田头菇胞外多糖试验组为例，对雄性果蝇的平均寿命延长率达到了46.60％，而对雌性果蝇寿命的延长率则只达16.66％，这说明了不同性别的受试果蝇对抗衰老药物的最适浓度、剂量范围的要求是不同的，
　　苏富琴等报道，香菇、姬松茸茯苓3种真菌多糖复合使用时，具有增强淋巴细胞活性的作用，且复合多糖具有协同效应，我们的试验发现，多数配伍的复合多糖与空白对照比较，具有良好的抗衰老效果，其中以2.5g/L的云芝与2.5g/L的柱状田头菇复合多糖的剂量组对雄性果蝇的延寿效果最好，其延寿率已超过单多糖，不同多糖存在协同效应，而在云芝2.5g/L与灵芝2.5g/L复合多糖组对雄性果蝇寿命有负作用，降低了平均寿命，这说明云芝和灵芝多糖在混合使用时，多糖问的相互作用存在抵触，不同食药用真菌的多糖配伍使用时，多糖间的相互作用机制是复杂的，多糖间协同作用的机制仍需进一步的探讨。
　　云芝多糖肽可以诱导机体产生白细胞介素-6、干扰素、巨噬细胞、免疫球蛋白-G及T-淋巴细胞而增强机体免疫力，可以通过诱导机体产生SOD，谷胱甘肽过氧化酶及其他一些免疫增强因子来抑制多种肿瘤细胞的增殖，提高肿瘤患者的免疫力，灵芝多糖在小鼠在体试验及离体细胞培养试验中发现，多糖通过降低肿瘤坏死因子(TNF-a)水平及提高SOD活性来保护由CCl4引起的小鼠肝损伤，提示灵芝多糖具有一定的抗氧化性，台湾学者研究发现，柱状田头菇的热水提取物及甲醇提取物的体外试验中，二者均具有清除自由基作用，具有良好的抗氧化性，本研究也发现，云芝、灵芝、柱状田头菇胞外多糖具有良好的抗衰老作用，可以显著延长果蝇寿命，抗衰老作用的机理可能也与其免疫调节作用及抗氧化功能有关。

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