罗勒多糖对宫颈癌Hela细胞增殖凋亡的影响
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【摘 要】 目的：从细胞生物学角度观察罗勒多糖体外对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用。方法：1）Hela细胞培养及传代。2）Hela细胞分组及给药处理：阴性对照组（不加任何药物）、BPS低剂量组（25μg/mL）、BPS中剂量组（50μg/mL）、BPS高剂量组（100μg/mL）、阳性对照组（紫杉醇50μg/mL）。3）MTT法检测细胞生长增殖情况;流式细胞技术检测细胞凋亡。结果：阴性对照组、罗勒多糖25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL剂量及阳性对照组（紫杉醇50μg/mL）作用Hela细胞24h后的细胞抑制率分别为0.3%、18.1%、29.8%、85.2%、90.1%，罗勒多糖对Hela细胞增殖的抑制作用与药物浓度正相关（P<0.01）;罗勒多糖25μg/mL剂量作用Hela细胞24h、48h、72h后，凋亡率分别为 2.8%、9%、29%，细胞凋亡率与药物作用时间正相关（P<0.01）。结论：1）罗勒多糖体外对人宫颈癌Hela细胞增殖生长具有良好的抑制作用。2）罗勒多糖体外对人宫颈癌Hela细胞增殖作用和其浓度密切相关。
【关键词】 罗勒多糖;Hela细胞;细胞凋亡;流式细胞术
罗勒多糖（Basil polysaccharide，BPS）系从中国传统化淤名方中的一味具有抗血小板作用的药物全草植物罗勒中经分离、提取得到的药物有效成分[1]。虽然有研究表明罗勒多糖能抑制一些人肿瘤细胞增殖[2]、粘附[3]、迁移[4]并诱导其凋亡[5]，但关于其对于宫颈癌的治疗作用研究较少，偶有报道。因此，本实验以宫颈癌Hela细胞为研究对象，通过MTT检测细胞生长增殖实验、流式细胞技术来探讨BPS对宫颈癌Hela细胞相关生物学行为的影响。
1 材料与方法
1.1 实验材料
紫杉醇购自佳木斯市医药公司;罗勒多糖提取物由佳木斯医学院天然药物实验室自提;RPMI 1640培养基（批号：8115400）购自美国Gibco公司;新生牛血清购自杭州四季青工程材料有限公司。人宫颈癌Hela细胞由佳木斯医学院基础医学院实验室提供。
1.2 实验方法
1.2.1 常规细胞培养人宫颈癌Hela细胞 按照常规细胞培养方法培养人宫颈癌Hela细胞。
1.2.2 药物配制 罗勒多糖溶液：取1μL 10mg/mL罗勒多糖储备液于EP管中，加入9μL DMSO 溶液稀释至10μL，使之浓度为1mg/mL，再将稀释后的药物用2%的FBS-DMEM或RPMI 1640培养液稀释，使药物终浓度分别为25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。另取紫杉醇母液，DMSO溶解稀释成50μg/mL浓度。
1.2.3 MTT法检测罗勒多糖对宫颈癌Hela细胞的抑制作用 取生长状态为对数生长期的Hela细胞，胰蛋白酶消化，1000rpm离心5min，混匀制成悬液，调整浓度为5×104mL
3 讨论
罗勒为唇形科罗勒属植物（Ocimum basilicum L.var.pilosum（Willd.） Benth），又名九层塔、气香草等。性温昧辛。有疏风行气，化湿消食、活血、解毒之功能。用于外感头痛、食胀气滞、脘痛、泄泻、月经不调、跌打损伤、蛇虫咬伤、皮肤湿疮、瘾疹痛痒等症的治疗[6]，罗勒多糖是其有效成分。
本实验研究结果显示，不同剂量罗勒多糖作用人宫颈癌Hela细胞24h后，相对阴性对照组，罗勒多糖各剂量组及阳性对照组（紫杉醇50μg/mL）的细胞增殖抑制率和凋亡率都升高，BPS干预Hela细胞后，24h、48h、72h各时间点用药组细胞均出现明显的凋亡，并且凋亡率随作用时间延长而相应增加。所以罗勒多糖体外对人宫颈癌Hela细胞增殖生长具有良好的抑制作用而且增殖作用和其浓度密切相关。
参考文献：
[1] Feng B，Zhu Y，Su Z，et al.Basil polysaccharide attenuates hepatocellular carcinoma metastasis in rat by suppressing H3K9me2 histone methylation under hepatic artery ligation-induced hypoxia[J].International Journal of Biological Macromolecules，2017，107（Pt B）：S0141813017326983.
[2] 李路，李蘭，肖丽，等.罗勒多糖对紫杉醇抑制肺腺癌A549细胞增殖作用的影响[J].山东中医杂志，2016，35（06）：554-557.
[3] 罗勒多糖调节上皮间质转化抑制肝癌侵袭转移的机制研究[D].广州中医药大学，2015.
[4] 朱庆均，闫丹丹，张成华，等.罗勒多糖抑制TGF-β诱导的A549细胞侵袭运动能力研究[J].中华肿瘤防治杂志，2017，24（13）：875-880.
[5] 朱庆均，连松刚，李兰，等.罗勒多糖对HLECs中VEGFR-2/3表达的影响[J].中药新药与临床药理，2016，（03）：342-346.
[6] Lv J，Shao Q，Wang H，et al.Effects and mechanisms of curcumin and basil polysaccharide on the invasion of SKOV3 cells and dendritic cells[J].Molecular Medicine Reports，2013，08（05）：1580-1586.
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