免疫胶体金法快速检测水产品中喹诺酮类药
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摘要：目的：探究免疫胶体金法在快速检测水产品中奎诺酮类药物的应用效果。方法：本文使用实验室自制的产QNAs抗体杂交瘤细胞株，水产取养殖场中的虾、鱼及憋等水产品共100g，研制出灵敏度较高的免疫胶体金试剂条，对样品做好预处理，采用免疫胶体金检测方法。结果：对奎诺酮类药物进行测量，经过预处理后，检测结果均为阳性，在试剂板中可以看出，中间位置处的颜色较深，说明经过有机试剂净化或提取后结果更加干净和清晰，检测灵敏度相对较高。结论：免疫胶体金法能够快速的检测出水产品中的奎诺酮类药物，应在水产品药物残留检测中大力推广使用。
关键词：免疫胶体金法;奎诺酮;水产品
近年来，我国的水产事业发展迅速，水产中的药物残留对人们的身体健康造成极大威胁，加大对药物残留进行研究具有必要性。奎诺酮作为一类抗菌药，在水产养殖业中预防及治疗细菌中被广泛应用。目前，免疫胶体金法被应用到药物残留筛查中，能够快速的检测出水产中奎诺酮类药物的含量，确保人们的饮食安全。
喹诺酮类是合成抗菌药物，喹诺酮类抗菌药物通过阻止促旋酶靶向细菌DNA而起到杀菌剂的作用。喹诺酮类抗菌药是合成抗菌药物，这类抗菌药物的药理作用逐渐为人所知。这些药物在临床应用和适应症治疗方面取得了一些进展。由于其广谱，低毒，效果好，给药方便等优点，被广泛用于临床治疗。然而，与此同时，患者的不良反应也有所增加。
1资料及方法
1.1一般资料
本文使用实验室自制的产QNAs抗体杂交瘤细胞株，水产取养殖场中的虾、鱼及憋等水产品共100g，使用搅拌机将其搅碎，将其放在-18℃的温度下保存。在本次实验中，所使用的试剂包括超纯水、氯金酸、胎牛血清（FBS）、RPMI1640培养基、0.02mol·L-1Tris-HCI缓冲液，奎诺酮类药物等。所使用的仪器及设备为二氧化碳培养箱、酶标仪、三维喷点平台、分光光度计、空气吹干机、高效液相色谱仪等。
1.2方法
体外抗体制备：将适量的RPMI1640培养基，加入到QH12杂交瘤细胞株复苏中，将10000g进行离心，时间控制在30min，并慢慢加入0.02mol·L-1的PBS，将其进行充分的搅拌，确保能够完全沉淀。再使用PBS复溶，测量其吸光值，并对蛋白质的浓度进行测量，并放在-86℃的温度下冻存。
对胶体金进行研制：对硫酸-重铬酸钾洗液进行浸泡，浸泡结束后进行清洗，待洗净后进行烘干，以备使用。在250mL的三角瓶内壁涂抹2mL1307镀剂，并将多余的液体倒出，将其放到60℃的温度下烘干。
胶体金标记：使用0.01molL-1的PB缓冲液将冻干抗体制备为0.5mg·L-1的溶液，离心时间应持续60min，将蛋白聚合物去除掉，使用0.1mol·L-1Tris-HCI将100mL的胶体金的pH值调节至8.7。将1mL的胶体金加入到小试管中，对抗体量做好预标记，在装空白胶体金垫试剂条上滴入2μL锦标抗体溶液，对加入5ng·mL-1Cip或PBS后的T线级C线显色及抑制效果进行观察。使用最佳的抗体量对60mL的胶体金进行标记，将15000g的离心时间控制在30min，对底部位置紫红色的金抗体进行保留，将其保存在4℃的温度下。
2结果
体外抗体的制备，对QH12杂交瘤细胞株进行体外培养后，获取4.4g的纯化抗体。扫描胶体金紫外-可见光200-800nm时，扫描的范围应控制在紫外-可见光波长为200-800nm范围内，应确保吸收峰与吸收曲线的高度一致性。实验结果证实，胶体金的重复波形具有一致性。胶体金标记抗体实验，当抗体的浓度为0.5-2.0μg·mL-1时，Cip对T线上的抗体反应及抗原展现出了较强的抑制性作用;当抗体浓度>4.0μg·mL-1时，未产生抑制作用;当抗体浓度<1.0μg·mL-1时，显色的颜色相对偏浅。胶体金标记抗体显色情况见表1。吹干溶液，对奎诺酮类药物进行测量，经过预处理后，检测结果均为阳性，在试剂板中可以看出，中间位置处的颜色较深，说明经过有机试剂净化或提取后结果更加干净和清晰，检测灵敏度相对较高。
3讨论
单克隆抗体的获取主要是通过对杂交瘤细胞采用体外制备方法来实现，来完成对水产品中喹诺酮类药物的检测，目前主要时使用免疫胶体金试剂盒。近年来，免疫胶体金法被广泛应用于水产品喹诺酮类药物检测中，该种检测方法具有成本低、操作便利、检测速度快等优势。免疫胶体金法在检测过程中，会与多种奎诺酮药物发生反应，与其他类型的药物不会发生反应，因此在检测时，不受其他药物残留的干扰，使奎诺酮药物的筛查更加快速。
喹诺酮是一种合成抗菌药物。其作用机制是通过抑制细菌DNA解旋酶的活性来抑制mRNA和蛋白质的合成，使细菌细胞延伸到细丝中并最终演变成液泡。同时，这些抗菌剂也可以使用外切核酸酶来阻断DNA复制过程并实现DNA降解。与其他抗菌药物相比，喹诺酮类药物之间没有显着的交叉耐药性。喹诺酮类抗菌药物的临床应用得到了广泛的推广。目前，喹诺酮类抗菌药物主要用于治疗呼吸道感染，尿路感染，皮肤感染，关节感染等，通常用作围手术期的预防药物。喹诺酮类抗菌药物对革兰氏阴性菌和阳性菌有很好的疗效。这些抗菌剂的杀菌作用对包括大肠杆菌，志贺氏菌和肠杆菌在内的真菌具有良好的杀菌作用。临床合理应用喹诺酮类抗生素不会增加临床不良反应的发生率，不良反应的特征是恶心，腹痛和胃肠道反应。患者对上述不良反应有一定的耐受性。
綜上所述，免疫胶体金法能够快速的检测出水产品中的奎诺酮类药物，应在水产品药物残留检测中大力推广使用。
参考文献：
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