墨兰新品种‘梦之兰’的组织培养技术

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　　摘要：通过对墨兰新品种‘梦之兰’的组织培养技术研究，探讨了不同激素浓度对‘梦之兰’的诱导启动、继代增殖、生根壮苗培养和不同基质配比对移栽成活率的影响，获得‘梦之兰’诱导启动最佳培养基为改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.6 mg·L-1、最佳继代增殖培养基为改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.4 mg·L-1+NAA0.6 mg·L-1、最佳生根培养基为1/2改良MS+IBA1.0 mg·L-1、最佳移栽基质为松树皮：珍珠岩=1∶1。
　　关键词：墨兰;梦之兰;组织培养
　　中图分类号：S682.3文献标识码：A文章编号：1004-3020（2019）01-0015-04
　　Study on Tissue Culture Technology of New Cymbidum sinense Variety ‘Mengzhilan’Zhang Yuejiao
　　（Fujian Forestry Science and Technology Test CenterNanjing363600）
　　Abstract： Through the study on the tissue culture technology of the new Cymbidium sinense variety ‘Mengzhilan’， We explored the effects of different hormone concentrations on the induction initiation， subculture， rooting and seedling culture and different matrix ratios of ‘Mengzhilan’ on the survival rate of transplanting. The results showed that the optimal medium for the induction to ‘Mengzhilan’ was Modified MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.6 mg·L-1， and the best subculture medium was Modified MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.4 mg·L-1+NAA0.6 mg·L-1， the best rooting medium is 1/2 Modified MS+IBA1.0 mg·L-1， The best transplanting substrate is pine bark∶perlite=1∶1.
　　Key words：Cymbidium sinense; ‘Mengzhilan’ orchid; tissue culture
　　墨蘭新品种‘梦之兰’（Cymbidium sinense‘Mengzhilan’），是兰科兰属植物，由福建省林业科技试验中心选育，2014年10月通过福建省林木品种审定委员会审定为良种。其叶片剑形，3～5枚，深绿色，叶质厚，光泽佳，叶尖至叶片中下部有金黄色线艺，叶幅宽阔，丛生在椭圆形的假鳞茎上。总状花序，花茎直立，高出叶面，花朵向上开放，每支具10～20朵或更多的花，花瓣竹叶型，带金光，有较浓的花香，花期10月至次年3月。蒴果狭椭圆形，长5～8 cm，宽1～2 cm。喜阴，忌强光，喜温暖，忌严寒，喜湿，忌燥。梦之兰线艺表现完美，在无开花之时，叶片疏密有致，气宇轩昂，临风摇曳，婀娜多姿，整个体态优雅俊秀，开花时，各花葶之间刚柔兼备，顾盼呼应，异常端庄素雅，和着沁人心脾的清新香气，让人心旷神怡，爱不释手。‘梦之兰’因其叶片、花色、花径、瓣型、花朵数等方面区别于普通任何细叶兰类，其商品性优于目前类似的墨兰品种。当前，‘梦之兰’的存圃量远远不能满足市场需要，而传统的分株繁殖系数小，且速度慢。为此，为满足兰农对‘梦之兰’种苗的需求，开展‘梦之兰’的组织培养技术研究具有重要的意义。
　　1材料与方法
　　1.1试验地点
　　该试验在福建省林业科技试验中心进行。
　　1.2外植体选择
　　选择长势良好、植株健壮、无病虫害、个体表现优异的‘梦之兰’优良单株进行组培快繁技术研究。
　　1.3培养条件
　　培养基均为加入蔗糖20～30 g/L+琼脂5～6 g/L，光照强度2 000～4 000 lx，培养温度（25±3）℃，培养室相对湿度70%～75%，pH值5.1～5.4[1]。
　　1.4试验方法
　　（1）诱导培养。以优良单株的茎尖为外植体，以改良MS为基本培养基，添加不同浓度的6-BA（0.5、1.0、1.5）和KT（0.2、0.4、0.6），统计其诱导成活率，研究不同激素浓度对诱导启动的影响。
　　（2）继代增殖培养。继代增殖培养以改良MS为基本培养基，添加不同激素浓度的6-BA（0.5、1.0、1.5）、KT（0.4、0.6、0.8）和NAA（0.2、0.4、0.6），用L9（34）正交表安排试验[2]，统计其增殖倍数和芽苗生长状态，研究不同激素浓度对继代增殖培养的影响。
　　（3）生根壮苗培养。以1/2改良MS为基本培养基，添加不同激素浓度的IBA（0.3、0.5、1.0）和NAA（0.3、0.5、1.0），统计其生根率，研究不同激素浓度对生根培养的影响。
　　（4）栽培基质的选择。待生根苗根长到1 cm以上时，转至大棚进行炼苗，20 d后进行移栽，将不同比例的鹅卵石、松树皮、珍珠岩和发酵过的花生壳作为移栽基质进行试验，统计其成活率，研究不同比例的移栽基质对成活率的影响。
　　2结果与分析
　　2.1外植体的消毒
　　在外植体选取前，在大棚内对梦之兰优良单株进行杀菌消毒处理，每5 d一次，重复三次，同时控水控肥。然后将优良单株带回实验室，剔除根叶，保留2 cm长带有生长点的茎部，用软毛刷沾洗衣粉水轻轻刷去茎部的尘埃等附着物后，置流水下冲洗1～2 h，沥干水分放入高压灭菌过的封口瓶中置超净工作台进行消毒处理，首先将外植体切成1 cm见方带有生长点的方块置封口瓶中;其次，用75%酒精消毒30 s，无菌水冲洗2遍;再次，用0.1%升汞溶液振荡浸泡3 min，无菌水冲洗3遍;最后，用0.1%升汞溶液静置浸泡2 min，无菌水冲洗3～5遍后备用[3]。 　　2.2不同激素浓度对诱导启动的影响
　　将消毒后的外植体用无菌滤纸吸干表面水分，同时切除与消毒剂接触的表面后，分别接种于诱导培养基中，每瓶接入1个茎尖，15 d后剔除污染瓶，40 d后统计诱导率，见表1。
　　从表1可以看出，3号试验号的诱导率最高，平均诱导率可达68.3%，从试验中也可以看出，3号试验号的外植体萌发启动时间最早，在接种10 d后开始膨大，渐渐产生愈伤组织，部分开始变绿萌发芽点。
　　变异来源自由度SSMSFFa   处理间54736.44947.2923.55**F0.05=3.11   误差12482.6740.22F0.01=5.06   总计175 219.11通过不同激素浓度对诱导启动率的方差分析可以看出（见表2），处理间的F值等于23.55，大于F0.01，达到极显著性水平，所以不同激素浓度对诱导启动率有着极显著的影响，从试验结果可以得出梦之兰最佳诱导启动培养基为改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.6 mg·L-1，其诱导启动率最高。
　　2.3不同激素浓度对继代增殖培养的影响
　　外植体诱导成活后经过一段时间的培养，慢慢的长出不定芽或龙根，待不定芽长至2 cm以上时，将其切取转至继代培养基进行继代培养，50 d后调查增殖芽数，见表3。
　　通过不同激素浓度对继代增殖影响的方差分析（见表4），可以看出，6-BA的F值是51.45，大于F0.05小于F0.01，说明激素6-BA的不同浓度水平对试验结果有显著影响，KT和NAA的F值分别是2.16和7.51，均小于F0.05，说明激素KT和NAA的不同浓度水平对试验结果影响不显著，而这与实际试验的表现相符。不同激素浓度对生根壮苗培养的影响
　　经过50 d左右的继代培养，不定芽苗长至3 cm以上时，即可切取转入生根壮苗培养基中进行生根培养。不定芽转入生根培养基一周后，其切口处渐渐膨大并形成根点，20 d后统计生根率，见表5。
　　从试验结果看，在相同的激素浓度下，激素IBA对梦之兰生根的影响明显优于激素NAA，从激素的浓度水平来看，不定芽在1/2改良MS+IBA1.0 mg·L-1时，生根率最高，平均每株芽苗生根数可达3根以上。
　　2.5不同比例的基质对移栽成活率的影响
　　将煉苗后的生根瓶苗取出，用自来水将附着于基部的培养基冲洗干净，置于0.1～0.5 g·L-1高锰酸钾溶液中浸泡1～3 min后，再用自来水冲洗干净，移栽于不同配比的基质中，30 d后查看生长情况，并统计移栽成活率，见表6。
　　从表6的试验结果可以看出，不同基质配比对梦之兰组培苗的移栽成活率影响较为明显，其中松树皮∶珍珠岩=1∶1的配比移栽成活率最高，可达92%，根尖白透粗壮，吸收营养物质强，叶片浓绿，苗木长势良好。
　　3结语
　　（1）‘梦之兰’是由福建省林业科技试验中心选育的一个墨兰新品种，抗性强品质好，花期在春节期间，市场需求大，为获得大量的种苗满足市场需求，开展‘梦之兰’的组织培养技术研究势在必行。本研究通过对‘梦之兰’外植体诱导、继代增殖培养、生根培养和移栽的试验，获得‘梦之兰’诱导启动最佳培养基为改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.6 mg·L-1、最佳继代增殖培养基为改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.4 mg·L-1+NAA0.6 mg·L-1、最佳生根培养基为1/2改良MS+IBA1.0 mg·L-1、最佳移栽基质为松树皮∶珍珠岩=1∶1。
　　（2）在‘梦之兰’的组织培养中，有效无菌培养物的建立是一个关键要素，在获取外植体前，一定要对选取的植株进行控水控肥和杀菌消毒处理，这有利于外植体的杀菌消毒和诱导培养的开展。
　　（3）在‘梦之兰’的继代增殖和生根培养中，添加适量的天然有机物质，如椰子汁、马铃薯泥、香蕉泥等，可以有效的促进不定芽的增殖、分化和壮苗;在生根培养中添加适量的活性炭，则有利于根系的诱导[4]。
　　（4）对‘梦之兰’生根苗的移栽过程中，一定要将附着于苗木的培养基清洗干净后，置于0.1～0.5 g·L-1高锰酸钾溶液中浸泡1～3 min后再进行移植，这有利于提高苗木的移栽成活率。
　　（5）从培养瓶中移栽的兰花组培苗，其叶片、根系都较为嫩弱，移栽前，基质要做好杀菌消毒，同时发酵透，对松树皮等基质要做到细碎透气，这有利于根系的生长。
　　参考文献
　　[1]于永畅，牛田，孙芳，等.国兰组织培养研究进展[J].山东林业科技，2012（4）：100-103.
　　[2]洪伟.林业试验设计技术与方法[M]，北京：北京技术出版社，1993，148-172.
　　[3]周黎军，魏琴.对组织培养中有效接种操作技术的研究[J].宜宾师范高等专科学校学报，1999[6]：78-80.
　　[4]刘道敏，荣维国，郝睿.国兰“绿蕙红舌”的组织培养技术[J].安徽农业大学学报，2012，39（4）：656-659.
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