复合固相萃取净化前处理检测茶叶中滴滴涕的残留

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　　本文采用乙腈一次性提取，复合固相萃取净化，气相色谱（ECD）检测，建立了一种分析茶叶中滴滴涕各异构体残留量的前处理方法。实验证明经该前处理方法提取的样品，平均回收率在88.2%～102.2%之间，精密度RSD在1.1%～10.5%之间，检出限在0.0006～0.005mg/kg之间。该前处理方法具有试剂使用量少、净化效果好、操作简便、灵敏度高、检出限低、重复性和回收率好等优点。
　　茶叶是我国农业生产中重要的经济作物之一，更是大众喜爱的传统饮品，作为茶叶的国际贸易大国，潜在的农药残留风险已直接影响到我国茶叶出口，也对人类健康造成一定的影响。茶叶中含有色素、挥发性有机酸、茶多酚、茶碱等物质，样品成分复杂，干扰物较多，其前处理的净化效果直接影响到农药残留测定结果的准确性。因此，建立一种更便捷、准确的前处理方法十分重要。本实验使用复合固相萃净化前处理，气相色谱检测滴滴涕各异构体的残留量，取得了较好的检测效果。
　　一、实验部分
　　1、仪器与设备
　　Agilent6890N气相色谱仪（美国Agilent公司），配备ECD检测器;色谱柱：HP-5MS UI（30m×0.25mm×0.25um毛细柱）;电子天平（感量0.01g）;高速组织捣碎机;均质仪（PRO 250）;高速离心机;氮吹仪;固相萃取架。
　　2、试剂与材料
　　丙酮、正己烷、乙腈和甲苯均为色谱纯，无水硫酸钠为分析纯650℃灼烧4小时，储存在干燥器内。洗脱溶剂为乙腈+甲苯（3：1）、丙酮+正己烷（1：9）。石墨化炭黑/氨基复合柱（CNWBOND GCB/NH2500mg/500mg/6mL），弗罗里硅土柱（Cleanert Florisil 1000 mg/6 mL）。滴滴涕农药标准品浓度为100ug/mL，均购于农业农村部环境科研监测所，分别为： p，p′-滴滴伊（p，p′-DDE）、o，p′-滴滴涕（o，p′-DDT）、p，p′-滴滴滴（p，p′-DDD）、p，p′-滴滴涕（p，p′-DDT）。
　　3、样品前处理
　　（1）样品的提取。准确称取2g样品（精确至0.01g）于50mL离心管中加乙腈10mL提取，15000r/min均质2min，8000r/min离心5min，取5mL上清液备用。
　　（2）样品的净化。
　　①将石墨化炭黑/氨基复合柱放入固相萃取架，加入高约1cm的无水硫酸钠，用4 mL乙腈+甲苯（3：1）活化，加入离心后的5ml样品上清液过石墨化炭黑/氨基复合柱，并用20mL玻璃离心管收集，用10mL乙腈+甲苯（（3：1）洗脱，收集所有洗脱液。用80℃水浴通入氮气浓缩近干，加3mL正己烷溶解残渣备用。
　　②弗罗里硅土柱放入固相萃取架，用5mL丙酮+正己烷（1：9），再用5mL正己烷活化平衡。活化液到达填充物表面时倒入“1.4.2.1”溶解液，用15mL玻璃离心管收集，用5ml正己烷+丙酮（9：1）淋洗溶解残渣的玻璃离心管，淋洗液倒入净化柱洗脱，然后再重复一次，收集全部洗脱液用40℃水浴通入氮气浓缩近干。用正己烷定容至1.0ml，混匀装瓶上机检测。
　　4、色谱条件
　　色谱柱：HP-5MS UI（30m×0.25mm×0.25um毛细柱）;载气：高纯氮气（99.999%）;载气流量：1.2mL/min;隔垫吹扫3.0mL/min;尾吹58.8mL/min ;检测器：ECD，检测器温度320℃;进样口温度270℃;进样方式：分流自动进样，分流比10：1;控制模式：恒定流量;升温程序：90℃保持1.0min、以15/min升到200℃保持7.0min、以8℃/min升到230℃保持11min、以30℃/min升到310℃保持3.0min;进样量1.0uL，峰面积外标法定量。
　　二、结果与讨论
　　1、净化方法的选择
　　茶叶中的色素、挥发性有机酸、茶多酚、茶碱等物质会对气相色谱检测造成严重干扰，甚至影响检测结果的准确性，而常用的硫酸磺化法净化，需多次净化，且液液分配操作复杂。本实验采用乙腈作提取溶液，用GCB/NH2石墨化炭黑/氨基复合柱加弗罗里硅土柱复合净化，用于去除样品基质中的类甾体、色素、各种有机酸、蛋白质、糖类和脂肪酸，能够达到良好的净化效果（图1复合固相萃取法凈化的茶叶基质图谱）。但是石墨化炭黑有较强的吸附作用，故在实验中为了获得较好的净化效果和较高的回收率，对洗脱剂进行比较后，选择用乙腈+甲苯（3：1）作为石墨化炭黑/氨基复合柱的洗脱剂，正己烷+丙酮（9：1）作为弗罗里硅土柱的洗脱剂。
　　2、色谱分离情况
　　按照上述色谱条件测试，基质空白杂质峰少对目标峰无干扰，4种滴滴涕异构体可得到良好的分离效果（见图2  4种滴滴涕异构体添加样品色谱图）。
　　3、线性范围及相关系数
　　线性范围为：0.025mg/L～0.5mg/L，各浓度分别为：0.025mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L 、0.25mg/L、0.5mg/L，按上述色谱条件进样分析，通过计算得到相关系数、线性方程、检出限，见表1。
　　4、方法的回收率与精密度
　　准确称取2组，每组3个不含农药残留的茶叶样品，每个样品2.00g。两组样品添加值分别为0.05 mg/kg、0.1 mg/kg，使用上述“1.3样品前处理”方法进行样品提取后分析，两组添加样品回收率和精密度见表2，两组添加样品平均回收率在88.2%～102.2%之间，精密度RSD在1.1%～10.5%之间，检测中未出现色谱峰干扰情况，回收率高，重复性良好。
　　三、结论
　　本文采用乙腈一次性提取，复合固相萃取净化前处理，气相色谱（ECD）检测茶叶中滴滴涕的残留。该前处理方法具有试剂使用量少、净化效果好、操作简便、灵敏度高、检出限低、重复性和回收率好等优点，能够满足茶叶中滴滴涕各异构体残留量的检测需求。
　　（作者单位：236000 安徽省阜阳市农产品质量安全监测中心）
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