固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量

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　　摘要：经过三氯乙酸、乙腈超声震荡离心提取，混合型阳离子交换固相萃取柱净化后的样品采用HPLC法测定。色谱条件：AgilentEclipseXDB-C8柱（4.6x250mm），流动相为乙腈一离子对缓冲液（pH=3.0），体积比]6：84，流速为1.OmL/min;检测波长为240nm;柱温40℃;进样量为20μL。本法相对标准偏差为0.34%，最低检出限为0.05 μ9/rnL，回收率为90%-]05%。本法操作简便，样品出峰快，经济省时，准确可靠，适用于液态奶中三聚氰胺的含量测定。
　　关键词：高效液相色谱法;液态奶;三聚氰胺
　　一、实验仪器与试剂
　　仪器。安捷伦Agilent1260高效液相色谱仪;电子天平;固相萃取柱;pH计;数控超声波萃取器;可控温震荡箱;离心机（转速不低于4000r/min）;漩涡混合器;电热恒温水浴锅;超纯水器。
　　试剂。甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）以及辛烷磺酸钠（色谱纯25g/瓶）;三氯乙酸（1%）;氨水：含量为25% - 28%;甲醇水溶液：甲醇+水（v/v体积比）=50+50;氨化甲醇溶液（5%）：氨水+甲醇（v/v体积比）-5+95;离子对缓冲液：准确称取2.lOg柠檬酸和2.16g辛烷磺酸钠，加入980mL水溶解，调节pH至3.0，定容到IL备用。
　　二、样品处理
　　提取。称取2.Og（精确至O.Olg）试样于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和SmL乙腈，超声提取20min，再震荡提取lOmin，以6000r/min离心20min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，用超纯水定容至lOmL容量瓶中混匀做待净化液。
　　净化。将待净化液转移至已活化的固相萃取柱中，依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，抽至近干，用6mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。洗脱液于50℃的水浴锅上蒸干，残留物用1mL流动相定容，涡旋混合1mm，过0.45μm微孔滤膜得试样液供HPLC测定。
　　三、高效液相色谱法测定
　　色谱条件。色谱柱：AgilentEclipseXDB-C84.6×250mm;流动相：离子对缓冲液一乙腈（86+14，体积比），混匀。流速：1.OmL/min。柱温：40℃。波长：240nm。进样量：20μL。
　　标准储备液及标准曲线绘制。三聚氰胺标准曲线绘制：用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到浓度为0.5、1、2、5、10、20μg/mL的标准工作液，浓度由低到高进样进行检测，如表1所示。
　　由表1可知，三聚氰胺的质量浓度为0.5115μg/mL20.46μg/mL時，其峰面积y与其质量浓度x（“g/mL）的线性关系良好，相关系数为0.9996，线性回归方程为：y=79.56526x-5.56393。
　　精密度实验。取浓度为10.23μg/mL的三聚氰胺加标点连续进样6次，计算其相对标准偏差（RSD），如表2所示。
　　由表2可知，高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的平均回收率为99. 19%，相对标准偏差为0.34%，由此可知，本实验方法的精密度良好，符合实验目的及要求。
　　样品检测及样品加标实验。选取市场上随机抽检的6批次牛奶作为实验样品进行检测，结果如表3。
　　由表3可知，高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的回收率在90% - 105%之间，其分为低、中、高三个浓度梯度的平均回收率分别为103.7%、94.1%、99.2%。
　　检出限。通过3倍信噪比计算得该方法的检出限为0.05μg/mL。
　　四、结论
　　利用高效液相色谱法，采用固相萃取净化样品，离子对试剂缓冲溶液为流动相的方法对牛奶中的三聚氰胺进行检测，试验结果表明：回收率高，检出限低，重现性好。同时该方法操作简便，能够准确快速得到检测结果，满足食品检测实际工作中对液态乳制品中三聚氰胺的检测需要。
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