化妆品中七种抗生素高效液相检测方法研究

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　　摘 要：建立高效液相色谱法检测化妆品中的盐酸美满霉素、甲硝唑、二水土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素和氯霉素7种抗生素。流动相为0.005mol/L草酸溶液，磷酸调pH为2.3，Agilent Eclipse Plus C18（4.6×150mm，5μm） 色谱柱，带有紫外检测器的高效液相色谱仪检测化妆品中7种抗生素，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。结果表明在1-100 mg/L的浓度范围内，线性相关系数均大于0.99，回收率为93.1%～101.3%，RSD为0.3%～2.3%（n=6）。本方法准确可靠，灵敏度高，操作简便，可满足检测工作需求。
　　关键词：高效液相色谱;化妆品;抗生素
　　0 引言
　　抗生素[1]对祛痘治疗皮炎等有很好的效果，但长期使用抗生素会使细菌变异产生耐药性，造成过敏或者药疹的现象，严重会导致人体免疫力下降。国家食品药品监督管理局在《化妆品安全技术规范》（2015版）[2]中已明确规定在化妆品中禁止添加抗生素。现仍有不法商家在化妆品中违规添加抗生素，所以建立准确可靠的化妆品抗生素检测方法具有十分重要的意义。本文用高效液相色谱法[3]对化妆品中的盐酸美满霉素、甲硝唑、二水土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素和氯霉素7种抗生素进行了分析与探讨。
　　1 实验部分
　　1.1 仪器和试剂
　　Agilent 1200 series高效液相色谱仪，紫外检测器，分析天平;超声波清洗器;高速离心机;pH计;纯水仪。甲醇、乙腈（色谱纯）;草酸（分析纯）;盐酸（优级纯）;标准品是盐酸美满霉素、甲硝唑、二水土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素和氯霉素，实验用水为一级水。
　　1.2 色谱条件
　　色谱柱是Agilent Eclipse Plus C18（4.6×150mm，5μm），进样量10μL，柱温30℃，检测波长268nm，流速1.0mL/min，流动相是0.005mol/L草酸溶液（磷酸调pH为2.3）+乙腈行梯度洗脱，梯度洗脱程序是0～6.0min，乙腈：草酸=18：82;6.1～15.0min，乙腈：草酸=25：75;15.1～17.0min，乙腈：草酸=18：82。
　　1.3 标准溶液配制
　　分别称取7种抗生素对照品适量，用甲醇溶解，配制成质量浓度为100 mg/L的混合标准溶液，再逐级稀释成浓度为1、5、10、20、50和100 mg/L的混合标准系列溶液。
　　1.4 样品处理
　　称取1g样品于10mL具塞比色管中，加入甲醇+0.1mol/盐酸（1+1）混合溶液至刻度，振摇，超声提取30min，10000rpm高速离心5min，上清液经0.45μm滤膜过滤，上机。
　　2 结果与讨论
　　2.1 结果
　　质量浓度为5μg/mL的7种抗生素混合标准品的色谱图，见图1。
　　2.2 流动相组成及pH的选择
　　按照标准方法用甲醇—乙腈—草酸行等度洗脱，发现7种抗生素不能完全分离，将3种流动相按照不同的比例行梯度洗脱，虽能有效分离7种抗生素，但基线发生漂移影响积分和定量。考虑有机溶剂乙腈吸收比甲醇小，使用乙腈—草酸作为流动相，配制浓度为0.005mol/L的草酸溶液按1.2方法进行分离，发现除溶剂峰与盐酸美满霉素发生重叠，其他6种目标物均能完全分离，为了使溶剂峰与盐酸美满霉素分离，调节流动相pH为2.3时能使7种目标物完全分离，且峰形尖锐对稱，灵敏度高。不同仪器柱外死体积和柱效不同，溶剂峰与盐酸美满霉素分离情况不同，可适当调节草酸溶液浓度、pH及梯度时间使目标物分离。
　　2.3 线性范围及检出限
　　配制1、5、10、20、50和100mg/L的混合标准系列溶液，以本方法分析，以7种抗生素浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做线性回归方程，以信噪比（S/N）为3时对应的浓度为检出限，盐酸美满霉素、甲硝唑、二水土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素和氯霉素7种抗生素的线性回归方程分别为Y=7.840X+4.381、Y=10.327X+5.247、Y=9.473X+3.647、Y=8.725X-1.676、Y=10.194X-4.085、Y=13.910X-0.804和Y=15.081X+3.214，线性相关系数均大于0.99，检出限分别为 0.44、0.38、2.16、2.54、2.22、3.03和0.86 mg/kg。
　　2.4 精密度及回收率
　　称取不含待测组分的化妆品样品1.0 g共20份，其中2份按照实验方法正常操作，另外18份分成3组，分别添加含有7种抗生素的混合标准储备液，制成20、50和100mg/kg 3组不同浓度的样品做三水平六平行的添加回收试验，实验结果是7种抗生素的平均回收率为93.1%～101.3%，RSD为0.3%～2.3%（n=6），平均回收率和精密度见表1。
　　3 结论
　　本文采用高效液相色谱法对化妆品中7种抗生素进行检测，该方法不仅前处理简单，操作方便，且具有分离效果好，分析快速，低检出限，高灵敏度和精密度等特点，能够符合实验室对化妆品的检测要求。
　　参考文献：
　　[1]吴大南，郑和辉，杨丽华，李洁，祛痘除螨类化妆品中检出抗生素情况的调查[J].中国卫生检验杂志，2006，16 （2）：216.
　　[2]化妆品安全技术规范2015版[S].北京：中华人民共和国国家食品药品监督管理总局，2015.
　　[3]陈黎明，胡国胜，田玉平，朱锡菊，王虎.高效液相色谱法测定化妆品中6种四环素类抗生素[J].中日用化学工业，2010，40（1）：64-66.
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