P53、EGFR在胶质瘤组织中的表达及意义

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　　摘要：目的  评估P53、表皮样生长因子受体（EGFR）在胶质细胞瘤患者组织中的表达情况，分析二者与胶质瘤分级的相关性。方法  选取2018年1月～2019年7月新疆维吾尔自治区人民医院确诊胶质瘤患者组织标本40例作为实验组，选取同期脑外伤或高血压脑出血患者手术切除的正常脑组织15例为对照组，采用S-P免疫组化法检测实验组及对照组标本中的P53及EGFR在胶质瘤中的表达情况，分析P53及EGFR与胶质瘤分级的相关性。结果  实验组不同性别、年龄及肿瘤大小中P53、EGFR的表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）;实验组脑组织中P53及EGFR阳性表达率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;P53、EGFR在不同级别胶质瘤中阳性表达率均呈正相关（r=0.057、0.520，P=0.012、0.017）。脑胶质瘤组织中P53与EGFR表达无明显相关性（r=0.436，P=0.052）。结论  脑胶质瘤组织中P53、EGFR的表达可能与性别、年龄及肿瘤大小无关，P53、EGFR在不同级别胶质瘤中阳性表达率均较高，且胶质瘤级别越高，组织P53、EGFR阳性率越高，联合检测P53及EGFR可能作为胶质瘤分子病理诊断的新指标。
　　关键词：胶质瘤;P53;EGFR
　　Abstract：Objective  To evaluate the expression of P53 and epidermoid growth factor receptor （EGFR） in the tissues of patients with glioma， and to analyze the correlation between the two and the grade of glioma.Methods  From January 2018 to July 2019， 40 patients with glioma diagnosed in Xinjiang Uygur Autonomous Region were selected as the experimental group， and 15 normal brain tissues surgically removed from patients with brain trauma or hypertensive cerebral hemorrhage during the same period were selected as the control group. S-P immunohistochemical method was used to detect the expression of P53 and EGFR in gliomas in the experimental and control samples， and to analyze the correlation between P53 and EGFR and the grade of glioma.Results  There was no statistically significant difference in the expression of P53 and EGFR in different genders， ages and tumor sizes in the experimental group （P>0.05）; the positive expression rates of P53 and EGFR in the brain tissue of the experimental group were higher than that of the control group，the difference was statistically significant （P<0.05）; The positive expression rates of P53 and EGFR in different grades of gliomas were positively correlated （r=0.057， 0.520， P=0.012， 0.017）. There was no significant correlation between P53 and EGFR expression in glioma tissues （r=0.436， P=0.052）.Conclusion  The expression of P53 and EGFR in glioma tissue may not be related to gender， age and tumor size. The positive expression rates of P53 and EGFR in gliomas of different grades are higher， and the higher the grade of glioma， the tissue P53 and EGFR The higher the positive rate， the joint detection of P53 and EGFR may be used as a new indicator of molecular pathological diagnosis of glioma.
　　膠质瘤（glioma，GBM）是颅内第1大肿瘤，恶性程度比较高，肿瘤呈浸润生长，术后复发率高，目前缺乏有效治疗措施。抑癌基因的失活及原癌基因的激活双重因素导致了胶质瘤的发生，其中表皮样生长因子受体（EGFR）的过度表达及扩张激活以及抑癌基因P53的缺失、突变是导致胶质瘤发生的主要分子事件。近年来，随着分子靶向治疗研究的不断深入，P53、EGFR成为肿瘤研究新的热点[1]，二者在胶质瘤的发生、发展中起到了不同的作用，可能为精准治疗胶质瘤提供了潜在新靶点。本研究通过检测胶质瘤组织中的P53及EGFR的表达情况，以期为临床胶质瘤分子病理诊断提供指导。 　　1资料和方法
　　1.1一般资料  收集新疆维吾尔自治区人民医院自2018年1月～2019年7月确诊胶质瘤患者组织标本40例作为实验组，15例脑外伤或高血压脑出血需行手术切除治疗的部分非肿瘤脑组织作为对照组。本研究经新疆维吾尔自治区人民医院伦理委员会批准，患者家属知情同意并签署同意书。实验组男性26例，女性12例;年龄33～59岁，平均年龄（46.58±13.10）岁;对照组男性10例，女性5例;年龄39～59岁，平均年龄（49.14±10.64）岁。术后肿瘤分级：Ⅰ级2例，Ⅱ级8例，Ⅲ级10例，Ⅳ级20例。
　　1.2纳入与排除标准  纳入标准：①所有患者术前均经MRI检查，术后病理确诊为脑胶质瘤;②术前未进行放、化疗，且患者均为第1次手术。排除标准：①复发胶质瘤患者;②颅内其他恶性肿瘤患者;③伴有严重意识障碍的患者。
　　1.3方法  两组组织经10 %甲醛固定，常规石蜡组织包埋，5 μm厚连續切片，采用免疫组化S-P染色法检测两组标本中的P53、EGFR表达情况，一抗终浓度分别为EGFR 1∶100（兔抗人EGFR多克隆抗体，北京博奥森生物技术公司）、P53 1∶100（兔抗人P53多克隆抗体，北京博奥森生物技术公司），苏木素复染、脱水透明，显微镜下观察。
　　1.4结果判定  ①P53肿瘤组织内阳性染色密集区选取400倍镜下计数500 个细胞，无阳性细胞为“-”，细胞核染色为阳性，若阳性细胞≤10%为“+”，若阳性细胞10%～50% 则为“++”，若阳性细胞>50%则为“+++”[2];②EGFR为棕黄色颗粒，主要在细胞质及细胞膜中表达，400倍镜下计数1000个肿瘤细胞，细胞膜及细胞质棕黄色染色为阳性，阳性细胞百分率计分标准如下：>75%计4分，51%～75%计3分，26%～50%计2分，10%～25%计1分，<10%计0分;染色强度评分标准：棕色或棕褐色计3分，棕黄色计2分，淡黄色计1分，无色计0分;以计分和染色强度评分乘积>4分为阳性[3]。
　　1.5观察指标  比较不同性别、年龄、肿瘤大小的胶质瘤组织中P53、EGFR的表达情况，不同组织中P53、EGFR的阳性表达率，P53、EGFR与不同级别胶质瘤组织的关系及脑胶质瘤组织中P53与EGFR表达的关系。
　　1.6统计学方法 采用SPSS 19.0进行统计学分析，计数资料使用[n（%）]表示，比较采用？字2检验。相关性分析采用Spearman相关性分析法，P<0.05表示差异有统计学意义。
　　2结果
　　2.1不同临床特点脑胶质瘤患者P53、EGFR的表达比较  实验组不同性别、年龄及肿瘤大小中P53、EGFR的表达比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。
　　2.2两组脑组织中P53及EGFR表达比较  实验组脑组织中P53及EGFR阳性表达率均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2;对照组HE染色切片见脑组织局灶血管官腔扩张、大小不一、可见较多急慢性炎性细胞浸润;实验组脑组织细胞较密集、有丝分裂活动活跃、微血管增生明显，见图1;实验组P53免疫组化染色见超过30%的细胞显示出核阳性，见图2;实验组EGFR的免疫组化见EGFR呈弥漫性分布，细胞膜及细胞质显示阳性，见图3。
　　2.3 P53、EGFR与不同分级胶质瘤组织的关系  P53、EGFR在不同级别胶质瘤中阳性表达率均呈正相关（r=0.057、0.520，P=0.012、0.017），见表3。
　　2.4脑胶质瘤组织中P53与EGFR的相关性  脑胶质瘤组织中P53与EGFR表达无明显相关性（r=0.436，P=0.052），见表4。
　　3讨论
　　尽管神经胶质瘤的诊断和治疗有所发展，但此类恶性肿瘤进展讯速，患者的预后仍然很差。了解神经胶质瘤的分子机制和进展有助于准确判断影响神经胶质瘤患者预后的因素并选择适当及有效治疗。
　　P53通过调控细胞生长、维护DNA完整性、防止具有癌变倾向的基因突变细胞产生，从而发挥抑癌作用，也是目前研究最多的肿瘤基因，现有研究表明多种肿瘤发生发展常伴有P53基因的突变[4]。P53基因有野生型和突变型两种。P53基因突变是脑胶质瘤中最常见的基因突变，一项儿童胶质瘤研究中发现P53基因突变，且一半患者存在P53显著表达[5]。McNulty SN等[6]研究显示胶质瘤患者中P53突变率高达35%～60%。另有研究显示[7]，高恶度胶质瘤P53免疫组化阳性率显著高于低恶度胶质瘤。表皮样生长因子受体（EGFR）为酪氨酸受体，EGFR的基因重组、扩增及表达通过酪氨酸激酶途径传至细胞核，进而引起细胞增殖。在肿瘤组织中，EGFR促进肿瘤细胞增殖、粘附、新生血管形成、侵袭、转移以及抑制肿瘤细胞凋亡。胶质瘤、头颈部鳞癌、食管癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌组织标本均发现EGFR高表达[8]。
　　既往研究虽有报道其他类型的肿瘤与性别、年龄、肿瘤大小有一定相关性，但本研究中实验组不同性别、年龄及肿瘤大小中P53、EGFR的表达比较，差异无统计学意义（P>0.05），说明脑胶质瘤患者脑组织中P53、EGFR的表达可能与上述因素无关。实验组P53及EGFR阳性表达率均高于对照组（P<0.05），表明二者在脑胶质瘤组织中的表达高于正常脑组织。
　　不同级别胶质瘤组织中EGFR 表达率存在差异，在高级别胶质瘤中表达率明显高于低级别胶质瘤，而在正常脑组织中基本没有表达[9]。本研究中P53和EGFR阳性表达率均随胶质瘤级别升高而升高，且不同级别胶质瘤中阳性表达率呈正相关，说明二者的表达水平与胶质瘤分级之间有密切关系，有助于评估肿瘤恶性程度，P53和EGFR过度表达可推测是胶质瘤不良分化的一种标志。 　　EGFR突变及过度表达可能为高度恶性胶质瘤的早期主要事件，P53也参与了此过程;而P53在低度恶性胶质瘤发生发展过程中同样起作用，EGFR也参与了此过程，二者对肿瘤生发展可能存在促进作用。研究显示[10]，P53及EGFR均可通过相关通路使血管内皮生长因子表达增高，促进肿瘤新生血管生成，为肿瘤生长提供必要营养，加速肿瘤细胞增殖，并形成恶性循环。本研究中脑胶质瘤组织中P53与EGFR表达无明显相关性，与上述研究不一致，可能与本研究样本量过小有关，有待进一步研究。
　　综上所述，P53与EGFR在胶质瘤中随肿瘤级别升高而使表达增强，说明P53、 EGFR均参与了胶质瘤的发生及恶化。因此同步检测胶质瘤组织中的P53及EGFR，对胶质瘤分子生物学机制研究有重要意义，可能成为诊断胶质细胞瘤靶向治疗的新靶点。
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　　收稿日期：2020-02-17;修回日期：2020-03-22
　　编辑/肖婷婷
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