子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase—7的表达及临床意义

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　　[摘要] 目的 研究子宮内膜腺癌组织中凋亡抑制蛋白（cIAP）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7（Caspase-7）的表达情况及临床意义。 方法 采用免疫组织化学SP法对2015年1月～2017年12月于重庆医科大学附属第二医院接受刮宫和手术切除的80例子宫内膜腺癌组织、50例正常子宫内膜组织与50例子宫内膜不典型增生组织中cIAP、Caspase-7表达情况进行检查，并分析cIAP、Caspase-7表达与子宫内膜腺癌患者临床病理特征的关系，子宫内膜腺癌中cIAP、Caspase-7表达的相关性。 结果 子宫内膜腺癌组织cIAP阳性率高于子宫内膜不典型增生组织、子宫内膜正常组织，Caspase-7阳性率低于子宫内膜不典型增生组织、子宫内膜正常组织，差异均有统计学意义（P < 0.05），子宫内膜不典型增生组织、子宫内膜正常组织cIAP阳性率、Caspase-7阳性率比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。组织学分类G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移子宫内膜腺癌患者组织中的cIAP阳性率低于组织学分类G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者，Caspase-7阳性率高于组织学分类G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（P < 0.05）。Spearman相关分析显示，子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase-7的表达呈负相关（r = -0.843，P = 0.039）。 结论 子宫内膜腺癌组织中cIAP存在明显高表达，而Caspase-7存在明显低表达，且两者均与子宫内膜腺癌患者的组织学分类、FIGO分期、淋巴结转移存在密切相关，其两者表达呈负相关，值得临床重点关注。
　　[关键词] 子宫内膜腺癌；凋亡抑制蛋白质类；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7；免疫组织化学法；临床病理特征
　　[中图分类号] R71 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2019）04（b）-0089-04
　　Expression and clinical significance of cIAP and Caspase-7 in endometrial adenocarcinoma
　　HUANG Lu LIU Yanhua LIN Anping
　　Department of Obstetrics and Gynecology， the Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University， Chongqing 400010， China
　　[Abstract] Objective To study the expression and clinical significance of apoptosis inhibitory protein （cIAP） and caspase-7 in endometrial adenocarcinoma tissues. Methods The expression of cIAP and Caspase-7 in 80 cases of endometrial adenocarcinoma， 50 normal endometrium tissues and 50 cases of endometrial dysplasia were examined by immunohistochemical SP method in the Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University from January 2015 to December 2017， and the expression of cIAP， Caspase-7 and intrauterine were analyzed. The relationship between the clinicopathological characteristics and the expression of cIAP and Caspase-7 in endometrial adenocarcinoma. Results The positive rate of cIAP in endometrium adenocarcinoma was higher than that of endometrium atypical hyperplasia and normal endometrium. The positive rate of Caspase-7 was lower than that of endometrium atypical hyperplasia and normal endometrium （P < 0.05）. The endometrium of endometrium was atypical hyperplasia tissue and endometrium was positive. There was no significant difference in cIAP positive rate and Caspase-7 positive rate between normal tissues （P > 0.05）. The positive rate of cIAP in the tissues of G1 to G2， FIGO stage Ⅰ to Ⅱ， and non lymph node metastasis of endometrial adenocarcinoma was lower than that of histological classification G3， FIGO stage Ⅲ to Ⅳ， and lymph node metastasis. The positive rate of Caspase-7 was higher than that of histological classification G3， FIGO stage Ⅲ to Ⅳ， and lymph node metastasis， all of them was statistically significant （P < 0.05）. Spearman correlation analysis showed that the expression of cIAP and Caspase-7 in endometrial adenocarcinoma was negatively correlated （r = -0.843， P = 0.039）. Conclusion There is a significant high expression of cIAP in endometrial adenocarcinoma， while Caspase-7 has obvious low expression. Both of them is closely related to the histological classification， FIGO staging and lymph node metastasis of endometrial adenocarcinoma. The expression of them is negatively correlated， and it is worthy of clinical attention. 　　[Key words] Endometrial adenocarcinoma； Apoptosis inhibits proteins； Cysteine aspartase 7； Immunohistochemistry； Clinicopathological features
　　子宫内膜癌属于临床上较为常见的女性生殖系统恶性肿瘤之一，在女性所有生殖系统恶性肿瘤中占比为20%～30%，且其中80%以上的患者均为子宫内膜腺癌[1]。近年来，随着人们生活水平的不断提高以及饮食结构的逐渐改变，子宫内膜腺癌的发病率正呈逐年升高趋势，已成为严重威胁女性生命健康安全的恶性肿瘤之一[2]。虽然，目前临床上可通过手术与放、化疗等提高子宫内膜腺癌患者的生存率，但晚期子宫内膜腺癌的治愈率仍较低。因此，早期诊断并给予有效的治疗仍是子宫内膜腺癌治疗的关键。有研究[3]报道显示，子宫内膜腺癌的发生、发展是一个多基因变化的过程，细胞凋亡在其中发挥着至关重要的作用。其中凋亡抑制蛋白（cIAP）属于凋亡抑制因子家族成员之一，其可通过抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶7（Caspase-7）以及Caspase-9等的活性，进一步达到抑制细胞凋亡的目的[4]。鉴于此，本研究通过研究子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase-7的表达及临床意义，旨在为临床子宫内膜腺癌的治疗寻找一种新的分子治疗靶点。现作以下报道：
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　选取2015年1月～2017年12月于重庆医科大学附属第二医院（以下简称“我院”）接受刮宫和手术切除的80例子宫内膜腺癌患者存档石蜡标本，正常子宫内膜组织（随机选取癌旁>5 cm处，术后经病理确诊为正常组织）50例存档石蜡标本与子宫内膜不典型增生组织50例存档石蜡标本。纳入标准：①所有患者均经临床影像学检查以及手术病理组织活检确诊；②年龄>18周岁；③临床病历资料完整。排除标准：①合并其他恶性肿瘤者；②入院前接受过手术、放化疗等肿瘤相关治疗者；③伴有心、肝、肾等脏器功能严重障碍者；④存在精神疾病或交流沟通障碍者；⑤正在参与其他研究者；⑥妊娠期或哺乳期妇女。其中，子宫内膜腺癌患者年龄32～78岁，平均（51.32±10.67）岁；组织学分类：G1～G2 58例，G3 22例；FIGO分期[5]：Ⅰ～Ⅱ期55例，Ⅲ～Ⅳ期25例；肌层浸润：<1/2有44例，≥1/2有36例；淋巴结转移：有淋巴结转移27例，无淋巴结转移53例。正常子宫内膜组织妇女的年龄33～79岁，平均（49.38±11.06）岁。子宫内膜不典型增生患者年龄30～77岁，平均（50.05±9.87）岁。三组研究对象均为已婚育龄妇女，且各组年龄、生育史比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。所有患者均签署了知情同意书，本研究经我院医学伦理委员会批准。
　　1.2 研究方法
　　分别采用免疫组织化学法检测各组不同组织的cIAP、Caspase-7表达情况，具体方式如下：分别将各组织以10%的甲醛液固定、冷冻、包埋，并制成4 μm厚的连续切片进行cIAP、Caspase-7免疫组化染色。将标本置于70℃的恒温箱烘烤30 min，二甲苯脱蜡、梯度酒精水化处理，然后予以柠檬酸热修复。取出切片磷酸盐缓冲溶液（PBS）反复冲洗3次，每次3 min，加适量的浓度为3%的双氧水，室温下孵育10 min，再次PBS缓冲液反复冲洗。将血清置于切片上，消除非特异性染色，去除封闭液。予以冲洗、显色、复染、脱水以及透明化处理，最后采用显微镜观察并拍照。其中兔抗人多克隆抗体cIAP（生产批号：20141211）与兔抗人多克隆抗体Caspase-7（生产批号：20141025）均购自美国Prosci公司，免疫组化SP试剂盒（生产批号：20141109）与DAB显色试剂（生产批号：20140916）均购自北京中山金桥生物技术有限公司。
　　1.3 评价标准
　　评价标准参考文献[6]：①cIAP与Caspase-7均表达于子宫内膜腺癌细胞细胞质中，呈棕黄色颗粒状。根据染色程度以及阳性细胞所占比例进行综合评分。其中染色程度评分如下：无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞占比评分如下：随机选取10个高倍镜视野（400×），记录10×100个肿瘤细胞内的阳性细胞占比情况，占比0%为0分，0%～25%为1分，>25%～50%为2分；>50%～75%为3分；>75%为4分。将染色程度评分与阳性细胞占比评分的乘积作为最后结果，0分记为阴性，1～2分记为弱阳性，3～4分记为阳性，>4分记为强阳性。阳性率=（弱阳性+阳性+强阳性）/总例数×100%。
　　1.4 统计学方法
　　采用SPSS 20.0統计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；cIAP与Caspase-7的相关性采用Spearman相关分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 不同子宫内膜组织cIAP、Caspase-7阳性率比较
　　子宫内膜腺癌组织cIAP阳性率高于子宫内膜不典型增生组织、子宫内膜正常组织，Caspase-7阳性率低于子宫内膜不典型增生组织、子宫内膜正常组织，差异均有统计学意义（P < 0.05）；子宫内膜不典型增生组织、子宫内膜正常组织cIAP、Caspase-7阳性率比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。
　　2.2 子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase-7表达与临床病理特征关系分析
　　子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase-7与年龄、肌层浸润均不相关（均P > 0.05）；cIAP、Caspase-7与组织学类型、FIGO分期、淋巴结转移均有关（均P < 0.05）；组织学分类G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移cIAP阳性率低于组织学分类G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者；组织学分类G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移Caspase-7阳性率高于组织学分类G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者。见表2。 　　2.3 子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase-7表达的相关性
　　Spearman相关分析显示，子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase-7的表达呈负相关（r = -0.843，P = 0.039）。见表3。
　　3 讨论
　　子宫内膜癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，其发病率约占女性生殖系统恶性肿瘤的1/3，且在部分发达国家，其发病率甚至超过了宫颈癌[7]。随着子宫内膜活检与宫腔镜技术的广泛应用，其在子宫内膜癌的早期诊断中取得良好效果，但对于部分病理分级较差以及临床分期较晚的患者而言，患者易产生放化疗抵抗，5年生存率并不十分理想[8]。由此，寻找一种新的诊断、治疗、预后靶点显得尤为重要。目前研究[9-10]認为，抑癌基因失活和细胞凋亡紊乱参与了细胞的恶性转化以及肿瘤的进展，在肿瘤细胞逃避机体免疫监督过程中发挥着至关重要的作用，且与肿瘤耐受放化疗以及术后复发均存在密切关系。cIAP是凋亡抑制蛋白家族的重要成员，它可以通过抑制Caspase凋亡经典蛋白，起到抑制细胞凋亡的作用。Choi等[11]研究发现卵巢癌组织中cIAP阳性率明显高于正常卵巢组织，并认为cIAP与卵巢癌发生有密切关系。Gentilin等[12]通过基因芯片对宫颈癌组织进行研究发现， cIAP基因高表达的宫颈癌患者5年生存率较低。而Caspase-7则是Caspase家族的重要成员，主要参与细胞凋亡，与肿瘤发生、发展有密切关系[13]。
　　本研究通过对子宫内膜腺癌组织、正常子宫内膜组织与子宫内膜不典型增生组织中cIAP、Caspase-7表达情况进行比较发现，子宫内膜腺癌组织中cIAP阳性率高、而Caspase-7阳性率低，这和郭真理等[14]的研究报道相一致，提示子宫内膜癌患者cIAP存在明显高表达，而Caspase-7存在明显低表达。分析原因，笔者认为Caspase-3、Caspase-7蛋白水解介导肿瘤细胞的凋亡。而cIAP可直接抑制Caspase蛋白水解的过程，同时与Caspase-3、Caspase-7相结合，进一步对细胞色素C从线粒体释放之后的凋亡信号通路产生抑制作用，最终达到抑制细胞凋亡的作用。另有研究[15]报道显示，cIAP作为凋亡抑制蛋白可能具有促进子宫内上皮细胞恶性增殖转化，而凋亡蛋白Caspase-7可能具有促进子宫内膜肿瘤细胞凋亡的作用。因此，将上述两项指标作为子宫内膜腺癌的治疗新靶点具有较佳的前景。此外，组织学分类G1～G2、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移子宫内膜腺癌患者组织中的cIAP阳性率低于组织学分类G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者，Caspase-7阳性率高于组织学分类G3、FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移患者，这表明cIAP、Caspase-7的表达和子宫内膜腺癌患者的病情严重程度密切相关，且随着cIAP表达的升高与Caspase-7的降低，患者的病情逐渐加重。究其原因，笔者认为可能在于：cIAP属于子宫内膜组织恶性进展的促进因素，而Caspase-7是子宫内膜组织恶性进展的抑癌因素[16]。其中，cIAP抑制Caspase-7的粗凋亡作用可能促进了子宫内膜腺上皮组织恶性增殖的发生、发展、侵袭、转移，并对患者的预后产生一定程度的影响[17-18]。
　　从子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase-7表达的相关性分析来看，子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase-7的表达呈负相关。其原因主要是Caspase-7是cIAP的直接作用蛋白，cIAP可直接抑制Caspase-7蛋白水解的过程，抑制肿瘤细胞凋亡[19-21]。因此，在子宫内膜腺癌组织中cIAP、Caspase-7的表达呈负相关。临床上可以通过对子宫内膜组织cIAP、Caspase-7检查为子宫内膜腺癌早期诊断、治疗和预后判断提供依据。
　　综上所述，子宫内膜腺癌组织中cIAP存在明显高表达，而Caspase-7存在明显低表达，且上述两项指标与子宫内膜腺癌患者的病情发展密切相关。临床工作中可通过联合检测两项指标表达，为临床早期诊断以及预后评估提供理论依据。
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　　（收稿日期：2018-12-29 本文编辑：王 蕾）
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