不同因素对金线莲组织培养的影响

来源:用户上传      作者:李华娟 陆素君

　　摘 要：研究基本培养基MS、1/2MS、改良MS与不同浓度水平的6BA、NAA、马铃薯等方面对金线莲芽的增殖、长势方面产生的影响。在生根方面则主要是研究基本培养1/4MS、1/10MS、1/4改良MS以及添加物马铃薯对金线莲组培生根的方面影响。结果表明，金线莲增殖的最佳培养基为改良MS+6BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+200 g/L马铃薯，最佳生根培养基组合为1/4改良MS+NAA0.5 mg/L+马铃薯200 g/L。
　　关键词：金线莲;增殖;生根
　　中图分类号：S567.23   文献标识码：A   文章编号：1004-3020（2020）01-0022-03
　　Abstract：Effects of combination of basal medium （MS，1/2MS and modified MS） and different concentration of 6-BA，NAA and potato on the bourgeoning and growth vigor of Anoectochilus roxburghii（Wall.） Lindl while impacts of combination of medium （1/4MS，1/10MS and 1/4modifiedMS） and adding potato on the rooting of this plant were studied.Results showed that medium of “modifiedMS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+potato200 g/L” was the best on bud proliferation while medium of “1/4modifiedMS+NAA0.5 mg/L+potato 200 g/L” was the most excellent on rooting.
　　Key words：Anoectochilus roxburghii;proliferation take root
　　金线莲Anoectochilus roxburghii是一种兰科多年生药用草本植物，多生长于海拔500～1 600 m的阴湿森林或竹林内[1]，素有“乌人参”美称，该植物有调节内分泌、强心利尿、降血压等功效，其提取物还有治疗乳腺癌的作用[2]，具有广阔的开发利用前景[3]，但由于其自然繁殖率极低，生长极为缓慢，加上近年来的大量采集，金线莲资源日趋枯竭[4]。而采用组织培养手段对金线莲进行短期快速繁殖，建立一套快繁体系，对该药材的深入研究具有重要意义。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　金线莲无菌初代瓶苗。
　　1.2 方法
　　1.2.1 芽的增殖
　　 以MS、1/2MS、改良MS为基本培养基（改良MS对大量元素进行修改即KNO3 2 140 mg/L，NH4NO3 1 000 mg/L，其它成份与MS同），附加不同浓度的6-BA，NAA、马铃薯，采用正交表（L934）对不同组合处理试验，3次重复，每处理接种10瓶，每瓶10个茎段，为避免因茎段部位不同而产生差异，本试验均采用中部茎段，每10天观察一次，50天后记录芽的增殖情况，长势等。试验安排见表1。
　　1.2.2 试管苗生根
　　 以1/4MS、1/10MS、1/4改良MS为基本培养基，附加浓度分别为0.5、1.0、1.5 mg/L的NAA，添加物为马铃薯，其浓度分别为0、100、200 g/L，碳粉0.5 g/L，三个重复，每处理接种10瓶，每瓶接种10株长约2.5 cm、有两个节点且生长健壮的芽条。每10 d观察一次，60 d后记录苗的出根情况、根条数、根长等。试验安排见表2。
　　1.3 其他培养条件
　　蔗糖30 g/L，琼脂粉5.5 g/L，pH值5.8，培养温度（25±1）℃，继代增殖阶段培养即800 Lx，生根阶段1 200～1 500 Lx。
　　2 结果与分析
　　2.1 培养基、激素水平及马铃薯的添加对金线莲继代增殖的影响   由表3、表4可知，不同处理间在芽的增殖系数、芽生长状况方面是有差异性的，而在芽的增殖方面增殖系数是评定增殖优劣的主要指标。在本次试验中对各因子之间进行k值比较分析中发现，在不同培养基中以改良MS、6-BA浓度为3.0 m/L、NAA0.5 mg/L和馬铃薯200 g/L的k值最大，是最佳理论组合。并且从芽的长势来看，基本培养基1/2MS芽在粗壮程度、高生长、整齐度上是最差的，MS次之，最佳的是经过改良的MS，芽粗壮、较其他两组都高且出芽整齐。进一步进行方差分析，由表4可知，四个因素中6-BA对增殖的影响达到极显著水平，说明金线莲对不同浓度的6-BA的诱导极其敏感，且6-BA浓度越高，越易在茎段节点处形成丛生芽点，而在6-BA浓度为0.5的基本无丛生芽点;而基本培养基对增殖系数的影响则达到显著水平，NAA、马铃薯则影响不显著，说明影响金线莲增殖主要因素在于6-BA的浓度，其次是基本培养基成分。从k值来看，金线莲的最佳增殖配方为改良MS+6BA3.0 m/L+NAA0.5 mg/L+马铃薯200 g/L。
　　2.2 基本培养基、不同激素水平、马铃薯的添加对金线莲生根产生的影响   由表5可知，不同处理对金线莲的生根率、根条数、根长方面影响是不同的，现在对生根的主要指标生根率的数据进行方差及极差分析，从k值大小来看，金线莲生根产生最大影响的是马铃薯，其次是基本培养基，而NAA对其生根产生的影响相对较小，并且培养基以1/4改良MS最好，NAA则以1.0 mg/L、马铃薯以200 g/L为最佳。进一步对其进行方差检验可以看出，马铃薯对其生根的影响是极显著的，培养基则对其生根的影响显著，NAA对生根的影响不显著。在添加了马铃薯的培养基中，均有良好的生根体现。在无马铃薯的培养基里，生根则受到显著影响，根短且生根不齐，有的只在切口处形成根点而无法形成有效根。从试管苗的长势来观察，则1/4改良MS则表现在苗木生长更加粗壮，根系更加发达，因此1/4改良MS+NAA1.0 mg/L+马铃薯200 g/L最佳的生根培养基组合。
　　3 结果讨论
　　 （1）在金线莲继代增殖中，最适宜的培养基为改良MS+6BA3.0 m/L+NAA0.5 mg/L+马铃薯200 g/L，其芽萌发快且粗壮、增殖倍数高，生长速度快，苗相整齐，可达到快速育苗要求。
　　 （2）在生根培养中，对基本培养基要求不高，三种培养基均可诱导出生根，其最佳的生根配方为1/4改良MS+NAA1.0 mg/L+马铃薯200 g/L能达到很好的生根效果。
　　 （3）在对金线莲的培养过程中，无论是在继代增殖方面，还是在生根方面，均表现出对马铃薯的依赖，如在增殖中，缺少马铃薯的则表现为植株矮小，株干细弱，在生根方面则更加明显，除了长势弱，根系短、苗木长势不齐，与添加了马铃薯在长势上是无法比拟的。
　　 参 考 文 献
　　[1]中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志（第七卷）[M].北京：科学出版社，2000：225-226.
　　[2]邱运亮，段鹏慧，赵华.植物组培快繁技术.北京[M]：化学工业出版社，2010：152.
　　[3]王小菁，陈刚，李明军，等.植物生长调节剂在植物组织培养中的应用[M].北京：化学工业出版社，2010：102-103.
　　[4]李介元.台湾金线莲[J].台湾农业探索.2001（2）：42.
　　（责任编辑：唐 岚）
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