补锌对酞酸酯致睾丸萎缩的影响作用研究
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【摘要】[目的]探讨补锌对邻苯二甲酸二（2-乙基）已酯（DEHP）致雄性大鼠睾丸萎缩的影响作用研究。[方法]选择2周龄KM雄性小鼠25只随机分组为5组：对照组（玉米油）、DEHP染毒组、低剂量锌组、中剂量锌组、高剂量锌组。DEHP和锌灌胃染毒，连续隔天灌胃30天，处死小鼠并迅速剥离睾丸组织，计算脏器系数，测定MDA.[结果]与玉米油对照组相比，DEHP雄鼠睾丸系数下降有统计学差异（P<0.05）;与DEHP组相比，玉米油、低剂量锌、高剂量锌组MDA下降有统计学差异（P<0.05）;与玉米油组相比，DEHP、中剂量锌和高剂量锌组MDA升高有统计学差异（P<0.05）。锌对睾丸组织脂质过氧化损伤有一定的保护作用。[结论]补锌对DEHP致睾丸萎缩有一定的保护作用。
【关键词】邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯锌生殖毒性
邻苯二甲酸二乙基己酯[di-（2-ethylhexyl）phtha]ate，DEHP]属于邻苯二甲酸酯类（PAEs）化合物，是使用最广和产量最大的塑化剂，以增加塑料的可塑性和韧性，提高塑料强度。广泛用于油漆、橡胶管、血袋、化妆品、包装食物的材料及小孩玩具等。DEHP与塑料之间是氢键或范德华力结合，易于扩散至周围环境中，造成空气、水源和食物等污染。DEHP可通过饮食、呼吸、皮肤接触等途径进入人体，长期接触可引起血液系统、生殖系统及肾脏、肺脏等器官损害。DEHP对雄性生殖系统的损害最为显著，其主要靶器官是睾丸，可影响性腺和生殖器官的发育，损害生殖功能。DEttP是一种典型的环境内分泌干扰物（environmental endocrine disruptors，EEDs），具有拟雌激素或抗雄激素作用。DEHP可引起男/雄性动物生殖内分泌激素紊乱、睾丸萎缩、生精障碍等，然而，对于补锌对DEHP致睾丸萎缩的影响作用研究较少，且结论尚不一致。因此，本研究采用DEHP染毒青春期雄性小鼠，观察小鼠睾丸组织MDA水平变化以及脏器系数，探讨补锌对DEHP致雄性小鼠睾丸萎缩的影响。
一、材料与方法
（1）主要试剂与仪器。DEHP（分析纯，无锡市亚泰联合化工有限公司，中国）纯度99.5%，溶剂为玉米油;硫酸锌（国药试剂集团），丙二醛（malondialdehyde，MDA）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所，中國），电子天平、可见分光光度计、高速离心机、恒温水浴锅、灌胃器、EP管等。
（2）实验动物。25只2周龄昆明小鼠，性别雄，体重25.5～35.5g。
（3）分组与处理。随机分为5组，每组5只，依次为A组（玉米油对照组，10ml/kg）、B组（DEHP高剂量组，1000mg/kg）、c组[补低锌组（1000mg/kgDEHP+15mg/kg锌）]、D组[补中锌组（1000mg/kgDEHP+30mg/kg锌）]、E组[补高锌组（1000mg/kgDEHP+60mg/kg锌）]。连续隔天染毒30d。于末次染毒次日，颈部脱臼处死小鼠。
（4）指标与方法。分离睾丸，除去其表面血渍并称重，计算脏器系数。脏器系数（%）=[器官湿重（g）/体重（g）]×100%。丙二醛含量通过硫代巴比妥酸法（TRA）测定;10%睾丸组织匀浆与试剂95℃水浴40min，3500r/min离心10min，取上清液532nm处测吸光度（A）值。
（5）统计分析。数据用x±s表示，采用SPSS20.0软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用最小显著差法，以P<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
（1）脏器系数的变化。
（2）MDA的变化。
与DEHP组比较*p<0.05：与玉米油相比#P<0.05，与DEHP组相比，低剂量、中剂量和高剂量锌组体重下降均有统计学差异（P<0.05），与玉米油组相比，高剂量锌组体重下降有统计学差异（P<0.05）;与DEHP组相比，玉米油睾丸脏器系数升高有统计学差异（P<0.05），与玉米油相比，DEHP和低中高剂量锌组下降均有统计学差异（P<0.05）。与DEHP组相比，玉米油、低剂量锌、高剂量锌组MI）A下降有统计学差异（P<0.05）;与玉米油组相比，DEHP、中剂量锌和高剂量锌组MDA升高有统计学差异（P<0.05）。
三、讨论
正常状态下脏器系数比值恒定，动物在某些因素暴露后因脏器受损可能发生变化，脏器系数增大见于脏器充血、水肿或增生肥大等，减小则是由于脏器萎缩和其他退行性改变。本研究结果表明，DEHP组睾丸系数较溶剂对照组有所降低，提示睾丸是DEHP作用的靶器官。活性氧（reactive oxygen species，ROS）在许多生理过程中发挥着重要作用，常作为第二信使调节细胞的氧化还原反应，ROS还可作用于多不饱和脂肪酸，引起脂质过氧化作用，产生过氧化自由基（如M1）A），MDA的高低可以反映机体的脂质过氧化程度和机体受自由基攻击的程度。本次研究表示：DEHP组的MDA较溶剂对照组有所升高，补低剂量锌和高剂量锌的MDA较DEHP组有所下降。锌是机体必需微量元素之一，与生殖系统发育和功能密切相关，本实验设计DEHP+硫酸锌组，对预防DEHP导致的睾丸毒性损伤作初步研究。实验研究发现：补低剂量锌能在一定程度上改善DEHP致睾丸萎缩的影响。
以上结果提示适量锌对DEHP所导致的睾丸生殖毒性作用有拮抗和逆转效应，相关机制有待进一步研究。
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