超声引导下细针穿刺活检联合BRAFV600E基因检测对甲状腺癌的诊断价值分析

来源:用户上传      作者:卢志荣

　　[摘要] 目的 分析甲状腺癌诊断中联合US-FNAB检查及BRAFV600E基因检测的诊断价值。 方法 以2018年1月～2019年8月就诊于我院的110例疑似甲状腺癌患者作为观察对象，以术后病理学结果作为诊断金标准，分析US-FNAB联合BRAFV600E基因检测在甲状腺癌诊断中的应用价值。 結果 US-FNAB检查、BRAFV600E基因检测及US-FNAB联合BRAFV600E基因检测均对甲状腺癌具有明确的诊断价值（P<0.05），但以US-FNAB检查联合BRAFV600E基因检测的诊断价值最高（P<0.05）。 结论 在甲状腺癌的诊断过程中，可将联合US-FNAB检查联合BRAFV600E基因检测作为诊断指标。
　　[关键词] 超声引导下细针穿刺活检;BRAFV600E基因检测;甲状腺癌;诊断价值
　　[中图分类号] R736.1          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2020）06-0135-04
　　[Abstract] Objective To investigate the diagnostic value of ultrasound-guided fine needle aspiration biopsy（US-FNAB） combined with the detection of BRAFV600E oncogene in thyroid cancer. Methods From January 2018 to August 2019， 110 patients with suspected thyroid cancer admitted in our hospital were selected as subjects. Post-operative pathological results were considered as the gold-standard diagnostic criteria. The application value of US-FNAB combined with the BRAFV600E oncogene test in diagnosing thyroid cancer was evaluated. Results US-FNAB， the detection of BRAFV600E oncogene and their combination presented significant diagnostic values in thyroid cancer（P<0.05）. However， US-FNAB combined with the detection of BRAFV600E oncogene showed the best performance in the diagnosis（P<0.05）. Conclusion US-FNAB combined with the BRAFV600E oncogene test can be included as a diagnostic indicator for thyroid cancer in clinical practices.
　　[Key words] Ultrasound-guided fine needle aspiration biopsy; BRAFV600E oncogene test; Thyroid cancer; Diagnostic value
　　甲状腺癌为临床较为常见的恶性肿瘤之一，本病具有较高的临床发病率，不仅可对患者的甲状腺功能造成严重的影响，同时也可对患者的生命安全造成一定的威胁[1-5]。甲状腺癌因其常无明显临床症状及体征（尤其是患病早期），仅可于颈部超声检查时被发现，故属隐匿性恶性肿瘤，虽然甲状腺影响报告及数据系统（TI-RADS）在一定程度上可用于本病的诊断，但在一定程度上会受病变较小因素的影响，TI-RADS的临床诊断价值常可受到一定的限制[6-7]。而本研究将US-FNAB检查及BRAFV600E基因检测应用于甲状腺癌的诊断中，以期可进一步提高甲状腺癌的诊断水平，现报道如下。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　以2018年1月～2019年8月就诊于我院符合本研究入选及排除标准的110例疑似甲状腺癌患者作为观察对象。所观察患者中，男32例，女78例，年龄23～68岁，平均（50.39±8.86）岁;甲状腺结节直径8～25 mm，平均（14.26±2.22）mm。
　　1.2 纳入标准
　　①甲状腺彩超提示结节ACR TI-RADS分类5类者[8]。②同意行超声引导下细针穿刺活检（US-FNAB）检查及BRAFV600E基因检测者。④同意接受甲状腺结节切除术治疗者。⑤年龄18～75岁。⑥具有完整的临床资料者。⑦同意参加本研究，签署知情同意书者。⑧本研究方案已经我院伦理委员会批准。
　　1.3 排除标准[9]
　　 ①病变数量超过1个者。②存在US-FNAB检查禁忌症者。③存在甲状腺结节切除手术禁忌症者。④合并糖尿病等其他内分泌系统疾病者。⑤存在心脑血管疾病者。⑥存在其他部位恶性肿瘤者。⑦已接受核素肿瘤者。
　　1.4 方法
　　US-FNAB检查方法：患者于平卧位下，以枕头垫高肩部及颈下，使头后仰、颈部过伸，以暴露颈部前区。随后以Philips EPIQ7彩超检查仪对甲状腺进行常规探查，对结节的大小、形态、纵横比及边界等情况进行观察，于体表对结节进行定位，同时对进针深度测量。随后，对颈前区进行常规消毒并应用利多卡因进行局部浸润麻醉，麻醉成功后，进行穿刺操作，术者一只手固定超声探头，一只手持23 G穿刺针进行甲状腺穿刺，穿刺进针角度需平行超声扫描平面，同时穿刺过程中穿刺针尖需时刻清晰显示，当针尖进入结节后停止进针，拔出一半穿刺针芯后提插针刺针5～10次，完成提插后拔出针刺针，完成组织提取。每个结节需进行2次结节穿刺，将所得组织进行快速涂片，待涂片半干时应用95%乙醇进行固定，进行HE染色。根据Bethesda标准将甲状腺结节组织标本结果进行判定，判定结果分为：标本无法诊断、良性病变、不明确的滤泡病变、滤泡性肿瘤或可疑滤泡性肿瘤、可疑恶性肿瘤及恶性肿瘤6类，以标本无法诊断、良性病变、不明确的滤泡病变、滤泡性肿瘤或可疑滤泡性肿瘤为US-FNAB检查结果阴性，可疑恶性肿瘤及恶性肿瘤为US-FNAB检查结果阳性。 　　BRAFV600E基因检测方法：将超声引导下细针穿刺所提取的组织标本，以10%福尔马林进行固定，于石蜡包埋后，且取5 μm厚度的切片3张，放置于1.5 mL的EP管中。随后以二甲苯进行脱蜡，以FFPE样本DNA分离试剂盒对标本内的DNA进行提取，并测定DNA浓度，以DNA的OD260/OD280介于1.8～2.1為合格DNA。提取DNA后，行PCR扩增，设计BRAFV600E正向引物为5'-TCATAATGCTTGCTCTGATAGGA-3'，反向引物为5'-GGCCAAAAATTTAATCAGTGGA-3'，扩增片段长度为224 bp。检测分为三个阶段，第一阶段：95℃下5 min，1个循环;第二阶段为95℃下25 s、64℃下20 s、72℃下20 s，15个循环;第三阶段为93℃下25 s、60℃下35 s、72℃下20 s，31个循环。于第三循环中60℃时收集FAM及HEM信号，进行实时PCR，以FAM信号Ct值<28时表示标本BRAFV600E基因突变，判定结果为阳性。
　　联合检查结果中以US-FNAB检查结果阳性或BRAFV600E基因检测阳性为诊断阳性。
　　1.5 观察指标
　　所有患者于US-FNAB检查及BRAFV600E基因检测后，行甲状腺结节切除术，术后对甲状腺结节标本进行病理学检查，以病理性检查结果作为确诊标准，将患者分为病理良性组及病理恶性组，对比两组US-FNAB检查及BRAFV600E基因检测结果的阳性率。同时以US-FNAB检查、BRAFV600E基因检测及US-FNAB联合BRAFV600E基因检测结果作为观察指标，以病理学检查结果作为确诊标准，分析三种检查方法对甲状腺癌的诊断灵敏度、准确性、特异性及诊断价值。以观察方法阳性且病理学阳性者/病理学阳性者×100%为诊断灵敏度，以（观察方法阳性且确诊阳性者+观察方法阴性且确诊阴性者）/所有患者×100%为诊断准确性，以观察方法阴性且病理学阴性者/病理学阴性者×100%为诊断特异性。
　　1.6 统计学方法
　　采用SPSS20.0统计学软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。同时以Kappa一致性检验对检查方法的诊断一致性进行分析，Kappa一致性检验中，以Kappa≥0.75，说明两种方法诊断结果一致性较好;0.4≤Kappa<0.75，说明两种方法诊断结果一致性一般;Kappa<0.4，说明两种方法诊断结果一致性较差。应用ROC分析对检查方法的诊断价值进行分析，以P<0.05为存在诊断价值，且曲线下面积越大为诊断价值越高。
　　2 结果
　　2.1 两组US-FNAB检查结果比较
　　病理恶性组US-FNAB检查恶性率明显高于病理良性组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
　　2.2 两组BRAFV600E基因检测结果比较
　　病理恶性组BRAFV600E基因突变率明显高于病理良性组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
　　2.3 US-FNAB检查对甲状腺癌的诊断情况分析
　　US-FNAB检查对甲状腺癌的诊断灵敏度为86.56%，准确性为81.93%，特异性为62.50%。Kappa一致性检验分析显示，两种检查诊断结果一致性一般（Kappa=0.611）。见表3。
　　2.4 BRAFV600E基因检测对甲状腺癌的诊断情况分析
　　BRAFV600E基因检测对甲状腺癌的诊断灵敏度为82.09%，准确性为79.52%，特异性为68.75%。Kappa一致性检验分析显示，两种检查诊断结果一致性一般（Kappa=0.487）。见表4。
　　2.5 联合检查对甲状腺癌的诊断情况分析
　　联合检查对甲状腺癌的诊断灵敏度为79.10%，准确性为79.51%，特异性为81.25%。Kappa一致性检验分析显示，两种检查诊断结果一致性一般（Kappa=0.487）。见表5。
　　2.6 三种检查诊断价值分析
　　经ROC分析显示，三种检查方法对于甲状腺癌均具有明确诊断价值（P<0.05），但以联合检查的诊断价值最高。见表6。
　　3 讨论
　　目前，随着健康普查意识的提高及超声水平的进步，甲状腺结节的检出率显著上升，但对于结节的良恶性诊断仍主要依赖于TI-RADS检查，但TI-RADS检查在应用中存在一定的局限性，导致甲状腺结节单纯应用TI-RADS检查会影响整体检查的有效性，降低诊断准确性，常无法准确评价甲状腺结节病变性质[10]。超声引导下细针活检是目前甲状腺结节诊断的重要方法，具有安全性高、价格低廉的特点。为提高甲状腺癌临床诊断准确性，尤其是小甲状腺癌结节诊断效果，本次研究以US-FNAB检查及BRAFV600E基因检测作为观察指标，分析US-FNAB检查联合BRAFV600E基因检测对甲状腺癌的诊断价值。
　　本研究首先根据患者术后的病理结果，将患者分为病理恶性及病理良性两组，对比两组间US-FNAB检查及BRAFV600E基因检测结果差异，结果显示，病理恶性组US-FNAB检查恶性率及BRAFV600E基因突变率均明显高于病理良性组。可见甲状腺癌患者其US-FNAB检查恶性率及BRAFV600E基因突变率明显升高，但却无法评价US-FNAB检查、BRAFV600E基因检测及US-FNAB检查联合BRAFV600E基因检测对甲状腺癌的诊断价值，故本研究进一步对US-FNAB检查、BRAFV600E基因检测及US-FNAB检查联合BRAFV600E基因检测对甲状腺结节的诊断价值进行分析。结果显示：虽然US-FNAB检查、BRAFV600E基因检测及US-FNAB检查联合BRAFV600E基因检测对甲状腺癌均有着较高的诊断灵敏度、准确性及特异性，且三种检查方法与术后病理的诊断情况均具有较好的相一致，但经ROC分析显示，三种检查方法中US-FNAB检查联合BRAFV600E基因检测的诊断价值最高。 　　US-FNAB为目前临床常用的术前诊断甲状腺结节良恶性的方法之一，其具有着操作简便、准确性高及安全性高的特点，因此美国甲状腺协会所发布的临床指南中已明确指出，US-FNAB是预测甲状腺结节术前恶性程度的最可靠方法，可有效的减少不必要的甲状腺手术[11-13]。但因部分甲状腺癌的病变直径较小，故目前临床对于US-FNAB在甲状腺癌术前诊断中的应用价值仍存在一定的争议。但通过本研究结果证实了其在甲状腺癌诊断中的应用价值。本研究所应用的US-FNAB方法，其结果的准确性需临床医生、超声医生及病理科医生共同协作。首先，在早期筛查及结节组织的采集中，临床医师及超声医生需严格按照诊疗操作流程进行，在穿刺过程中，不仅需要患者的体位可充分暴露颈部，以保证穿刺的准确性，同时也需要保证麻醉的有效性，以降低穿刺产生的刺激，此外，在穿刺过程中，需注意避开重要血管、甲状腺液化灶及钙化灶，确保穿刺针准确穿刺入结节组织。随后，在对活检组织进行病理学观察时，需病理医师严格按照操作流程进行涂片、固定及染色等操作，通过以上措施以保证检查结果的准确性。而本研究所应用的BRAFV600E基因检测方法，其中所选取的BRAF基因属RAF家族，位于染色体7q34上，为激活RAS/RAF/MEK/MAPK信号通路最为关键的因子，其参与了包括细胞生长、分化及凋亡在内的多种生物学事件，在人体的生长发育过重具有着重要的作用。近年来临床观察发现，BRAF基因的突变在包括甲状腺癌等多种恶性肿瘤均具有着重要的诊断价值[14-15]，而在甲状腺癌中，BRAF基因的突变则主要表现在核苷酸T1799A的蛋白产物V600E上，其可使缬氨酸被谷氨酸所替代，从而激活BRAF激酶达到刺激MAPF通络的作用，最终导致甲状腺细胞分裂增殖、恶性肿瘤的发生[16-17]。
　　通过本研究结果可见，在甲状腺癌的诊断中，US-FNAB检查联合BRAFV600E基因检测具有较为理想的应用价值，可应用于临床的诊断中。
　　[参考文献]
　　[1] 郑文龙，张爽，沈成凤，等. 天津市2010～2014年甲状腺癌流行特征及长期发病和死亡趋势分析[J]. 中国肿瘤，2018，27（9）：670-674.
　　[2] 满国栋，王军，刘勤江，等. 甘肃省2010～2014年甲状腺癌发病的流行病学特征分析[J]. 中国医学文摘（耳鼻咽喉科学），2016，31（6）：305-308.
　　[3] 蔡慧，呂超，丁一波，等. 2004-2011年上海市原卢湾区居民甲状腺癌的发病率及死亡率分析[J]. 中国临床医学，2017，24（5）：728-731.
　　[4] 冯美霞. 彩超诊断分化型甲状腺癌颈淋巴结转移的临床价值[J]. 当代医学，2019，25（23）：48-50.
　　[5] 陈娟，李元梅，成伯宁. 紫杉醇联合顺铂对甲状腺癌细胞SW579增殖、迁移的影响[J]. 中国现代医生，2019， 57（20）：43-47.
　　[6] 余秋. TI-RADS分级与甲状腺癌病灶内癌基因、侵袭分子表达的相关性[J]. 海南医学院学报，2018，24（15）：1447-1450.
　　[7] 任春燕，张俪凤，赵薇，等. TI-RADS分级联合弹性应变率比值对桥本病合并结节良恶性鉴别的价值[J]. 中国临床研究，2017，30（3）：345-347.
　　[8] 王潇婧，刘利平，孙永清，等. ACR TI-RADS分类与2015年ATA指南对甲状腺结节诊断价值的比较研究[J].中华临床医师杂志（电子版），2018，12（4）：223-226.
　　[9] 袁华芳，蒋天安，赵齐羽，等. 超声引导下细针穿刺细胞学检查对长径≤5 mm甲状腺微小癌的诊断价值[J].中国微创外科杂志，2016，16（2）：151-153，157.
　　[10] 何学森，钟晓，蔡华崧，等.基于ACR TI-RADS分类对甲状腺乳头状癌淋巴结转移风险模型的预测[J]. 中山大学学报（医学科学版），2018，39（6）：941-947.
　　[11] 宋琳琳，周贵明，朱莉，等. 甲状腺影像报告和数据系统联合甲状腺细胞病理学Bethesda报告系统对甲状腺结节的应用价值[J]. 中华医学超声杂志（电子版），2018，15（9）：713-718.
　　[12] 徐雯，李文波，朱庆莉，等. 美国甲状腺协会指南甲状腺结节超声分类系统的临床应用价值[J]. 中华医学超声杂志（电子版），2017，14（7）：526-531.
　　[13] 谭翠霞，喻国，崔亭. 超声引导下甲状腺细针穿刺传统涂片与液基细胞学对甲状腺结节性质诊断的对比研究[J]. 四川医学，2017，38（1）：75-79.
　　[14] 郝文波，王禹，韩振东. 食管癌组织、近癌组织和远癌组织中BRAF基因突变与BRAF蛋白质表达情况及其对早期诊断食管癌的价值[J]. 临床和实验医学杂志，2018，17（16）：1741-1744.
　　[15] 杭菁，袁涛，叶新华，等. 常规超声及实时剪切波弹性成像超声表现与甲状腺乳头状癌BRAF基因突变的关系探讨[J]. 临床超声医学杂志，2019，21（2）：111-114.
　　[16] 方卓宁，吕祥瑞. 细针穿刺细胞学检查联合BRAFV600E基因突变鉴别诊断甲状腺结节良恶性的应用价值分析[J]. 实用医技杂志，2019，26（7）：923-924.
　　[17] 王利娟. 甲状腺结节细针穿刺细胞学检查联合BRAFV600E基因突变检测穿刺标本临床价值[J]. 临床军医杂志，2018，46（2）：205-207.
　　（收稿日期：2019-11-15）
转载注明来源:https://www.xzbu.com/6/view-15190159.htm