血浆RUNX3基因启动子甲基化检测对宫颈癌早期诊断的价值研究

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　　[摘要]目的探究血浆人类Runt相关转录因子3（RUNX3）基因启动子甲基化对早期宫颈癌的诊断价值。方法选取80例宫颈癌患者作为A组，选取同期80例宫颈上皮内瘤变（CIN）患者作为B组，另选取80例正常宫颈组织切除者作为C组。对三组研究对象的宫颈癌组织、CIN组织、正常宫颈组织及血浆RUNX3启动子甲基化应用甲基化特异性聚合酶链反应（MCP）进行检测。比较三组组织、血浆RUNX3启动子甲基化异常率，分析宫颈癌病理特征与RUNX3启动子甲基化表达及RUNX3蛋白表达的关系。结果A组组织RUNX3启动子甲基化异常率为86.25%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为73.75%;B组组织RUNX3启动子甲基化异常率为33.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为26.25%;C组组织RUNX3启动子甲基化异常率为3.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为0;A组组织RUNX3启动子甲基化异常率和血浆RUNX3启动子甲基化异常率均高于B组和C组，差异有统计学意义（P<0.05）。血浆、组织RUNX3启动子甲基化异常与临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、淋巴转移存在相关性（P<0.05）。宫颈癌患者RUNX3蛋白异常表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期存在相关性（P<0.05）。结论血浆RUNX3基因启动子甲基化异常可提示宫颈癌的发生发展，为早期诊断宫颈癌提供新方法。
　　[关键词]宫颈癌;血浆人类Runt相关转录因子3;宫颈上皮内瘤变;甲基化特异性聚合酶链反应
　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.05.004
　　相关学者与专家认为人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是导致宫颈癌发生的主要病因，宫颈癌的发生、发展是多基因、多因素相互作用与影响形成的。血浆人类Runt相关转录因子3（runt-related transcription factor gene 3，RUNX3）基因是臨床新发现的抑癌基因，作为转化生长因子β（TGF-β）定位于染色体1p36.1，属于Runt基因家族成员之一，其信号作用的靶点可明显抑制多种癌细胞的生长。本研究对80例宫颈癌患者、80例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）患者及80例正常宫颈组织切除者相对应的组织、血浆采用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation specifie PRC，MCP）方法检验RUNX3启动子甲基化情况，探究其在宫颈癌早期诊断中的应用价值，报告如下。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料选取本科2014年3月～2018年12月收治的80例宫颈癌患者作为A组，另选取同期80例CIN患者作为B组，选取80例正常宫颈组织切除者作为C组。所有人选对象符合相关诊断标准。三组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。见表1。本研究经伦理委员会同意。
　　1.2纳入及排除标准纳人标准：①入选者均符合相关诊断标准;②年龄40～70岁;③所有研究对象均自愿参与，并签署知情书;④术前未接受免疫、化疗、辅助放疗治疗。排除不符合标准的研究对象。
　　1.3方法检测仪器：采用Zymo Taq PreMi（Zymo Research，美国）、EZDNA甲基化试剂盒，上海生物工程技术服务公司提供NIQ-10柱式动物基因组DNA抽提试剂盒与MSP引物。见表2。检验方法：提取RUNX3基因组DNA，分别对三组研究对象的血浆、宫颈组织、CIN病变组织、正常宫颈组织中按DNA抽取试剂盒，抽取基因组DNA，严格依照说明书进行操作;基因组DNA浓度以紫外分光光度仪测定，根据260nm，与280nm紫外线吸收值比值[D（260nm）/D（280nm）]估计，经浓度0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA浓度，凝胶成像系统成像，用GAPDH与RUNX3光密度比值衡量表达。采用二喹啉甲酸法（BCA）蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度[2，3]。
　　1.4观察指标.对A、B、C三组血清、相关组织中RUNX3基因启动子甲基化相关性进行评估并比较。
　　1.5统计学方法采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（x+s）表示，采用t检验;计数资料以率（%）表示，采用x”检验;相关性采用Spearman相关分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。
　　2结果
　　2.1三组血浆与组织RUNX3启动子甲基化异常情况比较A组组织RUNX3启动子甲基化异常率为86.25%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为73.75%;B组组织RUNX3启动子甲基化异常率为33.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为26.25%;C组组织RUNX3启动子甲基化异常率为3.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为0;A组组织RUNX3启动子甲基化异常率和血浆RUNX3启动子甲基化异常率均高于B组和C组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。
　　2.2宫颈癌病理特征与RUNX3启动子甲基化表达及RUNX3蛋白表达的关系分析血浆、组织RUNX3启动子甲基化异常与临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、淋巴转移存在相关性（P<0.05）。宫颈癌患者RUNX3蛋白异常表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期存在相关性（P<0.05）。见表4。
　　3讨论
　　宫颈癌是我国临床常见恶性肿瘤之一，是威胁女性生命健康的主要因素;其发病率较高。RUNX3是RUNx转录因子家族成员之一，是近年来新发现的抑癌基因，主要在细胞的分化、增值、凋亡过程中发挥重要作用[4-6]。一般而言，肿瘤疾病发生、发展中通常伴随RUNX3的表达下调或沉默，且表达水平与癌细胞转移、细胞分化程度、临床分期存在相关性[7-11]。 　　本次研究结果显示，A组组织RUNX3启动子甲基化异常率为86.25%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为73.75%;B组组织RUNX3启动子甲基化异常率为33.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为26.25%;C组组织RUNX3启动子甲基化异常率为3.75%，血浆RUNX3启动子甲基化异常率为0;A组组织RUNX3启动子甲基化异常率和血浆RUNX3启动子甲基化异常率均高于B组和C组，差异有统计学意义（P<0.05）。由此说明随着宫颈癌病情发展，宫颈组织RUNX3表达逐渐下降，而血浆、组织中RUNX3启动子甲基化异常升高。同时，进一步研究，对RUNX3蛋白异常表达、RUNX3启动子甲基化异常与宫颈病理特征进行单因素分析，研究结果显示，宫颈癌患者RUNX3蛋白异常表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期存在相关性（P<0.05）;提示肿瘤疾病恶性程度与RUNX3蛋白异常表达存在密切相关性。患者血浆、组织RUNX3启动子甲基化异常与临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、淋巴转移存在相关性（P<0.05）;说明在宮颈癌组织、血浆中RUNX3启动子甲基化异常与肿瘤发展趋势、恶性程度存在关联。
　　综上所述，早期宫颈癌可通过测定血浆RUNX3基因表达进行判定、鉴别，有望成为预测宫颈癌的重要生物学指标。
　　同时研究指出，RUNX3蛋白表达缺失主要因RUNX3启动子甲基化异常引起，且RUNX3甲基化异常在宫颈癌发展、发生中发生重要作用，有助于早期判断、鉴别宫颈癌。
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　　[收稿日期：2019-12-19]
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