儿童幽门螺杆菌四种毒力因子表达的相关性研究
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【摘要】 目的：研究幽门螺杆菌四种毒力因子尿素酶A（Ure A）、尿素酶B（Ure B）、细胞空泡毒素（Vac A）和细胞毒相关蛋白（Cag A）在儿童幽门螺杆菌中分布的相关性。方法：统计2017年6月-2018年6月笔者所在医院门诊及住院有上消化道症状的患儿共633例。其中男369例，女264例;年龄1～16岁。采用免疫印迹法检测儿童血清中的四种幽门螺杆菌毒力因子。相关性分析采用Spearman检验，r≥0.8时，视为有高度相关性。结果：Ure B与Ure A、Vac A和Cag A这三个毒力因子之间的表达有相关性（r<0.6），且Ure B与Ure A+/Vac A+/Cag A+（三因子共阳性）的相关性较低（r=0.527）。但是Ure A、Vac A和Cag A与另外三种毒力因子联合共阳性的相关性都很高（r>0.8）。结论：Ure A、Vac A和Cag A分别与其他另外三种毒力因子共阳性表达相关性较高，可反映四毒力因子的整體表达阳性情况。
【关键词】 儿童 幽门螺杆菌 毒力因子 相关性分析
doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.12.063 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2020）12-0-03
The Expression and Relevance of Helicobacter Pylori Four Virulence Factors in Children/CHU Mingliang， HU Jianjun， YANG Junmei. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（12）： -151
[Abstract] Objective： To evaluate the expression and relevance of Ure A， Ure B， Vac A and Cag A in Helicobacter pylori of children.Method： From June 2017 to June 2018， a total of 633 blood samples of outpatient and hospitalization children （369 male， 264 female， 1-16 years old） with upper gastrointestinal symptoms were included in the study. The expression and relevance of four virulence factors were analyzed by immunoblotting and Spearman test. r≥0.8 was considered to be highly correlated. Result： The correlation was low between Ure B with other three virulence factors Ure A， Vac A and Cag A （r<0.6）. And the correlation was very low between Ure B with Ure A+ /Vac A+ /Cag A+ （r=0.527）. But the correlation was high between Ure A， Vac A， Cag A with positive combination of any other three virulence factor （r>0.8）. Conclusion： The correlation is high between Ure A， Vac A， Cag A with positive combination of any other three virulence factor， and they can reflect the whole positive expression of four virulence factors.
[Key words] Children Helicobacter pylori Virulence factor Correlation analysis
First-author’s address： First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550001， China
幽门螺杆菌是全球范围内流行较为广泛的慢性致病菌之一，也是公认的上消化道疾病的主要致病菌[1-2]。儿童是幽门螺杆菌的易感人群，在发展中国家，几乎近半数儿童感染过此菌，且研究发现超过75%的成年感染患者是在其幼年时期被感染的[3-5]。幽门螺杆菌富含尿素酶，特别是尿素酶A（Ure A）和尿素酶B（Ure B），约含菌体蛋白的8%，活性极高[6]。尿素酶通过催化水解尿素形成“氨云”，在细菌周围形成“保护层”，利于幽门螺杆菌在高酸环境下生存[7]。此外，幽门螺杆菌通过产生空泡毒素A（Vac A）和细胞毒素相关蛋白A（Cag A）损伤胃黏膜上皮细胞，导致其变性、坏死，实现其致病性。迄今为止，关于毒力因子Ure A、Ure B、Vac A和Cag A在儿童幽门螺杆菌中的表达及其相关性研究尚未报道。本文通过比较四种毒力因子的检测结果并分析其相关性，揭示其可能的内在规律。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2017年6月-2018年6月郑州儿童医院门诊及住院有上消化道症状的患儿共633例。其中男369例，女264例;年龄1～16岁。 1.2 檢测方法
采用免疫印迹法检测儿童血清中的四种幽门螺杆菌毒力因子。取患儿静脉血1～2 ml，分离血清，严格按照免疫印迹法Hp抗体分型检测试剂说明书（深圳市伯特劳生物制品有限公司）进行操作。用聚丙烯酰胺凝胶电泳法将血清中的Ure A、Ure B、Cag A和Vac A按分子量大小依次分开，电转至印迹膜上，最后加入显色剂反应，通过阳性显色区带的分子量不同即可判断四种毒力因子的结果。
1.3 统计学处理
采用SPSS 13.0软件进行统计，相关性分析采用Spearman检验，r≥0.8时，视为有高度相关性。
2 结果
2.1 Ure A、Ure B、Vac A和Cag A四种毒力因子的表达阳性率
Ure A、Ure B、Vac A和Cag A四种毒力因子的表达阳性率分别是18.48%（117/633）、39.49%（250/633）、16.59%（105/633）和19.43%（123/633），四种毒力因子共阳性的表达率是15.64%（99/633），其中Ure B的阳性表达率最高。
2.2 毒力因子之间的表达相关性
Ure B与Ure A、Vac A和CagA这三个毒力因子之间的表达相关性r值均小于0.6（表1、表2、表3、表4），但是Ure A、Vac A和Cag A这三个毒力因子之间的表达相关性r值均大于0.8（表1、表2、表3、表4）。
2.3 Ure A、Ure B、Vac A和Cag A分别与另外三种毒力因子共阳性相关性比较
表5、表6、表7、表8结果表明，Ure A、Vac A和Cag A与另外三种毒力因子联合共阳性的相关性都很高，r值均大于0.8;而Ure B与Ure A+/Vac A+/Cag A+（三因子共阳性）的相关相关性r值较低，为0.527。
3 讨论
幽门螺杆菌和胃炎、胃腺癌等的发生有密切关系[8-12]，特别是在儿童慢性活动性胃炎中，其感染率高达90%以上，因此幽门螺杆菌是儿童慢性胃炎的一个重要影响因素[8-12]。临床检测患者胃内是否存在幽门螺杆菌，一般常采用血清免疫印迹法、胃黏膜活检和呼气采样三种检测方法[13-16]。由于胃镜及胃黏膜活检是一种侵入方式，有一定创伤性，患儿及其家属依从性较差，临床难以普及应用。而尿素呼气试验具有操作简单、无创、灵敏度高等优点而在临床广泛使用，但是呼气试验不能精确对幽门螺杆菌不同的毒力因子进行分型。血清免疫印迹法能一次性检测血清幽门螺杆菌毒力因子谱的全貌，且灵敏度高、特异强，适用于儿童幽门螺杆菌感染检测及其分型[17-20]。
笔者的试验结果发现Ure A、Ure B、Vac A和Cag A四种毒力因子在儿童上消化道症状患儿中的表达阳性率分别是18.48%、39.49%、16.59%和19.43%，其中Ure B的阳性表达率最高。这可能与Ure B亚单位具有强烈的抗原性，其免疫反应性最强，是Hp的优势免疫原有关[21]。Ure B虽然在儿童幽门螺杆菌中的表达阳性率较高，但其与另外三种毒力因子Ure A/Vac A
/Cag A的相关表达相关性不高，因此Ure B不能很好地反映整体四种毒力因子的阳性表达情况。而Ure A、Vac A和Cag A分别与其他另外三种毒力因子共阳性表达相关性较高，可反映四毒力因子的整体表达阳性情况。
总之，笔者发现了儿童幽门螺杆菌4种毒力因子的内在联系，这为未来更好的研究幽门螺杆菌毒力因子提供了部分基础。
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（收稿日期：2019-12-23） （本文编辑：何玉勤）
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