儿童七种呼吸道病毒检测结果分析

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　　[摘要] 目的 了解厦门地区儿童急性呼吸道感染病毒病原学特点及流行情况。方法 方便选取2018年2月—2019年1月在该院儿科及新生儿科住院患儿共3 837例，均行7项呼吸道病毒联合检测，对检测结果进行回顾性分析。结果 937例患儿检出至少一种病毒，呼吸道感染总阳性率24.6%（943/3 837），其中呼吸道合胞病毒（RSV） 568例（14.8%）、腺病毒（ADA）128例（3.3%）、流感病毒A（IFA） 107例（2.8%）、副流感Ⅲ（PIVⅢ）101例（2.6%），副流感Ⅰ（PIV） 24例（0.6%）、副流感Ⅱ（PIVⅡ） 7例（0.2%）、流感病毒B（ IFB） 14 例（0.4%）;RSV和 ADA混合感染3例， AD副流感3混合感染1例;副流感2和3混合感染1例，流感A和B混合感染1例。新生儿及婴幼儿占整体阳性感染人群比例为60.1%。病毒感染阳性检出率最高的在婴儿组，除新生儿组外，随年龄增大，病毒感染阳性检出率呈下降趋势，差异有统计学意义（χ2=38.530，P=0.000<0.05）。3岁以内的婴幼儿均是 RSV 的检出率最高，新生儿，婴儿，幼儿检出率分别是 21.6%，20.3%，11.9%。呼吸道合胞病毒（RSV）占总阳性病毒株的60.2%（568/943）。厦门地区呼吸道病毒感染有明显的季节性，不同月份阳性率不同，四季当中，春、冬季阳性率较高，夏、秋季陽性较低。结论 RSV病毒是厦门地区小儿急性呼吸道感染的主要病原，年龄越小发病率越高，呼吸道病毒感染呈季节性流行，冬春阳性率较高。
　　[关键词] 呼吸道病毒;儿童;直接免疫荧光法
　　[中图分类号] R725          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）02（b）-0177-04
　　Detection and Analysis of Seven Kinds of Respiratory Virus in Children
　　LIN Min-chuan， LI Xiu-juan， LI De-fa
　　Department of Medical Laboratory， Women and Children's Hospital Affiliated to Xiamen University（Xiamen Maternal and Child Health Hospital）， Xiamen， Fujian Province， 361003 China
　　[Abstract] Objective To understand the etiological characteristics and epidemic situation of acute respiratory tract infection virus in children in Xiamen. Methods From February 2018 to January 2019， 3 837 hospitalized children in pediatrics and neonatal department of the hospital were convenienty tested for seven respiratory viruses， and the results were analyzed retrospectively. Results At least one virus was detected in 937 children. The total positive rate of respiratory tract infection was 24.4% （943/3 837）. Among them， respiratory syncytial virus （RSV） was 568 cases （14.8%）， parainfluenza virus Ⅲ （PIVⅢ） 101 cases （2.6%）， adenovirus 128 cases （3.3%）， influenza virus A （IFA） 107 cases （2.8%）， parainfluenza virus 1 （PIV1） 24 cases（0.6%）， parainfluenza 2 （PIVⅡ） 7 cases （0.2%） and Influenza B （IFB） 14 cases（0.4%）， RSV and ADA mixed infection 3 cases， AD and parainfluenza 3 mixed infection 1 case， parainfluenza Ⅱ and Ⅲ mixed infection 1 case， influenza A and B mixed infection 1 case. Neonates and infants accounted for 60.1% of the total positive population. The highest positive rate of virus infection was found in the infant group. Except for the newborn group， with the increase of age， the positive rate of virus infection showed a downward trend. The difference was statistically significant （χ2=38.530， P=0.000 <0.05）. The detection rate of RSV was the highest in infants under 3 years old. The detection rates of RSV in newborns， infants and infants were 21.6%， 20.3% and 11.9% respectively. Respiratory syncytial virus （RSV） accounted for 60.2% of the total positive strains （568/943）. Respiratory viral infection has obvious seasonality in Xiamen. The positive rate varies in different months. In the four seasons， the positive rate is higher in spring and winter， and lower in summer and autumn. Conclusion RSV is the main pathogen of acute respiratory tract infection in children in Xiamen. The younger the age， the higher the incidence， the seasonal prevalence of respiratory tract virus infection， and the higher the positive rate in winter and spring. 　　[Key words] Respiratory virus; Children; Direct immunofluorescence assay
　　儿童最常见的呼吸道疾病是急性呼吸道感染（ARIS），其中80% 以上是由病毒感染引起的[1]。儿童病毒感染率高，传播速度快，并呈一定的地域分布和季节流行趋势，副流感病毒Ⅰ（PIVⅠ）、副流感病毒Ⅱ（PIVⅡ）、副流感病毒Ⅲ（PIV Ⅲ）、流感病毒A（IFA）、流感病毒B（IFB）、呼吸道合胞病毒（RSV）和腺病毒（ADV）等是目前认为引起小儿急性下呼吸道感染的主要病原体[2]。为了解厦门地区小儿下呼吸道感染病原情况，探讨不同年龄段，不同性别儿童急性呼吸道感染的病毒病原学构成及不同病毒感染的季节流行特征。该文对2018年2月—2019年1月在该院新生儿科及儿科住院的3 837例患儿鼻咽深部分泌物的7 种呼吸道病毒检测结果进行回顾性分析，现报道如下。
　　1  对象与方法
　　1.1  研究对象
　　方便选取在厦门大学附属妇女儿童医院儿科及新生儿科住院并行7项呼吸道病毒检测的患儿为研究对象，男 2 363例、女 1 474 例;年龄最小3 d，最大13.7岁，平均年龄1.94岁;其中新生儿（≤28 d）338例，婴儿（28 d，≤1 岁） 1 673例，幼儿（1岁，≤3 岁） 992例;学龄前儿童 （3岁，≤7 岁） 715例，学龄儿童（ 7 岁，≤14岁）119例。该研究中患儿家属知情同意，并经医院伦理委员会批准。
　　1.2  试剂与仪器
　　7项呼吸道病毒诊断试剂盒（D3 Ultra TM DFA，Diagnostic Hybrids）， 显微镜（LEICADM500荧光显微镜）。
　　1.3  标本采集与处理
　　患儿住院当天或次日晨无菌采集鼻咽深部分泌物，标本送至实验室，用旋涡振荡器将鼻咽分泌物打散混匀，再丢弃绒拭子，进行呼吸道病毒病原检测。2 000 r/min离心 10 min弃去上清，留约150 μL，吸管上下吹打混匀，形成混浊细胞悬浮液，在玻璃片上点样，每个点加25 μL细胞悬液，电吹风冷风10～15 min吹至干燥，浸没在丙酮溶液固定10 min，取出玻片，风干。在标本片和对照玻片的每个细胞点加上50 μL相应的荧光抗体（约25 μL），在37℃湿盒孵育约30 min，PBS冲洗3遍，除去多余的洗液，每个细胞点加上1滴封闭液。最后覆上盖玻片。
　　1.4  结果判定
　　在荧光显微镜下观察结果。在检测样本前先检查阳性和阴性对照。镜下显示苹果绿荧光的细胞，为阳性细胞，否则判为阴性。同时检出两种及以上病毒阳性者为混合感染。
　　1.5  统计方法
　　采用 SPSS 22.0 统计学软件处理数据。计数资料用例数及百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05 为差异有统计学意义。
　　2  结果
　　2.1  儿童病毒感染总体情况
　　3 837 例患儿中有943例呼吸道病毒阳性，阳性检出率为24.6%。2 363例男童中有608 例阳性，感染率25.7%，1474 例女童中有335 例阳性，感染率为22.7%。男孩感染阳性率高于女孩，差异有统计学意义（χ2=4.415，P=0.036 <0.05）。943例阳性患儿中2种及以上病毒混合感染6 例。感染率最高前3种病毒分别是呼吸道合胞病毒RSV， 腺病毒ADA和流感病毒A，阳性率分别为14.8%，3.3%，2.8%。见表1。
　　2.2  病毒检出率与年龄的关系
　　从呼吸道病毒感染住院患儿年龄及性别构成看，其中新生儿和婴幼儿占78.3%，男童占61.5%。新生儿及婴幼儿占整体阳性感染人群比例为60.1%。病毒感染阳性检出率最高的在婴儿组，除新生儿组外，随年龄增大，病毒感染阳性检出率呈下降趋势，差异有统计学意义（χ2=38.530，P=0.000 <0.05）。3岁以内的婴幼儿均是 RSV 的检出率最高，新生儿，婴儿，幼儿检出率分别是 21.6%，20.3%，11.9%。学龄前组AD的检出率最高，检出率为7.0%。学龄期患儿检出率最高的是IFA， 检出率为6.7%。PIVⅠ、PIVⅡ、流B在不同年龄组间阳性检出率均较低。见表 2。
　　2.3  感染病毒种类的季节和月份分布
　　呼吸道病毒感染有明显的季节性，不同月份阳性率明显不同，在冬季12月，1月及2月感染阳性率高，阳性检出率分别为33.2%，38.6%，31.4%。其中阳性率最高月份在1月。1月以后病毒阳性检出率呈现明显下降趋势，夏季6、7、8月阳性率较低，从9月份开始阳性率又开始上升，RSV在12个月份中检出率均是最高， PIV Ⅲ在5月6月检出率较高，流A感染阳性主要集中在冬季（12月，1月，2月，3月）。见表3。
　　3  讨论
　　病毒是引起呼吸道感染的重要病原体。呼吸道病毒的传播特点导致了在婴幼儿及学龄儿童中的感染率高，易造成大規模流行，因此儿童是各卫生机构的重点检测对象[3]。明确呼吸道病毒的主要病原学组成，掌握其与性别、年龄、流行季节等的关系，有助于尽早对儿童呼吸道感染采取积极有效地预防及治疗措施，从而间接降低临床抗生素的滥用。
　　该研究对3 837 例ARIS患儿的7项呼吸道病毒检测结果进行回顾性分析发现，943例呼吸道病毒检测结果呈阳性，阳性检出率为24.6%。结果高于武汉16.20%[4]，西安12.18%[5]。但低于广西 37.46%[6]，长沙 28.5%[7]，深圳34.17%[8]，不同地区病毒总检出率差异大，可能与地理环境、气候特征差异等因素相关，病毒的总检出率与月平均气温、风速可能相关[9];也可能与不同地区病毒检测方法（如分子生物学技术、免疫荧光技术等）不同，检验试剂盒不同等相关因素导致病毒检出率有差异。也可能是由于这7种常见呼吸道病毒中除了腺病毒外其余6种呼吸道病毒均为RNA病毒，RNA病毒的单链结构特征使其极易发生变异，形成新型病毒株;且不同的宿主情况、气候、温度等都有可能对病毒的生长和繁殖造成影响。 　　该研究发现引起小儿急性呼吸道感染的最主要的病毒是RSV（14.8%），其次为ADV （3.3%）和流感病毒A（2.8%）。大多数呼吸道病毒感染为单病毒感染，混合病毒感染非常少见。在该研究中发现6例混合感染患儿，占阳性发生率0.6%，两种病毒感染仅发生在小部分儿童身上，这与之前在澳大利亚进行的研究相似[10]。
　　从季节分布来看，呼吸道病毒流行常有一定的季节性。该次研究表明从12月至次年的4月呼吸道病毒的检出率最高，病毒感染主要在冬季，其次是春季，这与杜帅先[4]等报道不太一致，这可能与地域气候差别有一定的关系。有发现，低气温是导致RSV感染的主要因素，春、冬季节是流行高峰[11]，而且RSV感染后免疫力不强，可反复感染，这可能是造成在7种常见呼吸道病毒感染中RSV感染率最高的原因。
　　从性别分布来看，男、女患儿检出阳性率差异有统计学意义（P<0.05），厦门地区呼吸道病毒感染男孩感染阳性率高于女孩。从年龄分布来看，该研究显示病毒感染在3岁以内阳性率最高，将年龄段进一步细分为5组，新生儿组，婴儿组，幼儿组，学龄前及学龄期各组病毒阳性检出率分别为25.2%、28.8%、22.8%、18.6%、14.3%。新生儿组与婴儿组两组阳性率差异无统计学意义（P>0.05），但明显高于其他3组，差异有统计学意义（P<0.01）。表明1岁以内的新生儿及婴儿更易受病毒感染。也说明儿童呼吸道病毒感染与年龄有关，年龄越小，病毒感染的阳性率越高。研究还显示，从新生儿期到幼儿期，3个年龄组的各类病毒感染中均是RSV的检出率最高，分别是 21.6、20.3%、11.9%，而学龄前及学龄期检出率分别为4.8%、3.4%，表明3岁以内呼吸道感染的主要病原菌为RSV。国内也有相似文献报道[11]，RSV在3岁前检出率最高，婴儿和幼儿期感染率为8.17%、2.57%，3岁以上检出率降低，学龄前及学龄期儿童检出率分别为0.64%、0.00%。这可能一方面由于肺炎及支气管炎等呼吸道疾病与RSV相关，而另一方面又与婴幼儿体液免疫系统尚未完善，免疫功能低下易感等因素相关。
　　综上所述，厦门地区小儿急性呼吸道感染的主要病原菌为RSV，男孩感染阳性率高于女孩，3岁以下儿童是呼吸道病毒易感人群，且在≤1岁患儿中感染率最高，流感病毒A在3岁以上儿童感染率较高，且与RSV一样，主要高发于春、冬季节;其次为ADV及PIVⅢ，这2种病毒在全年均易感高发。随着年龄的增长，病毒的感染率逐渐下降。直接免疫荧光法检测7种呼吸道病毒能为临床提供病原学依据，指导临床结合幼儿年龄、季节、性别等流行病学资料来尽早、及时明确病原，减少疾病传播、防止抗菌药物滥用提供可靠依据。
　　[参考文献]
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　　[10]  Druce J， Tran T， Kelly H， et al. Laboratory diagnosis and surveillance of human respiratory viruses by PCR in Victoria， Australia， 2002-2003[J].J Med Virol，2005（75）：122-129.
　　[11]  李屾，刘明晶，王育龙.2672例呼吸道感染患儿血清 8 种非典型病原体 Ig M 抗体检测结果分析[J].山东医药，2018， 58（42）：49-51.
　　（收稿日期：2019-11-11）
　　[作者简介] 林闽川（1980-），男，福建漳州人，本科，主管技師，研究方向：免疫技术。
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