天津地区猪饲料中霉菌毒素污染调查

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　　摘    要：为了解天津及周边地区养猪场饲料中霉菌毒素含量及污染情况，笔者于2016年9月—2017年8月从天津市9个区县及周边的河北部分地区采集265份猪饲料及饲料原料，利用直接竞争酶联免疫吸附试验法分别对样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、呕吐毒素含量进行测定。结果显示：猪饲料及饲料原料中霉菌毒素检出率为23.77%～96.98%，且96.98%的猪饲料及饲料原料受到2种及以上霉菌毒素污染。4种霉菌毒素中，呕吐毒素污染最为严重，超标率为29.81%;其次为玉米赤霉烯酮，超标率为2.26%;黄曲霉毒素B1污染较轻，超标率仅1.13%;样品中未检出T-2毒素超标。
　　关键词：猪饲料;饲料原料;霉菌毒素;污染
　　中图分类号：S816          文献标识码：A          DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2019.05.007
　　Investigation of Mycotoxin Contamination in Pig Feed Ingredients in Tianjin
　　YIN Jiaojiao1，2， CHI Jingjing1，2， LI Fuqiang1，2， TAN Shixu1，2， REN Weike1.2， TIAN Xiangxue1，2， LU Chao1，2， YAN Minghua1，2
　　（1.Tianjin Animal Science and Veterinary Research Institute， Tianjin 300381， China; 2.Tianjin Livestock and Poultry Health Breeding Technology Engineering Center， Tianjin 300381，China）
　　Abstract：In order to understand the content and pollution of mycotoxin in feed of the pig farms in Tianjin and its surrounding areas，265 samples were collected in Tianjin and its surrounding areas from September 2016 to August 2017. The content of aflatoxin B1，zearalenone，T-2 toxin  and deoxynivalenol were determined by direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay （ ELISA ）. The results showed that the detection rate of mycotoxins in pig feed and feedstuff was 23.77%～96.98%， and 96.98% of feed and raw materials were contaminated by two or more mycotoxins. Among the four mycotoxins， the vomit toxin was the most polluted， the ratio above the standard rate was 29.81%; the zearalenone was the second， exceeding the standard rate was 2.26%; the aflatoxin B1 was light relatively in pollution and the overshooting was only 1.13%; and T-2 toxin was not detected in the samples.
　　Key words： pig feed; raw materials of feedstuff; mycotoxin; contamination
　　霉菌毒素可抑制蛋白质和DNA合成，诱导程序性细胞死亡，间接抑制免疫系统，造成猪对传染病的易感性增加，降低生产效率[1]。有些霉菌毒素还会在畜禽的肉、蛋、奶等产品中蓄积和残留，威胁人类食品安全[2]。在多种霉菌毒素中，黄曲霉毒素B1（AFB1）毒性最強，可造成人和动物急性和慢性中毒，引起生长迟缓、肝脏肿大、肝坏死、免疫机能下降等症状[3];且其具有蓄积性，长期摄入低剂量的黄曲霉毒素B1会引起动物的慢性中毒，导致动物出现生长缓慢、饲料利用率降低、生产性能下降[4]以及免疫力低下。玉米赤霉烯酮（ZEN）具有类似雌激素的作用，主要影响动物的繁殖性能[5-6]，使雌性小猪及母猪阴道红肿。妊娠期的动物食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流产、死胎和畸胎。Muthulakshmi等[7]研究发现，玉米赤霉烯酮除造成斑马鱼心脏受损、脊柱弯曲外，还会引起受精胚胎DNA损伤、凋亡和组织学变化。T-2 毒素可抑制蛋白质合成，并影响活细胞分化;中毒后表现为拒食、呕吐，主要表现为胃肠道、肝和肾的坏死性损害和出血，严重中毒时可见口腔黏膜坏死。呕吐毒素（DON）的毒性效应包括呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻和免疫抑制，猪是对呕吐毒素最敏感的动物，当饲料呕吐毒素含量≥1 mg·kg-1，猪只拒绝进食[8]。
　　由于饲料及原料霉菌毒素污染对畜禽养殖业及饲料工业的发展影响严重，随着我国现代养殖业快速发展，人们对饲料原料中霉菌毒素的污染日益重视。研究表明，我国饲料及原料霉菌毒素污染相当普遍，对畜牧业生产造成了不可忽视的影响，制约了养殖生产的效益[9]。本研究对天津及河北部分地区猪饲料及饲料原料中4种霉菌毒素的含量进行调查，以便了解该地区霉菌毒素污染情况，为养猪生产提供咨询和指导。 　　1 材料和方法
　　1.1 试验材料
　　试验所用猪饲料及饲料原料样品，于2016年9月—2017年8月采集于天津市（武清、宝坻、静海、宁河、蓟州、北辰、津南、西青和东丽）9个区县及周边河北部分地区，样品包括玉米、豆粕、麸皮和猪饲料（表1）。
　　1.2 仪器与试剂
　　酶标仪（美国BioTeK-ELx800）;洗板机（美国BioTeK-405LS）;离心机（美国Thermo-FRESCO17）;粉碎机（永康市老本行多功能粉碎机）。
　　霉菌毒素ELISA检测试剂盒：黄曲霉毒素B1检测试剂盒、玉米赤霉烯酮检测试剂盒、T-2毒素检测试剂盒和呕吐毒素检测试剂盒，均购自ROMER国际贸易（北京）有限公司。
　　盐酸、氢氧化钠、甲醇均为分析纯，购自天津风船化学公司。
　　1.3 试验方法
　　1.3.1 溶液配制 70%甲醇溶液：取2 100 mL纯水，加入甲醇4 900 mL混匀。
　　1.3.2 样品前处理 样品采集方法按GB/T 14699.1-2005《饲料采样方法》[10]进行，从可能受污染的区域多次、多点采集具有代表性的样品。每份样品不少于500 g，粉碎过0.90 mm筛网。混合后分装封样，一包作为检测样，一包留样，各占50%。样品在测定前密封保存于-20 ℃冰箱。
　　1.3.3 提取 黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素称取5 g（精确至0.01 g）粉碎的样品于50 mL离心管中，准确加入25 mL 70%甲醇溶液，振荡萃取3 min，静置样品，滤纸过滤上清液，收集滤液待测。
　　呕吐毒素称取5 g（精确至0.01 g）粉碎的样品于50 mL离心管中，准确加入25 mL蒸馏水，振荡萃取3 min，静置样品，滤纸过滤上清液，收集滤液待测。
　　1.3.4 霉菌毒素含量检测 按照ELISA检测试剂盒说明书进行。
　　1.3.5 判定标准 各种霉菌毒素限量值及参考标准见表2。
　　2 结果与分析
　　2.1 霉菌毒素在不同饲料中的检测结果
　　2.1.1 玉米 从表3可见，玉米中4种霉菌毒素均有检出。其中，呕吐毒素和玉米赤霉烯酮污染比较严重，检出率分别为91.07%和82.14%，超标率分别为30.36%和7.14%，呕吐毒素最高含量2 520.00 μg·kg-1，是污染最为严重的毒素。黄曲霉毒素B1检出率为19.64%，超标率为5.36%;T-2毒素检出率为48.21%，但均未超标。
　　2.1.2 豆粕 从表4可见，豆粕中黄曲霉毒素B1未检出，其他3种霉菌毒素均有不同程度污染。玉米赤霉烯酮和T-2毒素检出率很高，分别为100.00%和97.06%，但均未超标。呕吐毒素检出率为100.00%，超标率为47.06%，污染严重，详见表4。
　　2.1.3 麸皮 从表5可见，呕吐毒素污染严重，检出率94.59%，平均含量1 200.00 μg·kg-1，最高含量为3 160.00 μg·kg-1，超过国家规定的饲料卫生标准，超标率达45.95%。玉米赤霉烯酮、T-2毒素和黄曲霉毒素B1检出率依次为97.30%，94.59%和27.03%，但含量均未超标。
　　2.1.4 猪饲料 从表6可见，猪饲料中4种霉菌毒素均被检出，其中，玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、T-2毒素和黄曲霉毒素B1检出率分别为100.00%，99.28%，78.24%和30.43%;黄曲霉毒素B1和T-2毒素均未超标，而呕吐毒素和玉米赤霉烯酮超标率分别为21.01%和0.72%;呕吐毒素的超标率最高，含量的平均值为750  μg·kg-1，接近国家规定的饲料卫生标准最高限量，污染相对严重。
　　2.2 不同霉菌毒素污染情况
　　从检测结果看，不同种类样品中均出现高检出率，表明这4种霉菌毒素在当前猪饲料及饲料原料中的污染很普遍。在送检样品中，未检出毒素的样品1份（0.38%）;检测到1种、2种和3种及以上毒素的样品分别为7份（3.02%），43份（15.85%）和214份（80.75%）（图1）。
　　在送检的猪饲料和饲料原料样品中，呕吐毒素污染最严重，检出率为96.98%，超标率为29.81%;其次是玉米赤霉烯酮检出率为95.85%，超标率为2.26%;T-2毒素检出率为76.98%，超标率为0.00%; 黄曲霉毒素B1检出率为23.77%，超标率为1.13%（表7）。
　　2.3 不同季节霉菌毒素污染情况
　　從表8～表11可见，一年四季4种霉菌毒素均有污染，其中秋季污染最为严重。4种霉菌毒素中，黄曲霉毒素B1污染最轻，其中豆粕在四季中均未检出;玉米赤酶烯酮在秋季和冬季污染严重，夏季污染相对较轻，其中以猪饲料和玉米含量较高，检测平均值分别为111.96 μg·kg-1和116.59 μg·kg-1;T-2毒素在秋季污染严重，其后依次为夏季、冬季和秋季，以豆粕和麸皮含量较高，检测平均值分别为37.60 μg·kg-1和41.91 μg·kg-1;呕吐毒素在秋季污染最为突出，其中豆粕和麸皮最为严重，检测平均值分别为980 μg·kg-1和1 160 μg·kg-1。
　　3 讨 论
　　从检测结果来看，天津及周边地区猪饲料及饲料原料中霉菌毒素污染情况比较严重，超过99.00%以上的猪饲料及饲料原料受到霉菌毒素污染，这与朱风华等[11]、王国强和杜妮[12]、曹伟[13]的报道基本一致，说明我国不同地区猪饲料及饲料原料均存在霉菌毒素的污染。此外，调查结果显示，高达96.98%的猪饲料及饲料原料受到2种及以上霉菌毒素污染，表明本地区多种霉菌毒素在同一猪饲料或饲料原料样品中共存现象很普遍，这比高新等[14]研究报道无论在猪成品饲料中或玉米、麸皮、豆粕等常见典型饲料原料中，2种霉菌毒素的共存现象均超过50.00%的结果还要严重。 　　黄俊恒等[15]研究报道，2015年呕吐毒素超标情况相对严重，样品超标率为38.7%，检测平均值为1 896.8  μg·kg-1。敖志刚和陈代文[16]研究报道，2006—2007年我国饲料原料和全价饲料中超标率和检出水平最高的霉菌毒素是呕吐毒素、玉米赤霉烯酮和烟曲霉毒素，超标率分别为53.5%，46.9%和38.1%。匈牙利Tima等[17]报道的镰刀菌毒素和呕吐毒素在猪饲料中的含量最高，T-2毒素和玉米赤霉烯酮含量较低。本研究结果显示，呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1和T-2毒素的超标率分别为29.81%，2.26%，1.13%和0.00%，其趋势和以上报道基本相同。但超标率明显低于以上报道的数据，表明天津及周边地区的霉菌毒素污染程度相对较轻，同时，呕吐毒素仍是近几年该地区猪饲料及饲料原料中霉菌毒素超标的主要毒素。
　　对不同的霉菌毒素检测结果表明，4种毒素中呕吐毒素的超标率明显高于其他3种毒素，尤其是在豆粕和麸皮中，其中豆粕中超标率为47.06%，最高含量为1 250.00  μg·kg-1，麸皮中超标率为45.95%，最高含量为3 160.00  μg·kg-1。而以往备受关注的黄曲霉毒素B1的超标率则仅为1.13%。此结果与杜妮[18-19]、黄俊恒和黄广明[20]及谢文梅等[21]报道的检测结果均一致;表明近年来我国猪饲料及饲料原料中呕吐毒素的超标率呈上升趋势，而黄曲霉毒素B1的污染率呈下降趋势。
　　以上结果显示，天津及周边地区猪饲料及饲料原料中霉菌毒素污染情况仍然比较严重，且一年四季均有污染。呕吐毒素是当前饲料中污染最为严重的毒素，应加强监测和防控。饲料厂和养殖企业对霉菌毒素的污染应引起高度重视，加强对饲料及饲料原料的储存方式、温度和湿度等因素的管理和控制，以降低养殖风险。
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