农村猪场猪圆环病毒病的血清学调查
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通过分析云南省永胜县2016-2018年5个规模养猪场及部分农村散养农户猪圆环病毒血清流行病学调查数据，结果发现，抗体阳性率分别为19.84%、15.76%、25.54%，表明在当地规模养猪场和散养农户中猪圆环病毒感染已普遍存在。
猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型（PVC-2）引起的猪的一种多系统功能障碍性传染病（施德兰等，2009）。PVC-2主要侵害哺乳仔猪和育肥猪，除引起PMWS（仔猪多系统衰竭综合征）之外还与许多疾病的发生相关，主要有PDNS（猪皮炎与肾病综合征）、PRDC（猪呼吸道疾病综合征）、CT（仔猪先天性震颤）、PVC-2相关性繁殖障碍、PVC-2相关性肠炎等疾病（游一等，2009）。由于该病没有药物治疗，也没有可靠的商品疫苗进行免疫预防，目前该病已成为影响养猪生产的重要疾病。为查清永胜县猪圆环病毒病的感染情况，2016年-2018年，选择了县境内5个规模养猪场及部分农村散养户采集血清样品，进行了PCV-2血清流行病学调查，为全县制定综合防治措施提供依据。
一、材料与方法
1、主要试剂、仪器及血清样本：猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒均购自武汉科前动物生物制品有限公司。试剂盒内含有预包被板、血清稀释板、阴、阳性对照血清、酶结合物、洗涤液、样品稀释液、底物、终止液。多道和单道可调移液器、酶标仪等。
待检血清：无菌采集猪场及部分散养农户种猪（种公、母猪及后备种猪）、商品猪血清样本，分离血清，置于冰箱保存待检。
2、检测方法 ELISA检测方法
（1）样本稀释：在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清样本（195微升样品稀释液加5微升待检血清样本）。在血清稀释板中按1：4分别稀释阳性和阴性血清对照（180微升样品稀释液中加60微升对照血清）。
（2）加样反应：取抗原包被板，每孔加入稀释好的洗涤液200ul，静置3分钟倒掉液体，并在吸水纸上拍干，共计洗涤2次。再分别将稀释好的待检血清和对照各取100ul加入到抗原包被板孔中，待检样品做一孔。阴性和阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200ul，静置3秒钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。
（3）加酶反应：每孔加入酶结合物100ul，置37℃温育30分钟。洗涤5次。切记每次在干净吸水纸上拍干。
（4）显色反应：每孔先加入底物A一滴，再加底物B一滴混匀，室温避光显色10分钟。每孔加终止液一滴，10分钟内测定结果。
（5）结果判定：在酶标仪上测各孔OD值。试验成立的的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0.7，阴性对照孔平均OD630nm值必须≤0.3。样品OD630nm值>0.42，判为阳性;样品OD630nm值介于0.38到0.42之间，判为可疑;样品OD630nm值<0.38，判为阴性。
二、检测结果
2016年-2018年，应用ELISA方法共检测猪血清样品1570份，其中2016年检测495份，总阳性感染率21.21%;2017年检测536份，阳性感染率为16.6%;2018年检测539份，阳性总感染率为19.67%。（见检测结果表）
检测结果表：
三、讨论与分析：
1、从总阳性率来看，三年检测的结果2017年最低，总感染率为16.6%， 2016年最高总感染率达21.21%。与施德兰等（2009）应用ELISA方法对云南省玉溪市15个规模猪场猪圆环病毒2型（PVC-2）检测总阳性37.47%和与郎洪武等（2000）对全国七省市不同猪群的调查猪圆环病毒2型（PVC-2）总感染率42.9%相比，阳性检出率均较低。说明永胜县猪圆环病毒2型（PVC-2）感染率低于属于同省的玉溪市，比全国部分省市更低。
2、从不同年度来看，2016年总阳性率为21.21%，2017年为16.60%，2018年为19.67%。2018年的總阳性率比2016年下降1.54个百分点，但2018年比2017年上升3.07个百分点，说明永胜县猪圆环病毒2型（PVC-2）感染呈波动势逐年上升的趋势。
3、从规模场与农村散养户感染情况来看：2016年规模场阳性总感染率为30.76%，农村散养户感染率为14.29%;2017年规模场阳性总感染率为21.48%，农村散养户感染率为12.6%。2018年规模场阳性总感染率为23.34%，农村散养户感染率为15.48%。从三年检测的结果看，规模养殖场总阳性感染率均高于农村散养户，这可能与生猪养殖密度有关。
4、虽然猪群感染单一的（PVC-2）不能引起猪的发病和死亡，但其能够破坏猪的免疫系统，从而继发感染细菌、病毒和寄生虫，并影响其它疫苗免疫应答（刘健等），导致高致病性猪蓝耳病、猪瘟、猪口蹄疫等重大疫病发生的风险加大。同时由于（PVC-2）与其他致病因子的协同作用，加重了其它传染病临床表现和病理过程（杨汉春），导致出现较高的死亡率。永胜县某养猪场2011年曾发生了一起由猪圆环病毒2型（PVC-2）与猪传染性胸膜肺炎混合感染引起猪高死亡率的疫情，对养猪业造成重大经济损失。
5、永胜县猪圆环病毒病血清学检测结果呈现逐年上升趋势，应引起高度重视。建议：一是加强引种检疫，杜绝外来疫源侵入。在今后的工作中要加大《种畜禽管理条例》的宣传和执行力度，规范引种行为，杜绝外来疫源的引入。二是改变传统的养殖方式，推行早期隔离断奶、多场式生产技术和全进全出管理方式，从养殖方式的转变上提高防病能力。三是严格按生猪计划免疫程序，提高其它疫病的免疫保护率，减少混合或继发感染。重点加强猪瘟、高致病性猪蓝耳病的免疫，同时加强猪伪狂犬病、猪细小病毒病的免疫工作，提高猪抵抗力，减少与猪圆环病毒病的协同作用，从而降低生猪疫病的发生。四是加强饲养管理，提高生猪抵抗力。改善环境卫生，冬季注意猪舍通风，降低氨气等不良气体的浓度，减少环境应激因素。加强消毒工作，实施严格的生物安全措施，避免鼠、飞鸟及其他易感动物接近猪场。五是加强血清学和种公猪精液监测，发现阳性种猪应及时检查、隔离、淘汰、清除带毒猪并净化猪场尽可能控制此病的横向传播。
（作者单位：674200云南省丽江市永胜县动物疫病预防控制中心）
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