活血通络汤治疗骨性关节炎的的主要药效学研究
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【中图分类号】R965.3【文献标识码】A【文章编号】1005-2720-(2010)04-0071-02【摘要】目的:研究活血通络汤协定方的主要药效学机制。方法:用静脉注射葡聚糖致小鼠微循环障碍模型,研究其活血作用;用热板法致小鼠疼痛模型,研究其镇痛作用;用角叉菜胶致大鼠足肿胀模型,研究其抗炎作用;用组胺致大鼠毛细血管通透性增高模型,研究其化瘀作用。结果:活血通络汤可显著改善小鼠微循环障碍,明显提高小鼠的痛阈值,对大鼠足肿胀有显著抗炎作用,对毛细血管通透性有抑制作用。结论:活血通络汤有活血化瘀、镇痛、抗炎作用。
【关键词】活血通络汤;药效学;活血化瘀;抗炎;镇痛活血通络汤是我院经验协定处方,由红花、防风、乳香、没药、独活等中药组成,功能活血通络,主治气滞血瘀证,适用于瘀血肿痛、跌打损伤、关节疼痛。参照《中药新药研究的技术要求》,笔者采用动物模型对活血通络汤的活血化瘀、镇痛、抗炎、改善血管通透性作用进行了药效学研究。
1材料
1.1 实验药物
活血通络汤协定方自制;麝香祛痛搽剂(祛痛搽剂)由湖北省襄樊隆中药业有限责任公司生产;角叉菜胶等试剂均为分析纯,由上海试剂一厂生产。
1.2 实验动物
Wistar大鼠,体重200g±20g;昆明种小鼠,体重20±2g。以上动物由山东鲁抗医药股份有限公司动物中心提供,清洁级动物,普通饲料喂养,动物室温度25℃±2℃,许可证号SCXK(鲁)20050017。
1.3 主要仪器
热板测痛仪,型号GJ-8402 ,由浙江宁海白石电子医药仪器厂生产;光学显微镜,型号XSZ-H,重庆光学仪器厂生产;紫外-可见分光光度计,型号TU-1810,由北京普析通用试验仪器公司出品。恒温三用水浴箱,型号HH•W21•600B,北京长风仪器仪表公司生产。
2方法及结果
2.1 活血化瘀试验 :对小鼠耳廓微循环的影响[1], 取昆明种小鼠,雌雄各半,随机分为5组(n=10),活血通络汤高、中、低剂量组(每日0.36、0.18、0.09g生药/cm2)、阴性对照组(等容积生理盐水)、麝香祛痛搽剂组(0.36ml/cm2)。给药前1日,将受试小鼠的背部被毛去除(面积约1cm2)。局部给药,取适量受试品或对照品,用橡皮膏固定在背部,每日1次,连续给药3日。试验当日,给药30分钟后,用1%戊巴比妥钠溶液0.05ml/10g腹腔麻醉。除去耳廓背侧的细毛,并将小鼠腹部向下固定在显微镜载物台上,使鼠耳固定,调节显微镜(放大倍数为10×10),直至可以清楚地观察小鼠耳廓微循环情况。固定视野,调节测微尺位置,使其可以测量血管直径的变化。给药后35分钟时,观察小鼠耳廓选定部位微小动、静脉管径,此测定值为造模前基础值(A、V),选择血液流态相似微小静脉,用于观察造模后血液流态的改变。给药后40分钟时,除阴性对照组动物外,均按0.3ml/20g的剂量从尾静脉注射葡聚糖溶液(25mg/ml),阴性对照组给予同体积生理盐水。分别在造模后10、20、30分钟时,观察小鼠耳部选定的同一位置,记录微动、静脉管径及血液流态的变化。以各组动物造模前与造模后的微动、静脉管径的差值(△A、△V)为观察指标,同时对微静脉血液的流态进行评分,并作为比较指标。活血通络汤对静脉注射葡聚糖溶液引起小鼠微循环障碍有显著改善作用,证明活血通络汤具有明显活血化瘀作用。
2.2 镇痛试验:对热板法致小鼠疼痛的影响[2]: 因雄性小鼠受热阴囊触及热板,可出现假性结果,所以本试验采用雌性昆明种小鼠。试验前一日先筛选合格小鼠,取雌性昆明种小鼠,每次1只放在加热至恒温的热板(55±0.5℃)上,小鼠自放在热板上,至出现因热刺激而舔后足所需的时间(s),作为该鼠的痛阈值,出现舔足反应后将小鼠取下。凡舔后足时间小于5秒或大于30秒或跳跃者弃之不用。间隔1小时,重复测定其正常痛阈值,取两次正常痛阈平均值,作为该鼠的给药前基础痛阈值,以平均值不超过30秒为合格。将合格小鼠随机分为5组(n=10),活血通络汤高、中、低剂量组(每日0.36、0.18、0.09g生药/cm2)、阴性对照组(等容积生理盐水)、麝香祛痛搽剂组(0.36ml/cm2)。给药前1日,将受试小鼠的背部被毛去除面积约1cm2。局部给药,每日1次,连续给药3日,取适量的受试品或对照品,用橡皮膏固定在背部。试验当日,将适量供试品及对照品涂抹于橡皮膏上,固定在小鼠的背部,以不影响其舔后足为度。在给药后不同的时间点,将小鼠放在加热至恒温的热板(55±0.5℃)上,观察其因热刺激而出现的舔足反应时间(s),小鼠出现舔足反应后,迅速将小鼠取下,以免烫伤。痛阈值测定时间点分别为给药后0.5、1、2、3、4小时。本试验观察受试物的镇痛作用及时效关系。以受试动物出现因热刺激而舔后足反应的时间(痛阈值)为观察指标,按下式计算各剂量组动物镇痛率(即痛阈提高率):镇痛率=(给药组痛阈值-阴性对照组痛阈值)/阴性对照组运动痛阈值×100%。,活血通络汤可明显提高动物因热刺激致痛的痛阈值,证明活血通络汤具有明显镇痛作用。
2.3 抗炎试验:对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响[3]:因目前不能确证性别对炎症模型的影响,且雌激素有抗炎和免疫抑制作用,故选择雄性Wistar大鼠作为本试验的受试动物,随机分成5组(n=10),活血通络汤高、中、低剂量组(每日0.36、0.18、0.09g生药/cm2)、阴性对照组(等容积生理盐水)、麝香祛痛搽剂组(0.36ml/cm2)。给药前1日,将受试大鼠的背部被毛去除(面积约2cm2)。局部给药,每日1次,连续给药3日,取适量的受试品或对照品,用橡皮膏固定在背部。试验当日,将试验用大鼠右后腿内侧的被毛去除(面积约1cm2),分别测量每只大鼠右后肢正常踝关节周长,作为造模前的基础值(cm)。测量正常周长后,在右后肢的内侧皮肤,分别给予各组动物适量受试品和对照品,用橡皮膏固定。给药30分钟后,分别在大鼠右后肢足跖皮下注射1%角叉菜混悬液0.1ml/只致炎。在致炎后1、2、4、6小时,各测量一次右侧踝关节的周长(cm)。以各组动物致炎后与致炎前的踝关节周长之差(肿胀度, cm)为观察指标,按下式计算肿胀抑制率:肿胀抑制率=(阴性对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/阴性对照组平均肿胀度×100%。活血通络汤对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀有显著抑制作用,证明活血通络汤具有明显的抗炎作用。
2.4 改善血管通透性试验:对大鼠皮肤毛细血管通透性的影响[4]:取Wistar大鼠,雌雄各半,随机分为5组(n=10),活血通络汤高、中、低剂量组(每日0.36、0.18、0.09g生药/cm2)、阴性对照组(等容积生理盐水)、麝香祛痛搽剂组(0.36ml/cm2)。给药前1日,将受试大鼠的背部被毛去除(面积约2cm2)。局部给药,每日1次,连续给药3日,取适量的受试品或对照品涂抹于橡皮膏上,固定在背部。试验当日给药1小时后,于每鼠事先已去毛的背部皮下注射组胺1mg/kg(以pH7.4磷酸盐缓冲液稀释成1mg/ml),立即每鼠尾静脉注射0.5%伊文斯蓝生理盐水溶液10ml/kg,20分钟后断头处死动物,取下注射组胺局部蓝斑皮肤,然后剪碎,浸泡于丙酮-生理盐水(7∶3)溶液6ml中,72小时后过滤,取滤液在620nm波长处测定吸收度。与阴性对照组比较,活血通络汤能显著抑制组胺所致大鼠毛细血管通透性增高(P<0.01),具有降低毛细血管通透性、抗渗出的作用,证明活血通络汤具有明显的化瘀作用。
3讨论
本试验研究采用活血化瘀试验、镇痛试验、抗炎试验和改善血管通透性试验,对活血通络汤的主要药理作用进行了观察研究。结果表明,活血通络汤对静脉注射葡聚糖溶液引起的小鼠微循环障碍有显著的改善作用,可明显提高动物因热刺激致痛的痛阈值,对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀有显著抑制作用,对组胺致大鼠皮肤毛细血管通透性有明显改善作用。研究结果证明,活血通络汤具有明显的活血化瘀、镇痛、抗炎作用。
参考文献
[1]陈奇.中药药理实验研究方法学.北京:人民卫生出版社,1993.500～504
[2]徐淑云,等.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,2003.886～887
[3]徐淑云,等.药理实验方法学.北京:人民卫生出版社,2003.911～913
[4]陈奇.中药药理实验研究方法学.北京:人民卫生出版社,1993.362～363
作者单位:272100山东省兖州市人民医院1
272100山东省济宁市荣复军人医院 山东兖州2
272100济宁市皮肤病防治院 山东兖州3
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