化学发光诊断技术在临床糖尿病诊断中的应用
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【中图分类号】R587.1【文献标识码】B【文章编号】1005-2720-(2010)04-0102-02【摘要】本研究采用微粒子化学发光诊断技术(CLIA)定量检测胰岛素含量水平,发现TIDM患者服糖后不同时间内Ins水平变化不明显,Ins曲线低平:T2DM患者服糖后胰岛素水平随时相升高,峰值延迟,CLIA法检测Ins值与临床符合率高。我们认为,CLIA法优于RIA法,可广泛应用于临床胰岛素功能的检测,定量检测胰岛素水平。
【关键词】化学发光免疫法;胰岛素;糖尿病糖尿病是一组由遗传和环境因素相互作用引起的临床综合症,因胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶细胞对胰岛素敏感性降低,引起糖、蛋白、脂肪、水、和电解质等一系列代谢紊乱,而高胰岛素血证和胰岛素抵抗可能是糖尿病,高血压、冠心病、肥胖、高脂血证等多种疾病的共同发病机制[1]。根据患者胰岛素释放试验的结果判定胰岛B细胞的功能,进而将糖尿病分型及选择恰当的治疗方法,以及快速、准确地定量检测胰岛素(Ins)水平是十分重要的。近年来开展的化学发光免疫法(CLIA)具有快速、精确、试剂无毒等特点,因而临床应用前景可观[2]。本文采用微粒子化学发光技术定量检测胰岛素水平,为糖尿病的临床检验诊断提供新思路。
1材料与方法
1.1对象
A组:为健康对照组选自我院体检人群25例,男性15例,女性10例,年龄22～75,平均年龄37.5岁,无糖尿病家族史,无急、慢性疾病,空腹血糖、胰岛素均在正常范围内。B组:为临床诊断1型糖尿病(TIDM)患者22例,男性14例,女性8例,年龄8～41岁,平均年龄24岁,C组:为临床诊断Ⅱ型糖尿病(T2DM)患者肥胖型35例,男性16例,女性19例,年龄33～70岁,平均年龄54岁。D组:为临床诊断2型糖尿病(T2DM)患者非肥胖型18例,男性11例,女性7例,年龄35～69岁,平均年龄57岁。
1.2方法
1.2.1健康对照与患者组口服75g葡萄糖粉行OGTT试验,分别于糖负荷前和后30、60、120、180分钟采集静脉血3ml,分离血清。
1.2.2血糖测定:使用日本日立公司生产的日立7170型全自动生化分析仪 ,试剂为上海复星长征医学科学有限公司生产的血糖试剂,采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。
1.2.3Ins测定:采用CLIA法测定Ins,使用美国Beckman公司生产的Access微粒子化学发光分析仪及配套试剂。
1.2.4CLIA法的测定原理:测定Ins需血清20ul,加入相应试剂与磁性微粒子结合,再加入碱性磷酸酶(ALP)标记的相应的单克隆抗体,经37℃孵育促进抗原抗体结合,用缓冲液清洗三次,磁性分离去掉未结合物质 ,加入发光底物PPD,在ALP的作用下,脱去磷酸发射光子,测定其光量子值绘制标准曲线,并将标本的光量子值与标准曲线对比,计算出Ins浓度。
1.3统计学处理
本文采用χ±SD表示各组人群的结果,组间比较用t检验。
2 结果
2.1结果显示正常人空腹Ins为10.5±2.1Uiu/ml,服糖后迅速升高并在30～60分钟间达到峰值,峰值过后Ins水平逐渐下降,至餐后120分钟接近基础水平。TIDM患者空腹Ins水平低于正常,葡萄糖刺激葡萄后Ins曲线低平,显示胰岛素缺乏。肥胖型T2DM患者空腹Ins水平明显增高,对葡萄糖刺激的反映良好,峰值于正常人比较延迟,但峰值水平基本于正常人组相似。非肥胖型T2DM患者空腹Ins水平正常或轻微降低,对葡萄糖刺激的反应不良,且无峰值出现,见表1-3。
2.2CLIA法是采用微粒子化学发光技术,直接检测发光底物的光量子值,可排除乳糜血、溶血标本对结果的影响。
3讨论
CLIA是近年来国内、外流行的非放射性免疫检测方法。CLIA具有高灵敏度、高精密度、高特异性、低交叉污染率以及试剂有效期长等特点[3]。RIA法优点是敏感可靠,缺点为试剂受同位素半衰期的限制,效期短有放射性污染,在试剂的管理上存在诸多麻烦。CLID法依据经典的免疫学原理,用碱性磷酸酶标记相应单克隆抗体,以PPD为发光底物,大大提高了检测灵敏度与特异性,避免了RIA法对人体的伤害及对环境的污染。且Access微粒子化学发光分析仪全程自动控制,操作简便,检测速度快,系统误差小,试剂盒有独特的多层覆盖膜可保证试剂质量,仪器上的试剂冷藏系统保证了检测过程中的试剂稳定性。
由于高胰岛素血症和胰岛素抵抗可能是糖尿病、高血压、冠心病、肥胖、高脂血症等多种疾病的共同发病机制,而在此类患者中又常常出现脂代谢异常,临床标本中多出现乳糜血,CLIA法恰恰可排除乳糜血、溶血等标本对检测结果的影响。Ins浓度测定对糖尿病的临床诊断、分析、治疗、随访等均具有一定的意义,正常人服糖后30分钟左右达到峰值,峰值后逐渐下降,餐后180分钟接近基础水平,TIDM患者服糖后Ins水平变化不明显,Ins曲线低平,显示胰岛素缺乏。T2DM患者服糖后Ins水平随时相升高,峰值延迟,但峰值水平基本与正常人组相似,严重的T2DM患者同时合并胰岛功能缺陷。本文结果采用CLIA法检测Ins值与临床符合率高,其变化与临床一致,因此CLIA法优于RIA法可广泛应用于临床胰岛功能的检测,定量检测Ins水平。
参考文献
[1]陈灏珠主编.内科学.第4版.北京:人民卫生出版社,1996
[2]陶义训主编.免疫学和免疫学检验.第2版.北京:人民卫生出版社,1997.174
[3]张丽民.化学发光标记及发光免疫分析.基础医学与临床,1995:15(40):247
作者单位: 122300辽宁省喀左县第一医院检验科
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