中青年复发性脑梗死与高尿酸血症及亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性相关性研究

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　　【摘 要】 目的：探讨高尿酸血症及亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T位点多态性与中青年复发性脑梗死的关系。方法：2014年1月至2016年10月，选择在齐医三附院神经内科治疗的140例中青年复发性脑梗死患者作为复发组，同时选择同期首次发病的140例中青年脑梗死患者为首发组，采用聚合酶链反应-限制片段长度多态性法检测分析MTHFR基因C677T位点多态性;采用高效液相色谱法测定血浆尿酸（UA）、同型半胱氨酸（Hcy）水平，采用全自动电化学发光免疫分析儀检测血浆维生素B12、叶酸水平。结果：两组患者血尿酸水平比较，差异无统计学意义（P>0.05），但复发组血尿酸水平高于首发组，在MTHFR基因C677T位点的基因型分布比较中差异具有统计学意义（P<0.05）;与首发组比较，复发组患者T等位基因频率升高（P<0.05）。复发组TT、CC基因型患者血浆Hcy水平明显升高（P<0.05）;在两组患者中血浆Hcy水平差异无统计学意义（P>0.05），同时两组CT、CC基因型患者中维生素B12、叶酸比较差异无统计学意义（P>0.05）;TT基因型的两组患者维生素B12水平无统计学意义（P>0.05）;TT基因型复发组患者血浆叶酸水平降低（P<0.05）。结论：MTHFR基因TT基因型是中青年复发性脑梗死的重要因素，TT基因型中青年复发性脑梗死患者存在高Hcy及低叶酸。高尿酸血症与复发脑梗死发病有内在联系，是重要的危险因素。
　　【关键词】 复发性脑梗死;亚甲基四氢叶酸还原酶;基因;高尿酸血症
　　在临床心脑血管疾病中，脑梗死为最常见的类型，3年复发率可以高达16.0%。因此复发性脑梗死具有疾病发生率高，以及复发率高等特点。通过查阅文献发现，针对复发性脑梗死的临床危险因素研究已经日益成为热点，高尿酸血症逐渐出现在人们的视野中。而且有不少学者将分子生物技术以及人类基因组同时引入本研究领域。本研究针对本院收治的中青年复发性脑梗死患者分析血尿酸、亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）、基因C677T位点检测，掌握高尿酸血症以及MTHFR基因多态性与中青年脑梗死患者的发病关系。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　回顾性研究分析2014年1月至2016年10月，在齐齐哈尔医学院神经内科收治的中青年复发性脑梗死患者140例作为复发组，同时选择首次发病的140例中青年脑梗死患者为首发组。入选患者均符合《各类脑血管病诊断要点》[1]，并经影像学检查确诊为脑梗死。复发性脑梗死诊断标准：原有
　　齐齐哈尔市科学技术计划项目，项目名称：中青年复发性脑梗死与亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性相关性研究，项目编号：SFGG-201513;齐齐哈尔医学院院内科研基金项目，项目名称：中青年复发性脑梗死与高尿酸血症及亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性相关性研究，项目编号：QY2016M-08
　　*李晓华为本文通讯作者
　　神经症状及体征好转或者消失，1个月后再次出现神经症状或体征（同侧或对侧），并且影像学检查确认有新发病灶，并排除其他原因。2000年WHO关于年龄段划分标准[2]：青年18～44岁，中年45～59岁，本研究要求患者入组标准为18～59岁，平均（38.67±7.92）岁，所有患者均知情，签署知情同意书，本研究得到齐齐哈尔医学院附属第三医院医学伦理委员会审批通过，可以进行本研究。
　　1.2 研究方法
　　入组患者在入院当日22∶00开始禁食，第2天08∶00空腹，采集3份肘静脉血，装入抗凝管，1管5mL，2管2mL，4℃冰箱保存待用。MTHFR基因测定方法：1）2mL静脉血，3500r/min离心10min，半径13.5cm。试剂盒采用人全血DNA（离心柱型，小量样本，<1mL，编号GK1042，上海捷瑞公司生产），按操作说明书进行操作，-20℃环境下保存使用。2）PCR扩增：应用primer 5.0软件设计PCR扩增引物，长度为655bp，PCR体系为25μL;95℃预变性5min，变性30s（94℃），复性45s（60℃），延伸1min（70℃），循环36次，最后延伸10min（72℃），在4℃时终止。3）RFLP分析：在20μL反应体系中加入2μL的酶切缓冲溶液，15μL限制性内切酶，应用1μL的去离子水补足至20μL;37℃恒温消化3h，检测DNA的浓度和纯度。
　　全部患者在次日清晨空腹采血8.0mL静脉血，离心4.0mL，采用生化酶法检测空腹血尿酸（UA），其余做常规血糖（FBG）、甘油三酯（TG）、胆固醇（CH）等检查。UA正常范围200～413μmol/L，超过413μmol/L诊断为高尿酸血症。采集5mL静脉血检测同型半胱氨酸（Hcy），取血后30min在4℃下离心10min（r=13.5cm，3000r/min），-80℃下保存上层标本;采用液相色谱仪及荧光探测仪测定Hcy水平。
　　维生素B12和叶酸水平测定：静脉血2mL，采用全自动电生化分析仪进行测定。
　　1.3 统计学方法
　　应用SPSS 17.0软件进行统计分析，计数资料用%表示，采用χ2检验;计量资料采用（±s）表示，采用独立样本t检验比较，设定0.05为检验水准，（P<0.05）则差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2.1 一般资料
　　各组患者在性别、年龄、体质量指数以及生活史（吸烟、饮酒）方面比较差异不具有统计学意义（P>0.05），具有可比性。详见表1。
　　2.2 两组各项指标比较
　　两组各项指标比较，复发脑梗死组与首发脑梗死组血尿酸指标差异不具有统计学意义（P>0.05）。但复发组血尿酸水平高于首发组。首发脑梗死组在血压、血脂方面均明显高于复发脑梗死组。见表2。
　　2.3 病例组血尿酸水平与其他因素相关性r值 　　2.4 高尿酸组与尿酸正常组比较
　　2.5 MTHFR基因C677T位点基因型分布及等位基因频率比较
　　2.6 不同基因型血浆Hcy水平比较
　　2.7 血浆维生素B12、叶酸水平比较
　　不同基因型患者维生素B12、叶酸水平比较，CT、CC基因型患者维生素B12、叶酸水平比较无统计学意义（P>0.05）;TT基因患者维生素B12水平比较无统计学意义（P>0.05）;与首发组比较，复发组TT基因患者叶酸水平降低，具有统计学意义（P<0.05）。见表7。
　　3 讨论
　　复发性脑梗死对人类危害极大，其病死率和致残率较初发脑梗死更高，它已成为严重的社会问题和经济问题。复发性脑梗死危险因素的研究结果一直存在较大的差异，尤其是中青年复发性脑梗死，多数学者认为高尿酸血症是复发型脑梗死的未受控因素，而MTHFR基因在复发的机制中也占有
　　尿酸为人体正常代谢产物，采用尿酸酶法检测正常值范围为200～413mmol/L。当人体内嘌呤代谢异常，会出现尿酸生成增多或排泄减少的情况，人体内血尿酸浓度增高称之为高尿酸血症，高尿酸血症能够增加脑血管病发病风险，若未加以控制，更会增加脑血管病的复发率。本研究中可以看出，初发组及复发组患者血尿酸水平均出现明显增高，可以看出血尿酸异常率增高與脑梗死初发及复发均密切相关。本研究可以发现高尿酸组与尿酸正常组比较，脑梗死的复发率差异有统计学意义（P<0.05），可认为高尿酸血症是脑梗死复发的危险因素。高尿酸血症的致病机制尚未明确，可能与以下因素有关：1）尿酸水平与脂蛋白代谢异常，以及高血压等因素相互作用，促进粥样硬化形成;2）尿酸盐结晶能够促进炎症反应，激活血小板以及凝血过程;3）可以通过影响嘌呤代谢促进形成血栓。痛风发作时，释放趋化因子促使急性炎症的发生。脑卒中急性发作，血液中白细胞黏附作用增强，细胞间黏附分子浓度明显增高，可以看出各疾病在彼此发生中能够相互促进。
　　本研究可以看出高尿酸血症是复发脑梗死的危险因素，这与我国著名学者周其达的研究一致[3]。但是否为独立危险因素，本文尚未得出此类结论。目前高尿酸血症导致脑梗死复发率增加的社会原因，主要是因为未引起痛风症状的高尿酸血症一般不会引起病人及家属的重视，一般也不会予以治疗。因此监控血尿酸水平对复发脑梗死的预防非常有益。MTHFR基因C677T位点是研究热点，该位点处于MTHFR基因的N端，能够影响酶的耐热性、活性。杜丽丽等研究指出[4]，MTHFR基因是Hcy代谢关键酶，其C677T位点的多态性与人体血脂水平高度相关，本研究表明，复发组TT基因型患者的Hcy水平明显高于首发组患者。蒋萍等曾指出[5]，TT基因型患者酶活性降低，约为正常值的30%，所以出现TT基因型患者的血浆Hcy水平，显著高于纯合野生型CC基因型患者。陈星霖[6]曾报道TT和CT基因型患者血浆高Hcy检出率明显增高。本研究可以看出，两组间MTHFR基因C677T位点基因型分布具有显著差异，并且复发组患者T等位基因的频率明显高于首发组，可以看出MTHER基因C677T位点的基因突变，能够促进RIS的发生。
　　叶酸是一种B族维生素，与维生素B12共同促进Hcy再甲基化过程。本研究中，复发组TT基因型患者的血浆叶酸水平明显低于首发组，在Hcy代谢中，叶酸水平降低能够促进高Hcy，进而促进复发性脑梗死发生。
　　综上所述，MTHFR基因TT基因型是中青年复发性脑梗死的重要因素，TT基因型中青年复发性脑梗死患者存在高Hcy及低叶酸。高尿酸血症与复发脑梗死发病有内在联系，是重要的危险因素。
　　参考文献
　　[1] 中华医学会第四届全国脑血管病学术会议.各类脑血管病诊断要点[J].中华神经内科杂志，1996，29（06）：379.
　　[2] 陈道纯.人类年龄期划分的指数公式[J].中国老年学杂志，2004，24（08）：771-772.
　　[3] 周其达.脑梗死复发的危险因素研究[J].实用心脑肺血管病杂志，2011，19（07）：1081-1082.
　　[4] Du L L，Lyu Z P，Liu C W，et al.Association between the MTHFR C677T polymorphism and serum lipid levels and longevity in the long-lived cohort in Guangxi Hongshuihe river basin[J].Chinese Journal of Arteriosclerosis，2016，21（04）：637-639.
　　[5] Jiang P，Zang D W.Correlation between polymorphisms of MTHFRC677T gene and plasma homocysteine in patients with acute cerebral infarction[J].Shandong Medical Journal，2017，54（08）：1-4.
　　[6] 陈星霖.MTHF+C677T基因突变及血浆tHcy水平与脑卒中关系的研究[D].武汉：华中科技大学，2016.
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