金银花不同器官提取物抑菌作用研究

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　　摘  要：以封丘金银花不同器官为材料，先获取乙醇提取物，再依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取以制备叶提取物的不同溶剂部位，最后通过抑菌试验评价提取物和不同溶剂部位对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的抑菌效果。结果表明：（1）花的抑菌效果最好，叶的抑菌效果次之，茎也表现出了一定的抑菌效果;（2）金银花各个器官对金黄色葡萄球菌的抑制效果>大肠杆菌>枯草芽孢杆菌>蜡样芽孢杆菌;（3）在叶的不同萃取部位中，正丁醇相抑菌效果最好（正丁醇相>乙酸乙酯相>石油醚相）。研究结果为金银花资源综合利用提供了一定理论依据。
　　关键词：金银花;抑菌试验;不同器官
　　中图分类号 R284   文献标识码 A   文章编号 1007-7731（2019）09-0041-2
　　金银花（Lonicera JaponicaThunb）是忍冬科多年生常绿缠绕灌木忍冬、山银花以及同属多种植物忍冬的干燥花蕾，外形呈棒状，淡黄色，气香，味淡，微苦[1]，是一种传统的中药材[2]，含有多种化学成分。金银花的花中含有肌醇、绿原酸以及黄酮类等化合物[3]，茎中含有生物碱，叶中还含有忍冬素和木犀素等。现代研究分析表明，金银花中发挥作用的成分主要是木犀草苷、肌醇和咖啡酸、绿原酸以及黄酮类等物质，它们是金银花抗菌消炎的主要作用成分。
　　围绕着金银花的药理作用、抑菌成分以及抗氧化作用等，广大研究者开展了不同方面的研究。有研究证实，金银花对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等有良好的抑菌效果[4]。研究发现金银花叶中富含绿原酸、黄酮等多酚类物质，抑菌、抗氧化等药理活性较好，特别是抑菌效果与花相当甚至高于花[5-8]。但综合比较分析金银花不同器官以及金银花叶不同萃取部位的抑菌效果的研究未见报道，因此，笔者采用抑菌试验和试管半倍稀释法确定MIC评价指标对此展开研究，为进一步扩大金银花的利用价值以及合理利用金银花提供理论基础。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料 金银花的花、茎、叶于2016年采摘自河南省新乡市封丘县。将采集来的金银花材料用清水冲洗干净后，自然阴干至恒重，粉碎后过筛，低温保存备用。
　　金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereusFrankland）为实验室保存。
　　1.2 方法
　　1.2.1 金银花不同器官提取物及叶不同溶剂萃取部位的制备 用电子分析天平精确称取样品粉末各10.0g放入锥形瓶内，采用浦娜娜等[9]的提取方法，加入60%乙醇浸泡12h，其料液比为1∶10，超声温度50℃，时间2h，重复3次，合并3次滤液。将提取液放入冻干机内冻干，得到各样品的提取物浸膏。
　　取冻干后的金银花叶提取物10g，用100mL蒸馏水溶解，并依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇溶剂萃取，每个有机溶剂重复3次。萃取溶剂为提取物溶液的3倍。萃取液浓缩后利用冷冻干燥机冻干，密封4℃保存备用。将水相、正丁醇相、乙酸乙酯相、石油醚相浸膏分别制备成不同浓度梯度使用。
　　1.2.2 抑菌试验 按滤纸片法[10]测定各器官及叶不同萃取部位的抑菌作用，判定标准以抑菌圈直径>8mm为有抑菌效果，≤8mm为无抑菌效果。空白对照应无抑菌圈产生，否则实验无效。试验设置阳性对照和阴性对照。
　　1.2.3 最小抑菌浓度（MIC）测定 将各器官及叶不同萃取部位用2倍稀释法制成不同浓度，取2mL与已溶化的固体培养基混匀、冷却凝固后，加入菌液共培养。判定标准以不长菌的浓度为最低抑制浓度（MIC）。
　　2 结果与分析
　　2.1 金银花不同部位的抑菌效果 由表1、表2可以看出，花提取物的抑菌效果>叶提取物>茎提取物，且各器官对金黄色葡萄球菌的抑制效果最明显，但对蜡样芽孢杆菌的抑制效果较弱。金银花的花、叶、茎提取物对金黄色葡萄球菌的最小抑制浓度分别为4.90、38.60、56.95mg/mL，对大肠杆菌的最小抑制浓度分别为19.25、145.00、290.25mg/mL，對枯草芽孢杆菌的最小抑制浓度分别为42.1、245.0、450.75mg/mL。
　　2.2 不同萃取部位对不同菌的抑菌效果 从表3可以看出，在叶的不同萃取部位中，抑菌效果依次为：正丁醇相>乙酸乙酯相>石油醚相，说明在正丁醇的萃取部位所含化学成分抑菌效果较强。
　　3 结论与讨论
　　金银花是一种重要的天然药用植物，较多文献对金银花中各种抑菌成分的药理作用作了研究，但对金银花不同器官以及金银花叶中抑菌成分的研究报道较少。本试验结果表明，金银花中所含的有效成分对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌均有抑菌效果，尤其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果十分明显，各器官抑菌效果依次为花>叶>茎。这与金银花各器官中有机酸含量相一致，但个别菌株的抑菌效果叶大于花，这可能与叶中黄酮含量高于花有关[11]。试验结果进一步表明金银花中有机酸和黄酮具有较好的抗菌效果，同时也为金银花叶和茎的利用提供了理论基础。
　　参考文献
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　　[9]浦娜娜，王成忠，李东荣.超高压处理提取金银花精油工艺的响应面优化[J].食品工业，2018，39（11）：125-129.
　　[10]何煜波.苦瓜抗菌作用研究[J].食品科学，1998（03）：34-36.
　　[11]徐小博，徐萍，毛雪飞，等.金银花不同器官三种活性成分含量及其抗氧化活性[J].食品工业科技，2018（13）：41-45.
　　（责编：徐世红）
　　基金项目：河南省科技攻关项目（172102110229）;新乡学院博士科研启动项目（1366020055）。
　　作者简介：任敏（1962—），女，河南新乡人，教授，研究方向：药用植物资源开发利用。   收稿日期：2019-04-21
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