蜗牛药材质量标准提升研究

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　　【摘要】目的：建立鉴别、检查、含量测定方法，完善蜗牛质量控制方法。方法：参照2015年版《中华人民共和国药典》附录相关方法进行鉴别检查及对重金属酸不溶性限度;采用乙二胺四醋酸二钠配位滴定法对其碳酸钙（CaCO3）的含量进行测定。结果：碳酸钙回归方程为y=197.53x+0.4664，r=0.9999，表明碳酸钙的取样量在0.1～0.2g范围内，与乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05mol/L）的消耗体积具有良好的线性关系。平均回收率为100.51%，RSD为0.20%（n=9）。测定结果为7批蜗牛碳酸钙的平均百分含量为92.07%，总灰分为96.73%，酸不溶灰分为7.51%。结论：该实验所采用的测定方法结果准确、可靠，可用于样品测定，可用于蜗牛的质量控制。
　　【关键词】蜗牛;鉴别;检查;含量测定;配位滴定法
　　【中图分类号】R282【文献标志码】A【文章编号】1007-8517（2019）1-0039-06
　　Abstract：ObjectiveToestablishanidentification，inspectionandcontentdeterminationmethodandimprovethequalitycontrolmethodofsnails.MethodsThecontentofcalciumcarbonate（CaCO3）wasdeterminedbycoordinationtitrationwithEDTA.GeneralinspectionandinsolublelimitofheavymetalacidwasdeterminedbyChinesePharmacopoeia2015edition.ResultsTheregressionequationofcalciumcarbonateisy=197.53x+0.4664，r=0.9999，whichindicatesthatthesampledamountofcalciumcarbonateisintherangeof0.1～0.2g，andthedisodiumedetate（0.05mol/L）Theconsumptionvolumehasagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas100.51%，RSD=0.20%（n=9）.Theresultsshowedthattheaveragepercentageofcalciumcarbonatein7batchesofsnailswas92.07%，thetotalashcontentwas96.73%，andtheacidinsolubleashcontentwas7.51%.ConclusionTheresultsoftheassayusedinthisexperimentareaccurateandreliable.heycanbeusedforsampledeterminationandcanbeusedforqualitycontrolofsnails.
　　Keywords：Snial;Identification;Inspection;ContentDetermination;CoordinationTitration
　　蝸牛为巴蜗牛科动物同型巴蜗牛BradybaenasimiLarisFerussac的贝壳。夏、秋二季捕捉，置沸水中略煮，去肉，洗净，晒干。蜗牛，蒙古文名音译“布热-好日海”[1]，别名音译“东日阿”。《无误蒙药鉴》记：“‘东日阿’…《晶鬘》中云：‘从状如盾、扁而旋绕的壳中出，硬壳驮于背后。尿液中炮制用。”《医典》中云：‘蜗牛杀虫，利水肿’”[2]。蒙古文别名“东日阿”意译为像似海螺，系前人依据动物形状命名。性咸、凉，味甘。具有消水肿，利尿，杀虫，清瘟疫功效。用于水肿，肾热，膀胱热，尿闭，尿路结石，协日疫，黄水疮，肠寄生虫。本品1986年载入《内蒙古蒙药材标准》[1]，该标准仅就其【性状】做了规定外，缺少其它有效的质量控制方法及指标。通过实验研究，为蜗牛建立稳定、可靠、准确的检查、含量测定方法，填补该药材质量标准项下空白项。合理控制质量，保证其用药安全及疗效提供可靠的依据。
　　1实验材料
　　1.1药材蜗牛来源：X1（批号：160626，河北安国）;X2（批号：20161106，山东）;X3（批号：170101，广西）;X4（批号：170102，安徽）;X5（批号：20170208，山东）;X6（批号：20170307，河北保定）;X7（批号：20170219，湖南），经鉴定为同型巴蜗BradybaenasimiLarisFerussac的贝壳。见图1。
　　1.2仪器滴定管（50mL），磁力搅拌器，BS224S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），T-1200N型马弗炉（郑州天纵），DL-1型电炉（北京市永光明医疗仪器有限公司）。
　　1.3试药乙二胺四醋酸二钠;碳酸钙;盐酸;氢氧化钾;氨溶液;氯化铵以上均为分析纯;基准氧化锌;甲基红;钙黄绿素;铬黑T。
　　2方法与结果
　　2.1鉴别本品属动物壳类药材，主含碳酸钙。故照《中国药典》2015年版四部（通则0301）[3]相关方法对其进行了一般鉴别试验。
　　2.1.1钙盐鉴别取铂丝用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显砖红色。结果见图2，7批药材钙盐的火焰鉴别反应，均呈阳性。
　　2.1.2沉淀鉴别取本品粉末0.5g，加稀盐酸5mL，即产生大量气泡，滤过，滤液加甲基红指示液2滴，用氨试液中和，再滴加盐酸至恰呈酸性，加草酸铵试液，即生成白色沉淀;分离，沉淀不溶于醋酸，但可溶于稀盐酸。结果见图3～7。7批药材钙盐的沉淀鉴别反应，均呈阳性。 　　2.1.3碳酸盐鉴别取本品粉末0.5g，加稀盐酸5mL即泡沸，产生二氧化碳气体，导入氢氧化钙试液5mL中，即生成白色沉淀。结果见图8，7批药材的碳酸盐鉴别反应，均呈阳性。
　　2.2灰分检查照《中国药典》2015年版四部（通则2302）[3]灰分测定法，对7批样品的总灰分及酸不溶性灰分进行了考察测定。
　　2.2.1总灰分测定取供试品2g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量（精准至0.01g），缓缓炽热，至完全碳化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品总灰分的含量（%）。结果见表3。本品含碳酸钙达90%以上，此炽灼条件下不分解，故测定结果减失重量均较少。该项检查不收入标准草案正文。
　　2.2.2酸不溶性灰分测定取上项所得的灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸約20mL、用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10min，表面皿用热水5mL冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品酸不溶性灰分的含量（%）。注意避免燃烧。结果见表1。本品壳内易聚集泥沙，影响药材质量，故应控制其酸不溶性灰分。蜗牛酸不溶性灰分测定结果表明，7批样品中酸不溶性灰分平均值为7.51%，6批样品酸不溶性灰分均低于9.0%，测定值中仅有一例大于9.0%，故本品酸不溶性灰分不得过9.0%。
　　2.3重金属照重金属检查法《中国药典》2015年版四部（通则0821第一法）[3]对本品进行了检查。
　　2.3.1标准铅溶液的制备称取硝酸铅0.1599g，置1000mL量瓶中，加硝酸5mL与水50mL溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密量取贮备液10mL，置100mL量瓶中加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL相当于10μg的Pb）。本液现用现配。
　　2.3.2供试品溶液的制备取本品0.50g，2份，分别置25mL纳氏比色管中，一份（乙管）加水5mL，混合均匀，加稀盐酸4mL，煮沸5min，放冷，滤过，滤器用少量水洗涤，合并洗液与滤液，加酚酞指示液1滴，并滴加适量的氨试液至溶液显淡红色，加稀醋酸2mL与水制成25mL，加维生素C0.5g，溶解后既得;另一份（丙管）加水5mL，混合均匀，加稀盐酸4mL，煮沸5min，放冷，滤过，滤器用少量水洗涤，合并洗液与滤液，加酚酞指示液1滴，并滴加适量的氨试液至溶液显淡红色，加稀醋酸2mL，标准铅溶液2.00mL（20ug）与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL后，加水制成25mL，加维生素C0.5g，溶解后既得。
　　2.3.3检查方法取25mL纳氏比色管一支（甲管），加标准铅溶液2mL与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL后，加水稀释成25mL，加维生素C0.5g。作为对照品溶液。取甲管对照品溶液与供试品溶液乙管，丙管，分别加硫代乙酰胺试液各2mL，摇匀，放置2min，照《中国药典》2015年版四部（通则0821第一法）[4]依法操作，比较检查，结果见表2。7批供试品溶液的颜色都浅于10μg标准铅溶液的颜色，重金属含量均少于百万分之二十。本品重金属含量不过20mg/kg。
　　2.4含量测定
　　2.4.1滴定液的制备取乙二胺四醋酸二钠19g，加适量的水使溶解成1000mL，摇匀。取于约800℃灼烧至恒重的基准氧化锌0.1220g，精密称定，加稀盐酸3mL使溶解，加水25mL，加0.025%甲基红的乙醇溶液1滴，滴加氨试液至溶液显微黄色，加水25mL与氨-氯化铵缓冲液（pH10.0）10mL，再加铬黑T指示剂少量，用本液滴定至溶液由紫色变为纯蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正（空白消耗量为0.05mL）。每1mL乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05moL/L）相当于4.069mg的氧化锌。根据本液的消耗量与氧化锌的取用量，算出本液的浓度，即得。本试验用乙二胺四醋酸二钠滴定液的浓度为0.0501moL/L。其校正因子F为1.002。
　　2.4.2测定方法取本品细粉约0.15g，精密称定，置锥形瓶中，加稀盐酸10mL，加热使溶解，加水20mL与甲基红指示液1滴，滴加10%氢氧化钾溶液至溶液显黄色，继续多加10mL，加钙黄绿素指示剂少量，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05moL/L）滴定至溶液黄绿色荧光消失而显橙色。每1mL乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05moL/L）相当于5.004mg的碳酸钙（CaCO3）。
　　2.4.3线性与范围取碳酸钙0.100g、0.125g、0.150g、0.175g、0.200g，精密称定，分别置锥形瓶中，照“2.4.2测定方法”项下方法，自“加稀盐酸10mL”起依法操作，以样品量（x）对乙二胺四醋酸二钠滴定液（EDTA0.05moL/L）的消耗体积（y）进行线性回归，得标准曲线回归方程为：y=197.53x+0.4664，相关系数r=0.9999。表明碳酸钙的取样量在0.1～0.2g范围内，与乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05moL/L）的消耗体积具有良好的线性关系。
　　2.4.4精密度试验取碳酸钙0.15g，精密称定，置锥形瓶中，照“2.4.2测定方法”项下方法，自“加稀盐酸10mL”起依法操作，连续测定6次，并计算含碳酸钙测得率。碳酸钙的测得率为100.92%，RSD为0.18%。结果表明该试验精密度良好。
　　2.4.5稳定性试验精密称取样品X4（批号170102）0.15g，照“2.4.2测定方法”分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h时间段依法测定，其结果平均含量为91.36%、RSD为0.21%。表明该方法稳定性良好。 　　2.4.6重复性试验称取样品X4（安徽，批号170102）0.15g，6份，精密称定，分别照“2.4.2测定方法”依法测定，其结果重复性良好，平均含量为92.22%、RSD为0.16%。
　　2.4.7回收率试验取已知含量的样品X4（安徽，批号170102）0.075g，9份，精密称定，各置錐形瓶中，分三组按标准品加入量-样品中含量0.5∶1、1∶1、1.5∶1的要求分别依次精密加入碳酸钙，照“2.4.2测定方法”项下方法，自“加稀盐酸10mL”起依法操作，平行测定3次，其CaCO3的总平均回收率为100.51%、RSD为0.20%。结果见表3。
　　2.4.8样品测定取蜗牛样品细粉0.15g，精密称定，各置锥形瓶中，照“2.4.2测定方法”，自“加稀盐酸10mL”起依法操作，测定并计算含量。蜗牛平均含量为92.07%，RSD为0.31%。结果见表4。
　　3讨论
　　蜗牛主含碳酸钙，所以参照《中国药典》2015年版一部载石决明【含量测定】项下方法，研究建立了采用乙二胺四醋酸二钠配位滴定法对其碳酸钙（CaCO3）含量进行测定的方法。
　　蜗牛7批样品碳酸钙的平均含量约为92.07%，其含量范围为91.69%～92.45%，各批间含量较接近（RSD=0.31%）。故取其下限，暂定蜗牛含碳酸钙（CaCO3）不得少于90.0%。
　　制蜗牛7批样品碳酸钙的平均含量约为95.44%，其含量范围为95.04%～95.84%。各批间含量较接近（RSD=0.40%）。故取其下限，暂定制蜗牛含碳酸钙（CaCO3）不得少于94.0%。
　　参考文献
　　[1]内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙药材标准[S].赤峰：内蒙古科学技术出版社，1986：506.
　　[2]占布拉道尔吉.无误蒙药鉴[M].呼和浩特：内蒙古人民出版社，1988：366.
　　[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（四部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：137.
　　[4]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准（蒙药分册）[S].北京：人民卫生出版社，1998.
　　（收稿日期：2018-10-31编辑：刘斌）
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