益气消癥法方药治疗冠心病的疗效及其对ERK12信号转导通路、Omentin-1的影响

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　　摘要 目的：探究益氣消癥法方药治疗冠心病的疗效及其对ERK12信号转导通路、Omentin-1的影响。方法：选取2017年3月至2018年3月郑州大学附属郑州中心医院收治的冠心病患者90例作为研究对象，按照随机数表法随机分为对照组和观察组，每组45例，对照组使用氯吡格雷治疗，观察组在对照组基础上联合益气消癥法方药治疗。比较2组患者的临床疗效。检测并比较2组患者治疗前后血清hs-CRP、TNF-α、和Omentin-1水平。并通过qRT-PCR反应检测MEK和ERK mRNA的表达水平。结果：观察组的有效率显著高于对照组（P<0.05）。治疗后2组心功能指标均得到显著改善（P<0.05）;治疗后观察组的LVEF显著高于对照组，LVEDD显著低于对照组（均P<0.05）。治疗后2组炎性反应因子均显著降低，治疗后观察组hs-CRP、TNF-α显著低于对照组（P<0.05）。治疗前2组MEK和ERK水平差异无统计学意义（P>0.05），治疗后均显著降低（P<0.05），治疗后观察组MEK和ERK水平均显著低于对照组（P<0.05）。术前2组Omentin-1水平差异无统计学意义（P>0.05），术后均显著升高（均P<0.05），术后观察组血清Omentin-1显著高于对照组（P<0.05）。结论：益气消癥法方药对冠心病具有更好的临床疗效，并可上调血清Omentin-1水平，提高预后;进一步的研究显示气消癥法方药可抑制MEK/ERK通路水平，降低炎性反应因子水平，可能是取得更好疗效的作用机制。
　　关键词 冠心病;益气消癥法方药;细胞外信号调节激酶;网膜素-1;信号转导通路
　　Abstract Objective：To explore the therapeutic effects of Yiqi Xiaozheng method in the treatment of coronary heart disease and its effects on ERK12 signal transduction pathway and Omentin-1.Methods：A total of 90 patients with coronary heart disease treated in the Zhengzhou Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University from March 2017 to March 2018 were selected as the study object.They were randomly divided into the control group and the observation group according to the random number table method，with 45 cases in each group.The control group was treated with clopidogrel，and the observation group was prescribed medicine of Yiqi Xiaozheng method，on the basis of the treatment of the control group.The clinical effects of the 2 groups of patients were compared.Serum hs-CRP，TNF-α，and Omentin-1 levels were detected before and after the treatment of both groups.The expression levels of MEK and ERK mRNA were detected by qRT-PCR reaction.Results：The effective rate of the observation group was significantly higher than that of the control group（P<0.05）.After the treatment，the cardiac function indexes of both groups were significantly improved（P<0.05）.The LVEF of the observation group was significantly higher than that of the control group after treatment，and the LVEDD was significantly lower than that of the control group（P<0.05）.The inflammatory factors of the 2 groups were significantly decreased after treatment.The levels of hs-CRP and TNF-α in the observation group were significantly lower than those in the control group（P<0.05）.There was no statistical significance of the difference in MEK and ERK levels between the 2 groups before treatment（P>0.05）.After treatment，the levels of MEK and ERK in the observation group were significantly lower than those of the control group（P<0.05）.There was no significant difference in the levels of Omentin-1 between the 2 groups before treatment（P>0.05），while the level in both groups was significantly increased after the treatment（P<0.05）.The serum Omentin-1 level of the observation group after the treatment was significantly higher than that of the control group（P<0.05）.Conclusion：Yiqi Xiaozheng method has better clinical efficacy for coronary heart disease，and can up-regulate serum Omentin-1 level and improve prognosis.Further studies have shown that prescriptions of Yiqi Xiaozheng method can further inhibit the level of MEK/ERK pathways，and reduce the level of inflammatory factors，which may be related to better efficacy. 　　Key Words Coronary heart disease; Yiqi Xiaozheng prescription; ERK; Omentin-1; Signal transduction pathway
　　中图分类号：R285.6文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.05.039
　　冠状动脉粥样硬化性心脏病（Coronary Atherosclerotic Heart Disease），又称冠心病。近年来冠心病的发病率逐年提高[1]。冠心病的病程长，需长时间治疗，中药因其具有较好的疗效和较低的不良反应引起了更多的重视[2]。益气消癥法方药是一种常用的中药方，具有消炎、抗凝等多种作用，在抑制子宫肌瘤血管新生和治疗慢性阻塞性肺疾病中均有较好的效果，然而鲜有其治疗冠心病的研究[3-4]。Ras/Raf/丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外信号调节激酶（ERK）调节多种细胞过程，包括增殖、凋亡和转移，最新的研究显示冠心病的发生发展可能与ERK1/2有关[5]。网膜素-1（Omentin-1）作为一种新的脂肪因子，参与动脉粥样硬化和冠心病的形成和发展[6]。本研究主要观察益气消癥法方药对冠心病患者疗效，并通过分析其对ERK1/2以及Omentin-1的影响探究其作用机制，为临床更好地治疗冠心病提供新思路。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料 选取2017年3月至2018年3月郑州大学附属郑州中心医院收治的冠心病患者90例作为研究对象，其中男51例，女39例，年龄53～75岁。将以上患者按照随机数表法分为对照组和观察组，每组45例。对照组中男26例，女19例，年龄53～74岁，平均年龄（60.45±3.96）岁，病程3～27年，平均病程（18.34±3.98）年;观察组中男25例，女20例，年龄54～75岁，平均年龄（61.41±4.01）岁，病程4～26年，平均病程（16.43±3.26）年。2组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本次研究已经获得伦理委员会批准（伦理审批号：2017038）。
　　1.2 纳入标准 1）年龄20～75岁;2）经冠脉造影检查确诊为冠心病[7];3）首次发病;4）资料完整;5）签署知情同意书。
　　1.3 排除标准 1）在入组前确诊为冠心病并接受过介入治疗或药物治疗的患者;2）合并心力衰竭和急性心肌梗死;3）合并严重肝肾功能不全的患者;4）合并慢性阻塞性肺病或其他严重肺部疾病;5）合并其他部位感染或恶性肿瘤;6）心有脏移植或心脏外科手术史;7）对本次研究药物过敏。
　　1.4 治疗方法 2组患者均进行常规治疗，包括扩血管、控制血压、吸氧以及改善循环等。对照组在常规治疗的基础上使用氯吡格雷（赛诺菲杭州制药有限公司，国药准字J20130083）治疗，口服，300 mg/次，1次/d;3～5 d后改为75 mg/次，1次/d。观察组在对照组基础上联合益气消癥法方药治疗，组方为：水蛭10 g、川芎10 g、黄芪30 g、赤芍10 g、紫菀10 g、广地龙12 g、猪牙皂3 g，每日1剂，水煎400 mL，早晚分2次口服。2组均进行30 d的治疗。
　　1.5 观察指标
　　1.5.1 临床疗效 在治疗后评价观察组每位患者疗效[6]。显效：患者各项实验室指标恢复正常，心绞痛、胸闷、心悸等临床症状的发生减少80%以上;有效：患者各项实验室指标基本恢复临床症状发作次数减少50%以上;无效：各项临床症状和实验室指标无显著改善。有效率=（显效+有效）/总例数×100%。
　　1.5.2 心功能指标 分别在治疗前和治疗后进行左心室造影检测患者心功能，将导管（4F，TERUMO，日本）置于左心室，取向为右前位30°，然后推射造影剂35 mL，速度12～15 mL/s，对左心室进行造影，检测项目包括：左心室射血分数（Left Ventricular Ejection Fractions，LVEF）和左心室舒张末期内径（LVEDD）。
　　1.5.3 血清炎性反应因子和Omentin-1 分别在治疗前和治疗后抽取患者清晨空腹外周静脉血10 mL，其中2 mL使用全自动生化分析仪（日立，Hitachi 7180）检测每份样本中血清炎性反应因子水平，检测内容包括超敏C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）;2 mL静止后离心（3 000 r/min，10 min）收集血清，使用酶联免疫法检测血清Omentin-1水平，試剂盒购买于南京凯基生物科技有限公司，严格按照试剂盒说明书中的方法操作。
　　1.5.4 外周血ERK1/2水平 另5 mL离心取上层血清，使用全血RNA分离试剂盒分离全血RNA，然后通过qRT-PCR反应检测MEK和ERK mRNA的表达水平。使用逆转录试剂盒（TaKaRa，Japan）对RNA样品进行逆转录测定以合成cDNA。逆转录反应条件反应条件为37 ℃，反应15 min，逆转录酶失活条件为85 ℃，反应15 s。用SYBR Prellix Ex TaqTM实时PCR试剂盒（TaKaRa，Japan）进行RT-qPCR实验。通过在95 ℃下激活DNA聚合酶5 min进行PCR，然后进行40个循环的两步PCR（95 ℃10 s和60 ℃ 30 s），最终延伸75 ℃ 10 min，保持在4 ℃。所有引物均获自Genewiz（中国江苏苏州）公司，使用2-△△CT法分析mRNA表达见表1。
　　1.6 统计学方法 采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，计数资料以率（%）表示，采用秩和检验或2检验比较;计量资料以均数±标准差（±s）进行正态分布检验，组间两两比较使用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果 　　2.1 2组患者临床疗效比较 观察组有效率显著高于对照组，2组比较差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
　　2.2 2组患者心功能指标比较 治疗前2组的心功能指标比较，差异均无统计学意义（P>0.05），治疗后观察组LVEF均显著高于对照组（P<0.05），LVEDD显著低于对照组（P<0.05）。见表3。
　　2.3 2组患者炎性反应因子水平比较 治疗前2组炎性反应因子差异无统计学意义（P>0.05），治疗后观察hs-CRP、TNF-α均显著低于对照组（均P<0.05）。见表4。
　　2.4 2组患者血清Omentin-1比较 术前2组Omentin-1水平差异无统计学意义（P>0.05），术后观察组血清Omentin-1显著高于对照组（均P<0.05）。见表5。
　　2.5 2组患者MEK和ERK水平比较 治疗前2组MEK和ERK水平差异无统计学意义（P>0.05），治疗后观察组MEK和ERK水平均显著低于对照组（均P<0.05）。见表6。
　　3 讨论
　　随着人口老龄化的加剧和人们生活水平的提高，我国冠心病的发病率呈现逐年升高的趋势。冠心病的基本发病机理为动脉粥样硬化，是由血小板聚集引起脂类等沉积在动脉内膜，引起的动脉堵塞和心脏缺血[8]。抗血小板药物是治疗冠心病的主要方法，但常用的抗血小板药物如阿司匹林等疗效欠佳，并且易出现不良反应。又由于冠心病病程较长，需要长期服用药物，对于药物不良反应的问题也越来越收到重视，因此，研究新的具有良好效果方法在临床具有重大意义。
　　临床研究发现使用氯吡格雷的预后具有一定的差异，仍有一部分患者不会从中获益[9]。益气消癥法方药具有改善血管生成的作用，其中的水蛭具有抗凝以及溶解血栓的作用，从而改善冠状动脉的血液循环[10]。本次研究结果显示观察组的有效率显著高于对照组;治疗前2组的心功能指标均无统计学意义，治疗后均得到显著的改善，治疗后观察组LVEF均显著高于对照组，LVEDD显著低于对照组。益气消癥法方药中的水蛭中含有水蛭素，是一种抗凝化瘀药物，在治疗治心脑血管疾病中可以改善血液循环，具有较好的疗效。而高的氧化应激水平和炎性反应水平也是引起动脉粥样硬化发生的重要机制，益气消癥法方药中的川芎、黄芪、紫菀等中含有的活性物质具有抗炎、抗氧化的作用，从而降低氧化应激水平并抑制炎性反应因子的表达，从而降低动脉粥样硬化发生的概率，对于冠心病的治疗具有更好的效果[11-12]，提示益气消癥法方药的使用可进一步提高冠心病的临床疗效。
　　Omentin-1是近年来新发现的一种脂肪因子，具有调节和保护代谢、抑制炎性反应和抗氧化的作用，从而参与动脉粥样硬化和冠心病的形成和发展[13]。本次研究结果显示术后2组Omentin-1水平均显著升高，且术后观察组血清Omentin-1显著高于对照组。过往研究结果显示低水平的Omentin-1是冠心病的独立危险因素[14]。Nazar等的研究也显示临床疗效更佳的冠心病患者血清Omentin-1水平显著升高[15]。此外，也有研究认为血清Omentin-1可作为判断冠心病预后的血清因子[16]，提示使用益气消癥法方药联合治疗冠心病具有更好的预后。
　　MEK/ERK信号通路在细胞的生长、增殖、凋亡等多种细胞过程中发挥着重要作用，几年来研究显示由于心肌缺血引起的氧化应激激活会激活MEK/ERK通路[17]。有研究显示MEK和ERK在正常心肌细胞中低表达，而冠心病患者心肌细胞中MEK和ERK水平显著高于非冠心病患者[18]。本次研究结果显示治疗前2组炎性反应因子差异无统计学意义，治疗后均显著降低（P<0.05），治疗后观察hs-CRP、TNF-α均显著低于对照组。治疗前2组MEK和ERK水平无统计学意义（P>0.05），治疗后均显著降低，治疗后观察组MEK和ERK水平均显著低于对照组。过往也有研究显示血清中的MEK和ERK水平与冠心病患者的病情严重程度呈现正相关关系[19]。而MEK/ERK通路的激活可激活炎性反应，促进TNF-α以及白细胞介素等的合成和分泌，参与动脉粥样硬化和冠心病的发生和发展[20]。近年来有研究显示益气消癥法方药具有改善微血管新生和血液循环的作用[21]。Parthasarathy等的研究也显示通过抑制MEK/ERK通路可以抑制炎性反应[22]，Zhang等的研究结果也显示下调MEK/ERK水平可以通过抑制炎性反应改善血管上皮细胞功能从而治疗冠心病[23]，提示益气消癥法方药可通过抑制MEK/ERK通路下调炎性反应因子的水平，这可能是治疗冠心病的作用机制。
　　综上所述，益气消癥法方药对冠心病具有更好的临床疗效，并可上调血清Omentin-1水平，提高预后。进一步的研究显示气消癥法方药可进一步的抑制MEK/ERK通路的水平，降低炎性反应因子水平，可能与更好的疗效有关。但是关于益气消癥法方药治疗冠心病的长期疗效和安全性还需要进一步研究。
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　　（2018-10-12收稿 责任编辑：芮莉莉）
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