长沙地区RhD阴性献血人群血清学表型调查

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　　[摘要] 目的 调查并了解长沙地区RhD 阴性献血者血清学表型分布，为建立RhD阴性稀有血型库提供依据。方法 对长沙血液中心2016年1月—2018年5月的献血者标本375 710人份，使用微板法进行RhD 抗原筛查;进一步采用试管抗人球蛋白法对初筛阴性者进行确认;确认阴性者C、c、E、e表型鉴定则采用盐水试管法。结果 375 710名献血者中初筛RhD阴性1 483例，其中D变异型47例，确认RhD 阴性1 436例（96.83%）。确认阴性中A型482例（33.57%）， B型305例（21.24%），O型534例（37.19%），AB 型115 例（8.01%）;表型鉴定结果为ccdee 759例（52.86%），Ccdee 520例（36.21%），CCdee 78例（5.43%），ccdEe 50例（3.48%），CcdEe 26例（1.81%），ccdEE 2例（0.14%），CCdEe 1例（0.07%）。结论 对RhD阴性献血者进行血清学表型鉴定，并建立RhD 阴性资料库，对保障RhD阴性患者临床用血安全及时有效具有重要意义。
　　[关键词] RhD阴性;Rh表型;稀有血型库
　　[中图分类号] R446.6 [文献标识码] A [文章编号] 1672-5654（2020）01（a）-0155-03
　　[Abstract] Objective To investigate and understand the serological phenotype distribution of RhD-negative blood donors in Changsha， and to provide a basis for the establishment of a RhD-negative rare blood group bank. Methods A total of 375 710 blood donor specimens from January 2016 to May 2018 at Changsha Blood Center were screened for RhD antigen using the microplate method; further in vitro anti-human globulin method was used to confirm negative screening; confirmation The C， c， E， and e phenotypes of the negative patients were determined by the saline test tube method. Results In 375，710 blood donors， 1 483 RhD-negative patients were screened， including 47 D variants， and 1 436 RhD-negative patients （96.83%） were confirmed. Among the confirmed negative， 482 cases （33.57%） of type A， 305 cases （21.24%） of type B， 534 cases （37.19%） of type O， and 115 cases （8.01%） of type AB; 759 cases （52.86%） of ccdee were identified， 520 cases of Ccdee （36.21%）， 78 cases of CCdee （5.43%）， 50 cases of ccdEe （3.48%）， 26 cases of CcdEe （1.81%）， 2 cases of ccdEE （0.14%）， 1 case of CCdEe （0.07%）. Conclusion Serological phenotypic identification of RhD-negative blood donors and the establishment of a RhD-negative database are of great significance for ensuring the safe and timely use of blood in RhD-negative patients.
　　[Key words] RhD negative; Rh phenotype; Rare blood group bank
　　 目前，國际输血学会（ISBT）共确定了36个血型系统，其中Rh血型系统最具复杂性和多态性，在溶血性输血反应及新生儿溶血方面的重要性仅次于ABO血型系统[1]。在Rh血型系统中，与临床输血关系密切的有5个抗原，其抗原性由强到弱依次为D、E、C、c、e，主要通过输血、妊娠等免疫刺激产生相应抗体从而引起新生儿溶血病、溶血性输血反应等[2]。据报道，RhD阴性在我国汉族人群中所占比例为0.2%～0.5%[3]，为稀有血型。为了给临床RhD阴性患者及时提供合适的血液，并尽量减少同种抗体导致的免疫性输血反应，该研究对长沙区2016年1 月—2018年5月的RhD阴性献血者C、c、E、e表型进行鉴定，并分析其分布规律，完善并建立RhD阴性血型资料库，现报道如下。
　　1  材料与方法
　　1.1  标本来源
　　 长沙地区的无偿献血者，共375 710名，年龄18～55岁，经初筛并最终确认为RhD阴性者共1 436名。
　　1.2  试剂与仪器
　　 抗-D IgM（长春博德），抗-D IgG+IgM（Dominion Biologicals Limited，MILLIPORE），抗-D IgG（上海血液生物医药有限公司），抗-A、抗-B（长春博德），抗-C、抗-c、抗-E、抗-e（上海血液生物医药有限公司）抗人球蛋白IgG+C3d（上海血液生物医药有限公司），试剂均批检合格并在有效期内使用。主要仪器：KUBOTA-KA2200 血清学离心机，AK03B血型仪（深圳爱康公司）。 　　1.3  方法
　　 RhD阴性初筛和ABO血型检测均使用单克隆IgM 抗体，采用96孔微板法，酶标仪检测OD值读取结果，采用试管抗球蛋白试验对初筛阴性者进行确认。试管法抗球蛋白试验：50 μL 3%受检者红细胞悬液+50 μL IgG+IgM抗-D，1 000 g離心15 s，看结果并记录，随后37℃水浴30 min，用生理盐水洗涤3次，最后一次离心后尽量弃掉上清液，加入50 μL抗人球蛋白试剂，1 000 g离心15 s，判读结果。Rh表型检测（盐水试管法）：50 μL标准血清+50 μL 3%受检者红细胞悬液，摇匀后1 000 g离心15 s，判读结果。
　　2  结果
　　2.1  献血者RhD阴性确认结果
　　 在375 710名献血者中，初筛RhD阴性共1 483例，进一步的确认试验表明，其中47例（3.17%）为RhD变异型，1 436例（96.83%）为确认RhD 阴性，RhD阴性占总献血人群的0.38%。确认阴性中A 型482例（33.57%），B型305例（21.24%），O型534例（37.19%），AB型115 例（8.01%），见表1。
　　2.2  RhD阴性献血者表型分布情况
　　1 436名RhD阴性献血者表型主要为Ccdee（36.21%），ccdee（52.86%），其他表型分别为CCdee78例（5.43%），ccdEe50例（3.48%），CcdEe26例（1.81%），ccdEE2例（0.14%），CCdEe1例（0.07%），见表2。
　　2.3  RhD阴性献血者C、c、E、e抗原分布
　　 e抗原分布频率最高，占99.86%，E抗原频率最低，占5.50%，见表3。
　　3  讨论
　　 该研究共初筛RhD阴性1 483例，其中D变异型47例（3.17%），比石家庄地区报到的6.84%略低[4]，可能是因为长沙血液中心近年来出于输血安全角度考虑，对检测出来的弱D或部分D献血者进行了屏蔽。该研究表明，长沙地区的RhD阴性献血人群占总献血人群的0.38%，符合我国汉族人群中RhD阴性所占比例为0.2%～0.5%的特点，与苏湘晖等[5]报到的岳阳地区献血人群中RhD阴性频率为0.33%十分接近，比张巧琳等[1]报到重庆地区献血人群中RhD阴性所占比例为0.466%略低。
　　 长沙地区献血者中，RhD阴性表型主要为Ccdee  （36.21%），ccdee（52.86%），与国内上海、深圳等其他地区表型分布相近[1，6-7]，其他表现型频率由高到低依次为：CCdee、ccdEe、CcdEe、ccdEE、CCdEe，此次调查结果中没有CcdEE和CCdEE表现型。全国不同地区Rh表现型频率的区别主要在于ccdEe和CCdee，济南、北京等地区ccdEe频率高于CCdee频率[8-9]，而上海、重庆、长沙等地区CCdee>ccdEe[1]，可能有一定的南北地区差异。
　　 该研究1 463名RhD阴性献血者中e抗原频率最高为99.86%，E抗原分布频率最低，只有5.50%。D抗原的重要性已经逐渐受到了足够的重视，RhD阴性的患者因输血而产生抗-D抗体的情况越来越少，多数是RhD阴性孕产妇因妊娠免疫刺激而产生抗-D[10]。随着研究的深入，除抗-D外的其他Rh血型系统的不规则抗体逐渐受到关注，尤其是抗-E。阳志勇等[11]研究发现128例抗筛阳性的患者中，Rh系统的不规则抗体共77例，占60.16%，其中尤以抗E为主（72例/77例）。有研究表明交叉配血ABO和RhD一致的同时，RhE抗原的匹配也十分必要[12]。对于需要多次反复输血治疗的RhD阴性患者，当再次输入表型不一致的血液时，会增加因外来抗原刺激而产生抗体的机会，抗体的产生一方面会加大寻找相配合的血液的难度，另一方面会引起输血反应，甚至死亡的，所以输血时，不仅要考虑血液的相配合性，还要考虑Rh表型。长沙血液中心已经对长沙地区所有的RhD阴性献血者进行了Rh分型，若能坚持采用Rh系统的5个抗原同型输注，应该可以在很大程度上降低患者不规则抗体的几率，尤其是Rh系统的，从而显著提高了输血疗效，确保了输血安全。
　　 采供血机构对RhD阴性献血者进行初筛、确认、抗体筛查及表型检测，并建立稀有血型资料库，此举确保了特殊血型患者的临床用血安全。
　　[参考文献]
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　　[11]  阳志勇，陈芝喜.Rh抗原分型检测对反复输血患者的临床意义[J].中国免疫学杂志，2018，34（2）：267-269.
　　[12]  葛艳玲，刘英.RhE抗原检测及同型输注在临床输血中的意义[J].临床血液学杂志：输血与检验，2018，31（1）：137-138.
　　（收稿日期：2019-10-09）
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