高效液相色谱法检测食品及其包装
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摘 要:本文建立了运用高效液相色谱法，二极管阵列检测器检测塑料用食品包装中邻苯二甲酸酯类的残留。该法的加标回收率为78.00%～114.80% , 线性R>0.9999 ,检出限0.50mg/kg，准确度和灵敏度高, 样品用量少, 简便易行, 可同时测定7种酞酸酯化合物。该方法对邻苯二甲酸二丁酯这类沸点高的化合物的检测比气相色谱法优越。具有广泛的应用前景。
关键词：高效液相 邻苯二甲酸酯类 残留
当今社会食品安全问题愈来愈受到广大百姓的关心 ,食品安全的范围很广,它不仅仅指食品本身 ,还涉及到与食品相关的诸多方面 ,如食品所用原材料、食品加工工艺过程污染控制、食品放置与储存、食品包装所用材料等方面。
邻苯二甲酸酯（PAEs）也称为酞酸酯，主要用作塑料增塑剂，随着塑料工业的发展和塑料制品的大量使用，邻苯二甲酸酯已成为环境中无所不在的污染物，极为普遍地存在于土壤、底泥、大气、水体和生物体等环境样品中，酞酸酯类物质是一类环境雌激素，它可以扰乱内分泌, 对人体健康危害巨大。世界卫生组织（WHO）1995年公布的必须控制的[5]。其中有6种商品化的邻苯二甲酸酯被美国EPA列为重点控制的污染物（邻苯二甲酸二甲酯 DMP 、二乙酯 DEP 、二丁酯 DBP 、邻苯二甲酸二 2-乙基己 酯 DEHP 、二辛酯 DOP 、丁基苄基酯 BBP）,3种被我国列为优先控制污染物（DMP、DBP和 DOP）,8种被列在世界野生动物基金会(WWF)的环境激素名单中。本文针对食品用塑料包装中添加的增塑剂邻苯二甲酸酯类化合物展开研究 ,建立一种方便、快捷、准确的检测方法。
1实验部分
1.1仪器与试剂
高效液相色谱仪(Waters Allance 2695-2996),Empower2色谱工作站,PDA检测器； SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm色谱柱；吉尔森GX271全自动固相萃取仪。固相萃取小柱，Waters公司的 OASIS.HLB（6mL,200mg）小柱；分析天平：感量0.1mg；美国Organomation N-EVAP112型氮吹仪；IKAR werke T25型均质机；离心机；溶剂过滤装置；0.45μm有机滤膜；Milli-Q超纯水机。
甲醇、乙腈为HPLC级（美国Fisher公司）；丙酮、氯化钠、无水硫酸钠无为分析纯试剂。
邻苯二甲酸酯类标准品：邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP）、邻苯二甲酸二己酯（DHXP）、邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、邻苯二甲酸二辛酯（DNOP）。标准品纯度均在97%以上,美国进口,购于百灵威化学品部。
1.2标准溶液的配制[4，7，8]
准确称取上述标准品各0.1000g,分别用甲醇定容至100mL容量瓶中,配成100mg/mL的单标储备液。分别移取上述单标储备液各10mL，放置到100mL容量瓶中。用甲醇定容，配制成100mg/L的混合标准储备液，置于4℃冰箱中保存备用。标准储备液每6个月更换一次，或与标准品比较，发现问题时，必须立即更换。
混合标准系列溶液的制备：取一定量的100mg/L的混合标准储备液，用甲醇分别稀释成质量浓度为0.16、1.60、16.00、40.00mg/L的标准系列，置于4℃冰箱中保存。混合标准系列溶液每1～2个月进行更换，或与标准品比较，发现问题时，必须立即更换。
1.3样品前处理[6]
1.3.1 食品
（1）油脂类固体或半固体样品：称取均匀样品2g(精确至0.1mg)置于离心管中，加入10mL正己烷，均质2min，2500r/min离心3min，己烷层转入125mL分液漏斗中，再用10mL正己烷重复提取一次，己烷层并入125mL分液漏斗中。用90ml乙腈分三次提取，合并三次乙腈提取液于500mL分液漏斗中，加入250mL10%氯化钠溶液，用200mL正己烷分两次提取，经装有10g无水流酸钠的漏斗收集于梨形瓶中，40℃下蒸发近干。残留物用5mL正己烷溶解，待过柱用。
（2）油脂类液体样品：称取均匀样品1g(精确至0.1mg)于小烧杯中，加入20mL正己烷充分溶解，转入125mL分液漏斗中，用30mL乙腈洗烧杯后也转入分液漏斗中，其余处理同（1）进行。
（3）不含油脂的固体或半固体样品：称取混匀试样5.00g，置于50mL离心管中，加适量水（使总水量约10mL），加入20mL丙酮+正己烷混合液（2+3），均质2mim，2500r/min离心3min，取上层清液经装有5g无水硫酸钠的漏斗收集于梨形瓶中。再用20mL正己烷提取一次，合并提取液于40℃下蒸发近干（若含色素较多按（1）过柱净化），用正己烷定容至2mL,待分析。
(4) 不含油脂的液体样品（不含啤酒）：称取均匀样品20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL饱和食盐水，再加入30mL正己烷剧烈振摇，静止分层，上清液经装有5g无水硫酸钠的漏斗收集于梨形瓶中，再用30mL正己烷重复提取一次，合并上清液，40℃下蒸发近干（若含色素较多按（1）过柱净化），用正己烷定容至2mL,待分析。
（5）啤酒：称样20g，置于100mL具塞量筒中，加入10mL饱和食盐水，再加入20mL乙腈、20mL正己烷剧烈振摇，静止分层，上清液经装有5g无水硫酸钠的漏斗收集于梨形瓶中，再用20mL 、20mL正己烷重复提取两次，合并上清液，40℃下蒸发近干，用正己烷定容至2mL,待分析。
1.3.2．食品包装材料：称取经粉碎混匀的试样0.2g(精确至0.1mg)于三角瓶中，加入50mL正己烷，超声提取30min，取上清液直接进行分析（视含量作相应的稀释或浓缩）。
1.3.3净化
(1)．层析柱的制备：玻璃层析柱底部放入少许脱脂棉，加入1cm高的无水硫酸钠，然后依次干法装入2g弗罗里硅土（层析用，200℃烘3h后备用），0.5gPSA（硅胶键合氨基吸附剂），上部再加入1cm高的无水硫酸钠。使用前依次用10mL丙酮、10mL正己烷预淋洗。
(2)．净化与浓缩：待淋洗液下降至无水硫酸钠层时，将试样提取液加入，再用5mL正己烷洗梨形瓶，洗液加入层析柱中，待其下降至无水硫酸钠层时，用25mL丙酮+正己烷（2+98）混合液洗脱，将洗脱液收集于合适的容量瓶中，用正己烷定容，待分析。
1.4测定
1.4.1．色谱条件：
色谱柱：SunFire C18 ,15cm×4.6mm×5μm
波长:224nm
柱温度:30℃
进样量:10μL
流速：1.0mL/min
流动相：A-水；B-乙腈 ，梯度配比如表1。
Empower色谱工作站
检测器:PDA检测器
定量方法 ： 取10μL进样，根据保留时间定性，以峰面积计算，以外标法定量。
1.4.3．结果计算
食品及食品包装物中邻苯二甲酸酯类化合物的含量（mg/kg）
式中：x―试样中某种邻苯二甲酸酯的含量（mg/kg）；
v―试样定容体积（mL）；
m―试样质量（g）；
c1--试样中某种邻苯二甲酸酯峰面积对应的标准品组分的浓度（mg/L）；
c0―空白试样中某种邻苯二甲酸酯峰面积对应的标准品组分的浓度（mg/L）
2．实验结果与讨论
2.1 样品前处理：由于食品包装材料及部分样品中成分比较复杂，含有一定量的蛋白、脂肪和纤维等成分，处理不好将直接影响进样，对液相色谱柱损害较大，所以应将样品充分混匀提取后，过净化柱，最后再经高速离心，可较好的去除大分子杂质物质，得到进样溶液。
2.2 波长的选择[3-4]:通过对几种邻苯二甲酸酯标准溶液进行210～400nm扫描,发现在220～240nm之间,吸收峰较强,本实验选择224nm作为方法的固定波长。
2.3标准及样品：在本方法的实验条件下，七种邻苯二甲酸酯类均得到了较好的分离，能够满足实验要求。
2.4 加标回收率：向5份样品中分别加入不同量的邻苯二甲酸二丁酯标准溶液，按本法处理、测定并计算回收率，结果见表2：
2.4 检出限：本方法检出限0.50mg/kg。
3.结论
实验表明，本方法所用乙酸铵流动相浓度低，样品进样量少，对分析柱的损害较小；样品加标回收率在78.00%～114.80%之间；线性系数R>0.9999；检出限为0.50mg/kg；能够满足一般食品等样品中邻苯二甲酸酯类残留量的分析要求。另外本方法具有简便快速、准确灵敏、成本低、可靠性强等优点，应用前景广泛。
参考文献
[1] 修丽华,王陆玲等.高效液相色谱法测定畜、禽肉中土霉素的残留量[J].现代食品科技,2007,Vol.23,No.10
[2] 中华人民共和国国家标准, GB/T18932.5-2002.
[3] 何华, 倪坤仪. 现代色谱分析[M]. 化学工业出版社, 2000, 228-245.
[4] 阎吉昌. 环境分析[M]. 化学工业出版社, 2002, 308.
[5] 陈珠灵, 黄瑜奎, 王桂美, 陈飞.化妆品中邻苯二甲酸酯类环境激素检测方法研究[J] . 环境科学与技术, 2007,Vol30,No.4
[6]佟克兴等食品包装材料中邻苯二甲酸酯的测定.监督与选择[J],2008,64-66.
[7]GB/T5009-2003,食品卫生检验方法[M].中华人民共和国国家标准.
[8]GB/T19681-2005,食品中苏丹红染料的检测方法.中华人民共和国国家标准.
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