G6PD活性水平与地中海贫血相关性分析

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　　【摘要】 目的 探讨分析葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）活性与地中海贫血（地贫）之间的关系。 方法   选取行血红蛋白电泳检测结果为阳性的150例患者作為地贫组， 另选取同期接受血红蛋白电泳检测结果显示正常的150例患者作为对照组。两组均进行血常规、G6PD活性、血红蛋白电泳检测。比较地贫组与对照组 G6PD活性， 对照组不同血常规MCV值的G6PD活性。结果   地贫组患者根据检测结果分为血红蛋白H（HbH）病组（33例）、轻型地贫组（95例）、重型地贫组（22例）。HbH病组、轻型地贫组、重型地贫组的G6PD活性分别为（5207.00±555.75）、（3397.47±686.85）、（5298.60±736.46）， 均高于对照组的（2567.21±615.76）， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。HbH病组与重型地贫组G6PD活性均高于轻型地贫组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）;但HbH病组与重型地贫组G6PD活性比较差异无统计学意义（P>0.05）。对照组患者根据血常规MCV值分为MCV异常组（50例， 血常规MCV值小于正常参考值）和MCV正常组（100例， 血常规MCV值在正常参考值范围内）。MCV异常组患者经地中海贫血基因检测确诊为地中海贫血患者或地中海贫血基因携带者。MCV异常组的G6PD活性（2775.57±584.59）高于MCV正常组的（2119.05±227.20）， 差异有统计学意义（P<0.05）。结论   G6PD活性水平可作为辅助诊断地中海贫血及分型的辅助依据。
　　【关键词】 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶;血红蛋白电泳;地中海贫血
　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.06.043
　　地中海贫血又称珠蛋白生成障碍性贫血， 是一种由基因缺陷导致血红蛋白中至少一种珠蛋白合成缺乏或者不足， 引起的病理状态， 它是一组常染色体不完全显性遗传性疾病。地中海贫血多见于我国长江以南地区， 其中广东、广西、四川为高发区。根据广东地中海贫血流行病学统计， 广东地区地中海贫血的携带率为8.53%， 地中海贫血的携带率为2.54%[1]。临床中， 对地中海贫血患者的筛查判断主要采用血常规检查联合血红蛋白电泳分型方法进行判断， 并以基因检测结果为临床最终判断确诊的标准方法。其中， G6PD是红细胞内葡糖糖代谢三大途径之一磷酸戊糖代谢途径上的酶， 它主要存在于机体红细胞内， 并参与葡萄糖分解代谢反应， 在这一代谢变化过程中会产生一种叫还原型辅酶Ⅱ的物质， 该物质对谷胱甘肽的还原态具有保持作用， 从而起到保护红血球免受氧化物质的威胁的效果。当前， 临床对G6PD检测主要用于蚕豆病和药物性溶血性贫血的诊断， 并且具有较好的作用和效果。但有研究显示[2]， 在临床诊断过程中发现地中海贫血患者G6PD活性明显高于正常人群， 同时由于地中海贫血患者的机体红细胞寿命约为正常细胞的50%， 因此， 其机体红细胞更新速度与正常人群相比明显较快等有着直接的关系。因此， 本文以在本院进行血红蛋白电泳检测结果为阳性的150例患者为研究对象， 对其G6PD活性进行检测分析， 以探讨G6PD活性与地中海贫血的关系。现报告如下。
　　1 资料与方法
　　1. 1 一般资料 收集2015年1月～2018年12月在本院进行血红蛋白电泳检测结果为阳性的150例患者作为地贫组， 年龄2～50岁， 平均年龄（27.9±8.7）岁。排除标准：血红蛋白电泳异常、蚕豆病、血液病、缺铁性贫血及药物溶血者。另选取同期在本院接受血红蛋白电泳检测结果显示正常的150例患者作为对照组， 年龄2～50岁， 平均年龄（28.1±8.7）岁， 均无地中海贫血与G6PD缺陷家族病史。
　　1. 2 方法
　　1. 2. 1 标本的采集及处理 地贫组和对照组研究对象均于接受检测前1晚20：00后禁食并停止服用药物， 于次日凌晨8：00～10：00抽取静脉血4 ml于含分离胶和促凝剂的黄头管及2 ml EDTA-K2抗凝的紫头管， 黄头管静置>30 min， 待血液凝固， 4000 r/min离心10 min， 分离血清进行铁蛋白检测;紫头管充分混匀后， 进行血常规、G6PD、血红蛋白电泳检测。
　　1. 2. 2 仪器与试剂 ①血红蛋白检测：海伦娜spife3000全自动电泳仪及其配套试剂， 方法为琼脂糖凝胶电泳。②血常规检测：希森美康SYSMEX XN-1000全自动血细胞分析仪及其配套试剂。③铁蛋白检测：新产业全自动化学发光仪MAGLUMI 2000 Plus及其相关配套试剂， 用于刷选缺铁性贫血。④G6PD检测：西门子全自动生化分析仪ADVIA 1800， 试剂由北京华宇亿康生物工程技术有限公司提供。
　　1. 3 观察指标及判定标准 比较地贫组与对照组 G6PD活性;对照组不同血常规MCV值的G6PD活性。①HbH病：血红蛋白电泳见HbH区带， HbH在5%～40%;②轻型地中海贫血：HbA2定量>3.5%;③重型地中海贫血：血红蛋白电泳HbF>30%;④G6PD参考范围为1300～3600 U/L;⑤MCV正常参考值为82～100 fl。
　　1. 4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验;计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验;对于符合正态分析的多组资料采用SNK-q检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
　　2 结果
　　2. 1 地贫组与对照组 G6PD活性比较 地贫组患者根据检测结果分为HbH病组（33例）、轻型地贫组（95例）、重型地贫组（22例）。HbH病组、轻型地贫组、重型地贫组的G6PD活性分别为（5207.00±555.75）、（3397.47±686.85）、（5298.60±736.46）， 均高于对照组的（2567.21±615.76）， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。HbH病组与重型地贫组G6PD活性均高于轻型地贫组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）;但HbH病组与重型地贫组G6PD活性比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。 　　2. 2 对照组不同血常规MCV值的G6PD活性比较 对照组患者根据血常规MCV值分为MCV异常组（50例， 血常规MCV值小于正常参考值）和MCV正常组（100例， 血常规MCV值在正常參考值范围内）。MCV异常组患者经地中海贫血基因检测确诊为地中海贫血患者或地中海贫血基因携带者。MCV异常组的G6PD活性（2775.57±584.59）高于MCV正常组的（2119.05±227.20）， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
　　3 讨论
　　地中海贫血是一种遗传性的溶血性贫血性疾病， 地中海贫血患者的红细胞寿命是正常细胞的50%左右， 红细胞更新速度比正常人快[3]， 地中海贫血患者代偿产生较多的新生年轻红细胞。临床中， 对轻型地中海贫血患者进行检查分析显示， 其临床症状以慢性溶血性贫血表现为主， 对其进行血液学检查可显示存在小细胞低色素性贫血， 同时患者的血红蛋白电泳检测显示存在HbA2改变， 其中， 以α地中海贫血病症患者的血红蛋白电泳检测结果降低与β地中海贫血患者的血红蛋白电泳检测结果升高变化为主要特征， 并且在医院的产科门诊患者中， 重型地中海贫血患者多表现为Bart’s水肿胎， 即在患者的妊娠周期达到20周左右时会出现严重缺氧导致的全身水肿以及心脏衰竭导致胎儿娩出前死亡发生等情况存在， 还会导致患者出现妊娠期高血压病症， 对其产生较大的危害影响;而β重型患者的严重贫血情况一般会出现在患者出生后6个月时， 需要通过终生定期输血与排铁维持治疗等， 对患者的生命安全进行维护性救治， 其中， 骨髓移植是进行β重型地中海贫血患者根治治疗的主要方法， 并且多数患儿可能在5岁前出现死亡， 少数继续生存患者的生存质量均表现极差， 对患者本身以及整个家庭所造成的负担影响均十分大。另一方面， 由于该疾病为遗传性疾病， 出现新发突变的几率几乎很低， 为减少该疾病对患者及家庭的不利影响， 对妊娠期孕妇开展有效的产前检查， 对产前检查显示存在重型地中海贫血病症胎儿， 通过终止妊娠方法以避免其危害影响， 从而减少该疾病对患者家庭及社会产生的负担和影响， 是当前临床进行该疾病控制的有效方法。
　　本研究结果显示， HbH病组、轻型地贫组、重型地贫组的G6PD活性分别为（5207.00±555.75）、（3397.47±686.85）、（5298.60±736.46）， 均高于对照组的（2567.21±615.76）， 差异均具有统计学意义（P<0.05）。G6PD是细胞年龄依赖性酶[4]， 年轻的红细胞G6PD的活性高于衰老的红细胞， G6PD活性与体内年轻红细胞增多成正相关关系。其中， 地中海贫血患者的G6PD活性水平与正常的健康人员相比明显增高， 是由于患者机体反应中基因出现点突变或存在较大片段的缺失， 从而造成珠蛋白链合成出现减少或缺失变化， 造成机体红细胞中的α与链比例分布不平衡， 出现红细胞形态异常且容易发生溶血等， 故地中海贫血患者G6PD的活性高于健康人群。
　　国内有些作者认为， 重型地中海贫血的G6PD活性高于HbH病[5]。本研究发现， 但HbH病组与重型地贫组G6PD活性比较差异无统计学意义（P>0.05）。与陈炎添等[6]的报道较一致。可能是由于本研究中收集的HbH病患者中存在HbH-CS和缺失型HbH相比， HbH-CS的G6PD活性水平较缺失型HbH高[7]。HbH病组与重型地贫组G6PD活性均高于轻型地贫组， 差异均具有统计学意义（P<0.05）， 是由于重型地中海贫血与HbH病溶血性贫血加重， 导致机体代偿性产生年轻的红细胞多于轻型地中海贫血。
　　陈冬等[8]报道， 轻型β地中海贫血、重型β地中海贫血、HBH病的G6PD活性分别为对照组2～3倍。明显高于本次研究观察到的G6PD活性， 且三型地中海贫血的G6PD活性升高幅度趋势基本一致。导致该现象的原因不明， 可能是由于抽样方法、检测方法的差异， 或是地域不同， 人群的基因分布不同， 需要进一步的研究才能明确。
　　由于血红蛋白电泳方法学在地中海贫血检测中存在局限性， 对静止型地中海贫血、标准型地中海贫血无法检出， 检测中血红蛋白电泳多表现为正常或者HbA2降低， 而当地中海贫血复合地中海贫血患者HbA2水平可在正常范围内， 因此单从血红蛋白电泳检测结果上看， 容易导致地中海贫血复合地中海贫血患者漏诊[7]。表2中对50例血红蛋白电泳正常而血常规异常人群进行地中海贫血基因检测， 确诊为地中海贫血患者， 表明基因检测是标准型地中海贫血或地中海贫血复合地中海贫血诊断的有效方法。结果显示血常规异常组G6PD活性高于血常规正常组， 说明对于血红蛋白电泳不能检测出的地中海贫血类型， 可通过血常规和G6PD活性联合检测， 对地中海贫血患者诊断准确率有提升作用。血红蛋白电泳联合血常规和G6PD活性断方法对缺乏地中海贫血基因检测的基层医院而言， 对地中海贫血患者进行初步筛查具有有效性与可行性。由于静止型地中海贫血缓和平常无症状， 且血象无特殊表现， 因此本文没有对静止型地中海贫血G6PD的活性与正常人G6PD的活性进行对比研究。
　　综上所述， G6PD 活性的升高可以提示地中海贫血， G6PD可作为地中海贫血的辅助诊断指标， 对地中海贫血高发区人群进行该指标检测， 可以有效的预防地中海贫血的发生， 对于优生优育有重要的意义。
　　参考文献
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