HCG日血清雌、孕激素水平对内膜整合素αVβ3和LIF表达及冻融胚胎移植结局的影响
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【摘要】 目的 探讨人绒毛膜促性腺激素（HCG）日血清雌、孕激素水平对内膜整合素αVβ3、白血病抑制因子（LIF）表达及冻融胚胎移植（FET）结局的影响。方法 122例实施128个周期体外受精（IVF）助孕的患者， 按HCG日血清雌二醇（E2）及孕酮（P）水平分为A组（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33个周期， 31例）、B组（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36个周期， 33例）、C组（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 28个周期， 28例）、D组（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31个周期， 30例）。所有患者均进行超排卵方案及冻融胚胎移植。取卵后7 d左右吸取内膜组织， 比较四组HCG日血清E2、P、LH水平及冻融胚胎移植临床结局、种植窗期内膜整合素αVβ3和LIF表达情况。结果 B组HCG日血清E2为（7528.2±239.0）pg/ml， D组HCG日血清E2为（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A组的（1739.1±162.9）pg/ml， 差异有统计学意义（P<0.05）;C组HCG日血清P为（1.4±0.6）ng/ml， D组HCG日血清P为（1.2±0.4）ng/ml， 均高A组的（0.6±0.2）ng/ml， 差异有统计学意义（P<0.05）。结论 HCG日血清雌、孕激素水平不影响内膜整合素αVβ3和LIF表达及冻融胚胎移植周期的结局。
【关键词】 雌激素;孕激素;整合素αVβ3;白血病抑制因子
DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.035
人类辅助生殖技术（assisted reproductive technology， ART）发展迅速， 体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer， IVF-ET）获得胚胎的数量及质量也不断提高， 但对于母体与胚胎间的联系了解不多。IVF助孕中， 激素生理平衡的改变会使内膜相关因子表达产生变化， 这种变化可能影响冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer， FET）周期结局。整合素是存在于细胞表面的一种跨膜糖蛋白， 在内膜中会发生周期性改变。研究发现[1， 2]， 整合素αVβ3表达于黄体期， 持续至妊娠期， 与种植窗一致， 是内膜容受性标志物之一。白血病抑制因子（leuakemia inhibitory factor， LIF）是一种多功能糖蛋白， 黄体中期表达最高， 即种植窗期表达最高， 增生期极低水平表达， 是内膜容受性标记物。本研究探讨HCG日血清雌、孕激素水平对种植窗期内膜整合素αVβ3和LIF表达及冻融胚胎移植结局的影响。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取2017年1～12月在本中心实施128个周期IVF助孕的122例患者， 依据Wu等[3]的研究， ROC曲线分析HCG日血清E2、P水平对IVF结局的影响， 确定高P界值为1.05 ng/ml， 高E2界值为5210 ng/ml。根据HCG日血清E2、P水平分为A组（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33个周期， 31例）、B组（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36个周期， 33例）、C组（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 28个周期， 28例）、D组（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31个周期， 30例）。纳入标准：①年龄<40岁;②卵巢储备功能正常;③获得>4个卵子;④男方精液常规检查正常。四组患者一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。见表1。
1. 2 方法
1. 2. 1 超排卵方案 采用黄体期长方案， 长效促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）降调节， 14～20 d后给予卵泡刺激素（FSH）超排卵治疗， 卵泡最大直径≥18 mm时注射HCG， 36～38 h后超声指导下取卵。受精后18～20 h观察受精情况， 胚胎培养3 d， 冷冻所有胚胎。
1. 2. 2 冻融胚胎移植 月经第2～4天， 阴超记录子宫、内膜、卵巢及卵泡情况， 若未见优势卵泡且内膜≤5 mm予戊酸雌二醇片（商品名：补佳乐）4 mg， b.i.d.， 12～14 d后抽血查促黄体生成素（LH）、E2及P， 如有卵泡发育或内膜<8 mm则取消周期， 如内膜厚度≥8 mm， 当日给予黄体酮60 mg肌内注射， 注射第4天行冻融胚胎移植。移植后第12～14天测定血清HCG。移植后第28～30天阴超检查见宫腔内有孕囊者为临床妊娠。
1. 3 观察指标 比较四组HCG日血清E2、P、LH水平及冻融胚胎移植临床结局、种植窗期内膜整合素αVβ3和LIF表达情况。HCG日当天抽取空腹肘静脉血3 ml， 分血清， -20℃保存待测， 检测E2、P及LH水平。在卵子获取后的7～8 d吸取子宫内膜组织。获取子宫内膜前用生理盐水冲洗陰道、宫颈外口， 用子宫内膜取样器Pipelle管于子宫体中上段吸取少许内膜组织， 检测LIF、整合素αVβ3。冻融胚胎移植临床结局包括可移植胚胎数、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、流产率。
1. 4 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验;计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 四组患者HCG日血清E2、P及LH水平比较 B组HCG日血清E2为（7528.2±239.0）pg/ml， D组HCG日血清E2为（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A组的（1739.1±162.9）pg/ml， 差异有统计学意义（P<0.05）;C组HCG日血清P为（1.4±0.6）ng/ml， D组HCG日血清P为（1.2±0.4）ng/ml， 均高A组的（0.6±0.2）ng/ml， 差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。 2. 2 四组患者冻融胚胎移植临床结局比较 四组可移植胚胎数、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、流产率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。
2. 3 四组种植窗期内膜整合素αVβ3和LIF表达的比较 四组内膜整合素αVβ3和LIF表达情况比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。见表4。
3 讨论
子宫内膜在组织学及分子学上周期性改变， 内膜的容受性也发生改变[4]。在种植窗期， 雌、孕激素调节了子宫内膜中因子的表达， 这些内膜因子可能作为胚胎着床的介质影响胚胎着床。大量的研究发现[5-7]， 子宫内膜种植窗期一些因子的表达都可以反映内膜容受性。
3. 1 整合素αVβ3和LIF 在内膜中的表达 子宫内膜上皮处于接受状态时， 内膜上皮上的粘附分子表达， 从而促使胚胎与之发生附着反应。整合素作为粘附因子的一员， 是细胞膜上以α、β异二聚体形式存在的糖蛋白分子， 是多种细胞外基质分子的受体， 其介导细胞间的信号传导， 在内膜的表达中存在多种亚型， 只有αVβ3开始表达于月经的黄体中期， 维持到妊娠期， 是内膜植入窗启动的标示[8]。
LIF可以调节胚胎滋养层细胞功能和血管形成， 多种动物的内膜上发现有LIF-mRNA和其蛋白的表达。在增殖期， LIF-mRNA和蛋白很难测到， 但在分泌期， 两者的水平明显升高， 而此时段是胚胎种植时间， 因此， LIF与内膜的容受性有关[9， 10]。Stewart等[11]通过研究发现， 老鼠的LIF基因被敲除后， 卵子受精后可以形成囊胚， 但不能着床， 而在该小鼠子宫腔内补充LIF后， 囊胚的种植率有明显提高， 这表明LIF可以作为内膜容受性的标志物。
3. 2 E2、P水平对整合素αVβ3和LIF表达及冻融胚胎移植结局的影响 超排卵中孕激素升高会使孕激素受体（PR）的表达下降， 同时会促进内膜的整合素αVβ3表达提早、增强。在一项对黄素化卵泡的研究中发现， 正常排卵组的P水平更高， 整合素αVβ3的表达增强， 表明植入窗推迟及内膜容受性下降， 胚胎植入率下降[12]。林娜等[13]比较高雌孕激素水平对种植期整合素αVβ3表达的影响， 结果显示高E2组、高P组、高E2并高P组整合素αVβ3与对照组比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。本研究中对照组为低E2并低P组， 结果显示四个组中， 内膜整合素αvβ3的表达也没有差异， 这可能与P水平设定的界值不同有关， 使得研究的结果不一致。
相关研究[5]显示， 种植窗期血清P水平在妊娠组高于非妊娠组， LIF的表达也在妊娠组较高， 且LIF的表达与血清P水平相关， 提示种植窗内膜LIF的表達受P调节， 而E2的水平则与LIF的表达没有相关性。也有研究[6]表明， 切除卵巢后， 添加外源性雌激素并不能诱导LIF蛋白的表达， 但是孕激素则可诱导LIF的表达增加。E2上升可使植入期时间缩短， 排卵后E2的变化也使LIF发生变化， 两者关系密切。但是， 在本研究中， 无论是P升高组， 还是E2升高组， LIF的表达都没有增加， 所以LIF的表达除了与P、E2的水平相关外， 还可能与E2/P的比例有关， 两者维持在适当比例， LIF的表达才可能增强。
本研究结果显示， 四组可移植胚胎数、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、流产率比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。四组膜整合素αVβ3和LIF表达情况比较， 差异无统计学意义（P>0.05）。
综上所述， HCG日血清雌、孕激素水平不影响内膜整合素αVβ3和LIF的表达及冻融胚胎移植周期的结局。雌孕激素对子宫内膜容受性的影响是多方面的， 而子宫内膜容受性的标志物也不仅仅只有整合素αVβ3和LIF， 本研究只观察αVβ3和LIF有其局限性， 需要临床扩大样本量来进一步研究， 且需要用更多的具有代表性的内膜容受性标志物来衡量， 才能有更准确的结果。
参考文献
[1] Noyes RW， Hertig AT， Rock J， et al. Dating the endometrial biopsy. Am J Obstet Gynecol， 1975， 122（2）：262-263.
[2] Pafilis J， Batistatou A， Iliopoulou A， et al. Expression of adhesion molecules during normal pregnancy. Cell Tissue Res， 2007， 329（1）：1-11.
[3] Wu Z， Li R， Ma Y， et al. Effect of HCG-day serum progesterone and oestradiol concentrations on pregnancy outcomes in GnRH agonist cycles. Reproductive biomedicine online， 2012， 24（5）：511-520.
[4] 金丽， 潘洁雪， 丁国莲， 等. 辅助生殖周期中超促排卵对子宫内膜容受性的影响. 中国实用妇科与产科杂志， 2015， 31（1）：31-35.
[5] 董方莉， 谭丽， 郑英. 植入窗期血清孕激素水平及子宫内膜白血病抑制因子表达对体外受精﹣胚胎移植结局的预测价值. 生殖医学杂志， 2007（16）：20-23.
[6] 霍立军， 杨增明. 孕酮调节的胚胎着床相关分子及其作用. 中华妇产科杂志， 2002， 37（8）：505-507.
[7] Haines BP， Voyle RBJ， Rathjen PD. Intracellular and extracellular leukemiainhibitory factor proteins have different cellular activities thar are mediated by distinct protein motifs. Mol Biol Cell， 2000（11）：1369-1383. [8] Lessey BA. Adhesion molecules and implantation. J Reprod Immunol， 2002， 55（1-2）：101-112.
[9] Charnock-Jones DS， Sharkey AM， Fenwick P， et al. Leukaemia inhibitory factor mRNA concentration peaks in human endometrium at the time of implantation and the blastocyst contains mRNA for the receptor at this time. J Reprod Fertil， 1994， 101（2）：421-426.
[10] Cullinan EB， Abbondanzo SJ， Anderson PS， et al. Leukemia inhibitory factor （LIF） and LIF receptor expression in human endometrium suggests a potential autocrine/paracrine function in regulating embryo implantation. Proc Natl Acad Sci U S A， 1996， 93（7）：3115-3120.
[11] Stewart CL， Kaspar P， Brunet LJ， et al. Blastocyst implantation depends on maternal expression of leukaemia inhibitory factor. Nature， 1992， 3359（6390）：76-79.
[12] Xu W， Yang J， Jiang L， et al. Impact of luteinized unruptured follicles on endometrial receptivity. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci， 2011（31）：181-184.
[13] 林娜， 馬艳萍， 武泽， 等. IVF周期中高雌、孕激素水平对着床期子宫整合素αVβ3表达及子宫内膜容受性的影响. 昆明医科大学学报， 2015， 3（4）：48-52.
[收稿日期：2020-02-17]
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