高效液相色谱法测定芪胶升白胶囊中苦参碱的含量

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　　摘要：目的：建立高效液相色谱法测定芪胶升白胶囊中苦参碱的含量。方法：采用ZORBAX Extend C18分析柱（4.6mm×250mm,5μm）；甲醇-乙腈-10mmol/L乙酸铵溶液（35∶35∶30；pH=8.5）为流动相；检测波长220nm；流速1mL・min-1；柱温为25℃。结果：苦参碱在0.0468～4.2287μg内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999）；回收率为98.7%,RSD=1.21。结论：方法准确、回收率和重现性好，可用于芪胶升白胶囊的质量控制。
　　关键词：芪胶升白胶囊；苦参碱；高效液相色谱；含量测定
　　中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：1673-7717(2012)03-0646-02
　　Content Determination of Matrine in Qijiao Shengbai Capsule by HPLC
　　CHEN Hong
　　(Red Cross Hospital,Hangzhou 310003,Zhejiang,China)
　　Abstract:Objective：The research aimed to establish a new HPLC method for determination of matrine Qijiao Shengbai Capsule.Methods:The content of matrine was determined by ZORBAX Extend C18 column(4.6mm×250mm,5μm）,the mobile phase consist of methanol-acetonitrile-10mmol/Lammonium acetate solution ［35∶35∶30(v/v);pH8.5］, the detection wavelength was 220 nm, the flow rate was at 1ml/min, the column temperature was 25℃.Results:The linear ranges were 0.0468~4.2287μg,with the regression coefficient of 0.9999,the average recovery of matrine in samples were 98.7%(RSD=1.21%).Conclusion：This method has satisfactory recoveries and good repeatability.And it can be used in the quality control of Qijiao Shengbai Capsule.
　　Key words:Qijiao Shengbai Capsule；matrine；HPLC；content determination
　　芪胶升白胶囊（Qijiao Shengbai Capsule）为一款苗医、中医互补的民族药。功能主治：布笨汗吴象，怡渥雄访达：笨象窝样木，汀休水生凯罗，娘奴科，罗欧良，局忙罗饮良，颜孟柯。即补血益气。用于气血亏损证所引起的头昏眼花、气短乏力、自汗盗汗，以及白细胞减少症见上述症候者。方由大枣、阿胶、血人参、淫羊藿、苦参、黄芪、当归组成。其中苦参的作用颇具代表性，现代药理应用研究表明[1]，苦参含有的苦参碱、氧化苦参碱成分具有抗炎、抗肿瘤及白细胞降低的防治等多种生物活性。目前针对芪胶升白胶囊的内在质量控制，主要围绕淫羊藿苷成分进行定性、定量一类的检查[2] 。本实验参照2010版《中华人民共和国药典》一部苦参含量测定（附录VID）项下操作主线，根据复方制剂的特点，选择苦参碱作为标的物，建立了高效液相色谱法测定该制剂中苦参碱含量的方法。
　　1仪器与试药
　　1.1仪器Agilent 1100系列液相色谱仪、四元泵、在线真空脱气、DAD检测器、化学工作站、1200型自动进样器。
　　1.2试药苦参碱（Matrine）对照品（Xi`an Guanyu Bio-technique Co Let;GY20100615,98%）；芪胶升白胶囊（Qijiao Shengbai Capsule）样品（贵阳德昌祥药业有限公司）；甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），乙酸铵（分析纯），氯仿（分析纯），氨水（分析纯），水（双蒸水）。
　　[WT5”FZ〗中华中医药学刊2实验方法与结果
　　2.1色谱条件美国ZORBAX Extend C18分析柱（4.6mm×250mm,5μm）为固定相；甲醇-乙腈-10mmol/L乙酸铵溶液（35∶35∶30；pH=8.5）为流动相；检测波长220nm；流速1mL・min-1；柱温为室温。柱效以苦参碱计，理论塔板数不应低于2000。结果被测组分可在5min内出完，三元等度洗脱全程为0～14min。记录的色谱图按保留时间结果见图1~2。
　　图1对照品色谱图图2样品色谱图2.2对照品溶液的制备精密称取苦参碱对照品适量，用甲醇溶解，制成每1mL含苦参碱0.5292mg的溶液，作为对照品溶液。
　　2.3供试品溶液的制备取芪胶升白胶囊10粒，去囊，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨2mL湿润，再加三氯甲烷30mL，超声处理20min，滤过，残渣三氯甲烷洗涤4次，每次5mL，滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
　　2.4测定方法取对照品溶液及供试品溶液各3μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液色谱图中苦参碱的峰面积（3次平均）外标法计算苦参碱的含量（%，W/W）。
　　2.5线性关系取对照品溶液分别进样0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μL，记录峰面积。以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积(A)为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。苦参碱回归方程为Y=1264X+12.50，r=0.9999，线性范围0.0468～4.2287μg。
　　2.6精密度试验对同一供试品溶液与上述色谱条件下连续进样6次，苦参碱峰面积的RSD=1.05%，表明精密度较好。
　　2.7稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、3、6、12、24h进样，记录峰面积，结果表明，供试品溶液在24h内基本稳定，苦参碱峰面积的RSD=0.86%。
　　2.8重现性试验精密称取同一批次芪胶升白胶囊粉末按2.3项下提取制备5份供试溶液，照2.1、2.4项下条件依法测定，记录峰面积，结果苦参碱峰面积的RSD=1.32%，表明重现性较好。
　　2.9回收率测定取已知含量的芪胶升白胶囊粉末10份，每份1g，精密称定，分别添加0.5292mg/ml苦参碱对照品溶液，按2.3项下制备，照2.1、2.4项下条件依法测定,记录峰面积并计算回收率，苦参碱平均回收率为98.7%，RSD=1.21。结果见表1。
　　表1加样回收率实验结果
　　被测组分样品含量
　　（mg/mL）加标量
　　(mg/mL)加标测定值
　　（mg/mL）回收率
　　（%）0.14990.52920.669898.60.15300.52920.674998.9苦参碱0.15020.52920.666098.00.14850.52920.675199.60.13880.52920.6681100.00.14680.52920.670299.10.15570.52920.668597.60.16000.52920.669297.10.13200.52920.660099.80.15510.52920.672898.32.10样品测定取6批样品，按2.3项下提取制备，照2.1、2.4项下条件依法测定，重复测定3次，结果芪胶升白胶囊苦参中苦参碱的平均含量为0.75% RSD=1.45%。
　　3讨论
　　3.1洗脱溶剂系统的选择本实验为RP-HPLC三元等度洗脱法。选择甲醇-乙腈-10mmol/L乙酸铵溶液作为洗脱溶剂，是基于苦参碱对三元等度洗脱系统的适应性的考量。单一体系测试表明：乙腈峰形好，甲醇分离效果佳，辅以乙酸铵缓冲，可促使各组分的分配系数较大，达到基线分离的效果。方法简单、易行，设备要求相较梯度洗脱为低，早期一类设备都可用于检测；且抗干扰性强，具有专属性特点。
　　3.2被测组分选择多数研究表明[3]苦参中苦参碱、氧化苦参碱含量在药材单用与在复方中明显不同，单用以氧化苦参碱为主要成分，复方则以苦参碱为主要成分。原因在于还原性物质的存在和加热，苦参碱与氧化苦参碱存在相互转化，因此在系统适应性考察过程中，以测试苦参碱为重点，结果满意，至于芪胶升白胶囊中是否含有氧化苦参碱，尚待进一步实验研究。
　　3.3样品评估芪胶升白胶囊目前临床应用日渐广泛，其地方标准也上升至部颁标准。评估芪胶升白胶囊的质量优劣，最有效的方法就是测定复方中各组分的成分含量，即综合考量，在规定的范围内，高则优、低则劣。本次应用于实验检测的芪胶升白胶囊苦参碱含量为0.75%，优于苦参单用生物碱总量占比，符合复方制剂标准。
　　参考文献
　　［1］刘梅，刘雪英，程建峰.苦参碱的药理研究进展[J].中国中药杂志，2003,28（9）：801.
　　[2]陈志斌，黄艳萍.HPLC法测定芪胶升白胶囊中淫羊藿苷的含量[J].中医药导报，2005，11（12）：62.
　　[3]贾敏鸽，孙文基.苦参及复方中苦参碱与氧化苦参碱的转化研究［J］.药物分析杂志，2003,23（2）：90

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