血液中乙醇含量测定-异戊醇内标标准曲线法
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摘 要：目的：建立用异戊醇作为内标的标准曲线定量法来测定血液中的乙醇含量，并与方法GA/T 1073-2013进行比较。方法：用顶空进样器-气相色谱联用仪，采用内标工作曲线法的定量方式分析血液中乙醇含量[1-2]。结果：用本方法测得的乙醇加标回收率为99.4～101.9%，相对标准偏差在1%以内，一元性回归方程式的相关系数r>0.999。结论：用该法分析血液中的乙醇含量准确度和精密度均能满足要求，内标物的适用性更广泛。
关键词：乙醇;血液;异戊醇;气相色谱;内标-标准曲线
中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2020）01-0210-02
血液中的乙醇含量测定目前现有的方法是GA/T 1073- 2013，采用的内标物为叔丁醇，但是笔者在实际运用中发现：叔丁醇的熔点为25.7℃，冬天的时候，叔丁醇是固体状态，配制内标液的时候需要加热等候很长时间，给称量或移取带来不便。因此笔者想要寻找熔点较低的化合物来作为内标，根据标准GA/T 1073-2013，其不但可以测试乙醇含量，还用于测试甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇和正丁醇，因此内标物的选择需要避开以上化合物，经过寻找，笔者找到了异戊醇，其熔点为-117℃，溶解性：微溶于水，与乙醇混溶，因此笔者认为异戊醇比较适合作为内标物。
1 材料与方法
1.1 仪器
Aglient气相色谱7890B、Aglient顶空进样器7697A、Eppendorf移液器（20-200μL和100-1000μL）、顶空进样瓶（10mL，配有铝帽及密封垫）。
1.2 试剂
乙醇系列标准品（Cerilliant进口标准品）、异戊醇（国药试剂>98.5%）、蒸馏水（屈臣氏）、血液样品。
1.3 试剂配制
1.3.1 内标物溶液
用移液器移取25.1μL的異戊醇（密度0.81g/mL，纯度98.5%）于一预先装有适量蒸馏水的500mL容量瓶中，再用蒸馏水定容至刻度，摇匀，得浓度为4mg/100mL的异戊醇内标工作液。
1.3.2 乙醇标准品
市售，浓度为10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL。
1.4 实验条件
1.4.1 顶空进样器条件（如表1）
1.4.2 气相色谱条件（如表2）
1.5 实验方法
1.5.1 标准曲线制作
用移液器分别移取500μL的异戊醇内标工作液于7个10mL顶空瓶中，再向这7个顶空瓶中分别移取100μL的10mg/100mL、20mg/100mL、50mg/100mL、80mg/100mL、100mg/100mL、200mg/100mL、300mg/100mL乙醇标准品，用硅胶垫和铝帽密封，混匀。置于顶空进样器中，按1.4实验条件进样分析。以待测组分（乙醇）和内标物（异戊醇）的峰面积之比作为纵坐标，以待测组分（乙醇）和内标物（异戊醇）的含量之比作为横坐标，制作内标工作曲线。
1.5.2 样品测定
用移液器分别移取100μL的全血样品和500μL的异戊醇内标工作液于一个10mL顶空瓶中，用硅胶垫和铝帽密封，混匀，置于顶空进样器中，按1.4实验条件进样分析。跟据待测样品中乙醇和异戊醇的峰面积之比，即可在工作曲线上查出待测样品中乙醇的浓度，进而得出待测样品中乙醇的含量。
2 结果与讨论
2.1 方法的可行性
从图1可知，乙醇的出峰时间为1.394min，异戊醇的出峰时间为5.112min，实验条件能达到分离效果，实验方法可行。
2.2 内标工作曲线的建立
乙醇/异戊醇峰面积之比-乙醇/异戊醇含量之比对照表见表3;内标工作曲线见图2。
2.3 加标回收
向空白血液中加入适量乙醇，分别制得乙醇含量为50mg/100mL和80mg/100mL的血液样品，用此方法测其乙醇含量，结果如表4。
2.4 精密度
随机抽取一血液样品，按此方法重复分析6次，得出6个乙醇含量结果，计算相对标准偏差如表5。
3 结语
应用异戊醇作为内标测定血液中乙醇含量，加标回收率为99.4～101.9%，相对标准偏差为0.78%，满足测试要求，异戊醇代替叔丁醇作为内标的可操作性更强，特别是当室温比较低时，异戊醇保持液体状态，方便了检测人员的操作。
参考文献
[1] 陈君，彭峰.气相色谱法直接测定血液中乙醇的含量[J].检验医学与临床，2010，7（5）：418-419.
[2] 代娟，陈曼，赖翼，等.直接进样毛细管气相色谱法测定血液中乙醇含量的研究[J].中国卫生检验杂志，2010，20（2）：283-284.
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