南昌市围生期孕妇B族链球菌感染情况及耐药分析

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　　摘要：目的  分析南昌市圍生期孕妇B族链球（GBS）的菌感染情况及耐药性。方法  选取2018年9月～2019年9月江西省妇幼保健院产检的800例围生期孕妇为研究对象，采集肛周及阴道分泌物进行GBS检测，统计其检出率;应用K-B纸片扩散法与D试验检测GBS阳性分离菌株的药物敏感性，分析耐药表型;应用PCR法检测耐药菌株的耐药基因，分析耐药表型与耐药基因情况。结果  800例孕妇共检出GBS阳性43例，检出率为5.38%（43/800）;GBS对万古霉素、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、青霉素、头孢曲松及左氧氟沙星的敏感率较高，分别占100.00%、100.00%、100.00%、95.34%、95.34%、93.02%;对四环素、红霉素、克林霉素和氯霉素敏感率低，分别占23.26%、25.58%、41.86%、65.12%。D试验中，耐药表型以cMLS表型为主，占48.84%（21/43），其次为M型、S型、L型，且未检出iMLS型;耐药基因以erm为主，其中ermB 18株，ermTR 8株，其次为mef和linB。结论  围生期孕妇GBS检出率较高，临床应重视围生期孕妇GBS感染的筛查。GBS分离菌株对红霉素、克林霉素的敏感性较低，对万古霉素、头孢哌酮/舒巴坦的敏感性相对较高。临床应根据药敏实验结果及D试验结果，合理选用抗菌药物，提高治疗的有效性和安全性，有效改善孕妇妊娠结局。
　　关键词：围生期孕妇;B族链球菌;耐药表型;耐药基因
　　Abstract：Objective  To analyze the bacterial infection and drug resistance analysis of pregnant women with group B streptococcus （GBS） in perinatal period in Nanchang.Methods  From September 2018 to September 2019， 800 perinatal pregnant women were examined in the Jiangxi Maternal and Child Health Hospital.The perianal and vaginal secretions were collected for GBS testing， and the detection rate was counted. K-B paper was used for diffusion method D test were used to detect the drug sensitivity of GBS-positive isolates and analyze the drug-resistant phenotype; PCR method was used to detect the drug-resistant genes of drug-resistant strains， and the drug-resistant phenotype and drug-resistant genes were analyzed.Results  A total of 43 pregnant women were positive for GBS in 800 cases， the detection rate was 5.38% （43/800）; GBS was sensitive to vancomycin， cefoperazone/ sulbactam， cefepime， penicillin， ceftriaxone and levofloxacin The rate is higher， accounting for 100.00%， 100.00%， 100.00%， 95.34%， 95.34%， 93.02% respectively; the sensitivity to tetracycline， erythromycin， clindamycin and chloramphenicol is low， accounting for 23.26%， 25.58%， 41.86%， 65.12%. In the D test， the resistance phenotype was mainly cMLS phenotype， accounting for 48.84% （21/43）， followed by M type， S type， L type， and iMLS type was not detected; drug resistance genes were mainly erm among them， 18 ermB strains and 8 ermTR strains， followed by mef and linB.Conclusion  The detection rate of GBS in perinatal pregnant women is relatively high， and clinical attention should be paid to the screening of GBS infection in perinatal pregnant women. GBS isolates have low sensitivity to erythromycin and clindamycin， and relatively good sensitivity to vancomycin and cefoperazone/ sulbactam. According to the results of the drug sensitivity test and the D test， the clinical selection of rational antibacterial drugs should improve the effectiveness and safety of treatment and effectively improve the pregnancy outcome of pregnant women. 　　B族链球菌（group B streptococcus，GBS）也称无乳链球菌，常定植于人类下消化道和生殖道等部位[1]，其是一种条件致病菌，当机体内坏境发生紊乱时，可导致感染进而引起多种疾病[2]，且常通过羊水、产道传播给新生儿，导致新生儿诱发肺炎、败血症、脑膜炎等，严重威胁母婴生命安全[3]。因此，临床应重视对围生期孕妇进行GBS感染的检测与治疗，以改善分娩结局，确保母婴安全[4]。本研究结合2018年9月～2019年9月江西省妇幼保健院产检的800例围生期孕妇的GBS检测结果，分析围生期孕妇GBS耐药表型与相关耐药基因的关系，现报道如下。
　　1资料与方法
　　1.1一般资料  选取2018年9月～2019年9月江西省妇幼保健院产检的800例围生期孕妇为研究对象，本研究经医院伦理委员会审批通过，研究对象知情同意并签署知情同意书。纳入标准：①年龄21～37岁;②经末次月经、B超检查等证实为宫内妊娠;③单活胎;④妊娠期≥35周;排除标准：①伴有严重心、肝、肾、脑、呼吸、血液系统等严重原发性疾病;②合并感染性疾病;③宫内环境异常;④胎儿发育异常;⑤近1个月内使用抗菌药物治疗;⑥伴有精神疾病者。孕妇年龄21～37岁，平均年龄（28.11±2.98）岁;妊娠期35～40周，平均孕周（37.32±0.92）周;初产妇453例，经产妇347例。
　　1.2方法
　　1.2.1取材方法  参照美国疾病控制与预防中心（CDC）推荐的方法[5]：由临床医生擦去外阴分泌物，用一支无菌棉拭子插入阴道内1/3处，旋转一周采集阴道分泌物;再取另一支无菌棉拭子插入肛门括约肌上2～3 cm处，旋转一周采集直肠分泌物。采集后将两支无菌棉拭子置于无菌管中并送检。运用链球菌B族快速检测卡对标本进行检测。
　　1.2.2药敏试验  所有菌株均行细菌培养、CAMP试验以及触酶试验予以鉴定。应用K-B纸片扩散法与D试验检测GBS阳性分离菌株对青霉素、头孢吡肟、头孢曲松、左氧氟沙星、万古霉素、头孢哌酮/舒巴坦、红霉素、氯霉素、四环素、克林霉素的药物敏感性。D试验：于涂布菌液的M-H平板上贴好红霉素、克林霉素药敏纸片，两纸片边距15 mm，35℃下孵育24 h，操作步骤严格按照2013美国临床及实验室标准协会说明进行[6]。
　　1.2.3耐药基因检测  应用PCR法检测。由上海生工生物工程有限公司合成引物，以配制的B族链球菌菌液为模板，添加PCR反应液，提取DNA;PCR反应总体系是20 μl，包含10×PCR Mix 10 μl，DNA模板1 μl，上下游引物均为0.5 μl，加入ddH2O 20 μl，进行30个循环，目的基因PCR扩增引物序列及扩增条件为：①ermB基因：引物ermB-F，序列GAAAAGGTACTCAACCAAATA，退火温度57℃;引物ermB-R，序列AGTAACGGTACTTAAATTGTTTAC，退火温度57 ℃;产物大小610 bp;②ermTR基因：引物ermTR-F，序列GAAGTTTAGCTTTCCTAA，退火温度57 ℃;引物ermTR-R，序列GCTTCAGCACCTGTCTTAATGAT，退火温度57 ℃;产物大小388 bp;③linB基因：引物linB-F，序列CCTACCTATTGTTTGTGGAA，退火温度57 ℃;引物linB-R，序列ATAACGTTACTCTCCTATTC，退火温度57 ℃;产物大小920 bp;④mef基因：引物mef-F，序列AGTATCATTAATCACTAGTGC，退火温度50℃;引物mef-R，序列TTCTTCTGGTACTAAAAGTGG，退火温度50 ℃;产物大小920 bp。扩增产物的测序与分析：取5 μl PCR扩增产物于1%琼脂糖凝胶上（含1×TAE与EB），电泳为120 V/cm，于凝胶成像仪下观察、拍照，选择部分阳性PCR扩增产物进行雙向测序，结果在Genebank数据库中进行同源性比对，>98%视为GBS具有目标基因。
　　1.3观察指标  分析GBS检出率、GBS阳性分离菌株的药物敏感性及耐药表型与耐药基因的相关性。GBS阳性：细菌培养出GBS，视为带菌者;细菌培养阴性、PCR检测阳性，则重新采集孕妇肛周分泌物和阴道下1/3分泌物再次进行细菌培养与PCR检测，有一项检测结果为阳性则视为带菌者;细菌培养阳性、PCR检测阳性，视为GBS阳性[7]。
　　1.4统计学方法  采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析。计量资料以（x±s）进行描述，计数资料以[n（%）]进行描述。
　　2结果
　　2.1 GBS检出率  800例孕妇中共检出GBS阳性43例，检出率为5.38%（43/800）。
　　2.2药物敏感性分析  43株阳性分离菌株药敏试验显示，GBS对万古霉素、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、青霉素、头孢曲松及左氧氟沙星的敏感率高，对四环素、红霉素、克林霉素和氯霉素敏感率低，见表1。
　　2.3耐药表型与耐药基因的关系  耐药表型以cMLS表型为主，其次为M型、S型、L型，且未检出iMLS型。耐药基因以erm为主，其中ermB 18株，ermTR 8株，其次为mef和linB;同时表达ermB和ermTR基因的GBS菌有7株，同时表达ermB、ermTR和mef或者ermB、ermTR和linB基因的有4株，见表2。
　　3讨论
　　GBS属于一种条件致病菌，当妊娠期机体免疫功能下降和内坏境紊乱时，可发生上行性感染，进而引起多种疾病[8]。有研究表明[9]，国内围生期孕妇GBS感染率为5%～30%。本研究的800例围生期孕妇中，共检测出GBS阳性43例，检出率为5.38%，低于东莞的9.10%[10]，但高于西安的1.71%[11]，说明围生期孕妇GBS感染率存在地区差异。有研究表明[12]，围生期孕妇生殖道GBS感染会引起早产、胎膜早破、产褥感染等疾病，且有40%～70%几率经产时垂直传播或产后水平传播感染新生儿，严重影响母婴健康，因此加强对围生期孕妇的GBS检测尤为重要。 　　本研究对800株GBS菌株监测了10种抗菌药物的药敏试验情况，结果显示GBS对万古霉素、头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、青霉素、头孢曲松及左氧氟沙星的敏感率高，分别为100.00%、100.00%、100.00%、95.34%、95.34%、93.02%;对四环素、红霉素、克林霉素和氯霉素敏感率低，分别为23.26%、25.58%、41.86%、65.12%。因此，对于围生期孕妇GBS感染者，可根据药敏实验结果结合临床诊疗，给予敏感率较高的抗菌药物。GBS的耐药机制主要为erm基因介导靶位点修饰及mef基因介导主动外排[13]。本研究中43株阳性分离菌株的D试验结果显示，耐药表型以cMLS表型为主，其次为M型，L型，且未发现iMLS型，因此临床上在使用抗生素时，应避免重复选择大环内脂-克林霉素-链阳霉素类（MLSB）抗生素。本研究检测出19株ermB基因，占比cMLS表型71.43%（15/21），同时表达ermB和ermTR基因的GBS菌有7株，同时表达ermB、ermTR和mef或者ermB、ermTR和linB基因的有4株，说明GBS对大环内脂耐药的机制主要为erm基因介导靶位点修饰，其中ermB为主要耐药基因，且同一菌株可检出多种耐药基因。
　　综上所述，围生期孕妇GBS检出率较高，临床应重视围生期孕妇GBS感染的筛查。GBS分离菌株对红霉素、克林霉素的敏感性较低，对万古霉素、头孢哌酮/舒巴坦的敏感性相对较高。临床应根据药敏实验结果及D抑菌圈实验结果，合理选用抗菌药物，提高治疗的有效性和安全性，有效改善孕妇妊娠结局。
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　　收稿日期：2019-10-27;修回日期：2019-11-27
　　编辑/杜帆
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